血清LPO、APN和TGF-β1水平检测对酒精性肝硬化患者病情严重程度和预后评估的价值

石红 薛小春 王德琴 吕忠美

酒精性肝病(ALD)是因长期大量摄入的乙醇在肝内代谢及并生成其毒性产物，结合肝细胞膜上的蛋白质导致的慢性肝损害伤，主要发病机制至今尚未明确，主要与氧化应激反应、脂质代谢紊乱、细胞损伤和肠道菌群失调等有关[1]。ALD的表现为酒精性脂肪肝(AFL)、酒精性肝炎(AH)和酒精性肝硬化(ALC)，甚至发展到肝病的终末阶段，早期诊断和正确评估显得至关重要[2]。过氧化脂质(LPO)是氧自由基与多聚不饱和脂肪酸反应的产物，能破坏肝细胞膜和抑制免疫功能[3]；脂联素(APN)是一种胰岛素增敏激素，能调节糖脂代谢和肝细胞内皮免疫功能[4]；转化生长因子-β1(TGF-β1)能调节多种细胞的生长、分化、迁移和侵袭，与肝细胞的损害密切相关[5]。本研究探讨血清LPO、APN和TGF-β1水平的联合检测对ALD疾病严重程度和预后评估的临床价值，为ALD的早期诊断、干预治疗和预后评估提供参考依据。

资料与方法

一、一般资料

选择南通大学附属海安医院消化内科2019年1月—2021年6月收治的152例ALD患者，作为研究对象。(1)纳入标准：符合《酒精性肝病基层诊疗指南(2019年)》中的诊断标准[6]；年龄35～70岁，患者知情同意和医学伦理审批。(2)排除标准：非酒精性肝病，病毒性肝炎，自身免疫性肝病，药物性肝损伤，肝胆系统恶性肿瘤、炎症和畸形；全身急慢性炎症，严重糖尿病和心脑血管疾病。根据指南将患者分为AFL组56例，AH组32例，ALC组64例。AFL组中男性53例，女性3例；年龄37～70岁，平均(49.63±5.28)岁。AH组中，男性32例，女性2例；年龄36～69岁，平均(49.47±5.23)岁。ALC组中，男性58例，女性4例；年龄35～68岁，平均(49.56±5.31)岁。三组一般资料比较具可比性(P>0.05)。

二、研究方法

(一)临床分组 (1)不同病情程度分组：将ALC组按照改良Child-Pugh分级标准，分为A级亚组(5～6分)16例，B级亚组(7～9分)27例，C级亚组(≥10分)21例。(2)不同疾病预后分组：按照终末期肝病模型(MELD)评分标准[7]，分为轻度亚组(≤9分)23例，中度亚组(10～19分)25例，重度亚组(≥20分)16例。

(二)检测方法 采集空腹静脉血样进行预处理，使用全自动生化分析仪测定血清总胆红素(TBil)和白蛋白(Alb)水平，采用酶联免疫吸附法测定血清LPO、APN和TGF-β1水平；试剂盒购自上海研生公司，严格按照仪器和试剂盒的说明书进行检测。采用彩超的瞬时弹性成像技术，检测肝脏硬度值(LSM)水平。

(三)分析方法 (1)比较AFL、AH和ALC三组的血清LPO、APN和TGF-β1水平。(2)比较ALC患者中改良Child-Pugh分级3个亚组的血清LPO、APN和TGF-β1水平。(3)比较ALC患者中MELD分级3个亚组的血清LPO、APN和TGF-β1水平。(4)分析ALC患者的血清LPO、APN和TGF-β1水平与血清TBil、Alb和LSM水平之间的相关性。(5)分析单独检测血清LPO、APN、TGF-β1水平和联合检测的诊断效能。

三、统计学方法

采用SPSS 23.0软件处理。计量指标以表示，两组比较采用t检验，多组间比较采用方差分析(F检验)。指标间的相关性采用Pearson相关分析，绘制ROC曲线评价各指标的诊断效能。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、三组LPO、APN和TGF-β1水平比较

ALC组的LPO和TGF-β1水平显著高于AH组和AFL组，呈递增趋势；APN水平显著低于AH组和AFL组，呈递减趋势(P<0.05)。见表1。

表1 三组LPO、APN和TGF-β1水平比较(±s)

二、ALC组不同病情程度亚组LPO、APN和TGF-β1水平比较

ALC组患者三个不同病情程度亚组中，Child-Pugh C级亚组的LPO和TGF-β1水平显著高于B级和A级亚组，呈递增趋势；APN水平显著低于B级和A级亚组，呈递减趋势(P<0.05)。见表2。

表2 ALC组不同病情程度亚组LPO、APN和TGF-β1水平比较(±s)

三、ALC组不同疾病预后亚组LPO、APN和TGF-β1水平比较

ALC组患者三个不同疾病预后亚组中，重度亚组的LPO和TGF-β1水平显著高于中度和轻度亚组，呈递增趋势；APN水平显著低于中度和轻度亚组，呈递减趋势(P<0.05)。见表3。

表3 ALC组不同疾病预后亚组LPO、APN和TGF-β1水平比较(±s)

四、ALC患者LPO、APN和TGF-β1水平与TBil、Alb和LSM水平的相关性

Pearson 相关性分析结果显示，ALC患者的LPO和TGF-β1水平与TBil和LSM水平呈正相关，与Alb水平呈负相关；APN水平与Alb水平呈正相关，与TBil和LSM水平呈负相关(P<0.05)。见表4。

表4 ALC患者LPO、APN和TGF-β1水平与TBil、Alb和LSM水平的相关性分析

五、LPO、APN和TGF-β1水平对ALC患者的评估价值分析

ROC曲线显示，LPO、APN和TGF-β1水平以及三者联合诊断ALC的AUC分别为 0.806、0.784、0.835和 0.928，联合诊断的敏感度和特异度均显著高于任意单项的检测结果(P<0.05)。见表5。

表5 LPO、APN和TGF-β1水平对ALC患者的评估价值分析

讨 论

目前临床上对ALD尚缺乏特效的治疗手段，早期诊断、病情评估和及时给予有效干预，可延缓肝功能的损害和改善疾病预后。改良Child-Pugh分级标准是临床评估肝脏储备功能的常用指标，但不能明确肝纤维化的程度和分期；MELD评分能预测慢性肝病和终末期肝病患者的短期和中期死亡率，可客观评估病情严重程度和疾病预后[7]。因此，本研究将Child-Pugh分级和MELD评分作为反映ALD患者病情严重程度和疾病预后的指标。

有研究报道[8]，乙醇在肝内代谢过程中产生大量的氧自由基，诱导肝脏脂质过氧化反应是ALD患者肝损害伤的重要因素之一。长期大量摄入的乙醇促进机体产生过量活性氧和氧自由基，消耗了大量的抗氧化物质，激活蛋白质和脂质过氧化反应，显著提高机体的氧化应激水平，内毒素和多种生物活性物质诱导和加重肝脏炎症反应，破坏线粒体功能和导致肝细胞变性[9]。本研究显示，ALC组的LPO水平显著高于AH组和AFL组，呈递增趋势(P<0.05)，提示LPO水平随着ALD病情的发展而逐渐升高。栗红江等[10]研究报道，ALC组患者的血清LPO水平显著高于健康人、AFL和AH患者，说明随着ALD病情的加重，血清LPO水平逐渐升高，验证了本研究结果。LPO是ALD患者产生过量的氧自由基导致线粒体内过氧化后，与不饱和脂肪酸产生的过氧化物，降低线粒体膜和提高通透性，从而损伤肝细胞膜生理结构和功能[11]。本研究显示，ALC患者的LPO水平随着Child-Pugh分级标准和MELD评分的增加而逐渐升高(P<0.05)，提示血清提示LPO水平与ALD的病情严重程度和疾病预后呈正相关。

相关研究认为[12]，ALD的发病机制与乙醇导致的脂质代谢紊乱和脂肪组织与肝脏逐渐的相互作用密切相关，其中脂肪因子发挥着重要作用。ALD患者的肝脏代谢紊乱和肝细胞损伤，氧化应激和炎症水平升高导致炎症信号通路调节功能失衡，诱发肝脏脂质代谢紊乱，肝细胞胞浆中的脂滴积累和形态显著增大，肝内脂肪堆积加重，血清甘油三酯和低密度脂蛋白含量明显升高，APN含量降低[13]。本研究显示，ALC组的APN水平显著低于AH组和AFL组，呈递减趋势(P<0.05)，提示LPO水平随着ALD病情的发展而逐渐下降。APN是脂肪细胞分泌的内源性多肽类蛋白质，是目前已知的唯一的脂肪含量呈负相关的脂肪因子，作为调节因子能调控机体脂质代谢，改善胰岛素抵抗和调节糖脂代谢水平[14]。本研究显示，ALC患者的APN水平随着Child-Pugh分级标准和MELD评分的增加而逐渐下降(P<0.05)，提示血清提示APN水平与ALD的病情严重程度和疾病预后呈负相关。赵春娟等[15]研究报道，APN能协调过氧化物酶体增殖物减轻机体的炎症反应，ALC患者的血清APN水平明显低于较健康人群，说明APN的表达的降低参与了ALC疾病的发生和发展发生、发展，与本研究结果一致。

乙醇导致的细胞损伤是ALD的关键驱动因素，肝细胞线粒体是乙醇攻击的首选靶点[16]。乙醇介导的过氧化应激反应使多种氧化物合成增加，降低线粒体呼吸链功能，改变线粒体磷脂生物膜的渗透性；促使线粒体蛋白质高度乙酰化，损害线粒体的DNA合成功能，使肝细胞缺氧加重和启动细胞凋亡程序；激活Kupffer细胞和诱导中性粒细胞炎症浸润，激活肝脏星状细胞(HSC)分泌多种生长因子和胶原纤维，诱发肝纤维化[17]。GF-β1能促进成纤维细胞的转化和生成多种细胞因子，是介导肝损伤和肝纤维化的最关键的细胞因子之一[18]。本研究显示，ALC组的TGF-β1水平显著高于AH组和AFL组，呈递增趋势(P<0.05)，提示TGF-β1水平随着ALD病情的发展而逐渐升高。国外文献报道[19]，肝纤维化患者血清TGF-β1水平呈高表达，与肝功能下降和肝纤维化程度呈正相关，与本研究结果一致。肝纤维化的发生和发展发生、发展，与HSC的激活和细胞外基质(ECM)产生降解失调密切相关，TGF-β1等细胞因子是启动精息静息状态HSC激活和转化的初始信号，诱导肝纤维化发生和进展[20]。本研究显示，ALC患者的TGF-β1水平随着Child-Pugh分级标准和MELD评分的增加而逐渐升高(P<0.05)，提示血清提示TGF-β1水平与ALD的病情严重程度和疾病预后呈正相关。陈芳等[21]研究报道，肝硬化患者的血清TGF-β1水平高于健康者，且随着Child-Pugh分级的升高而递增，与其他肝纤维化标志物呈正相关，可作为评估肝硬化病情严重程度和判断预后的可靠指标。

TBil反映肝脏的胆红素代谢水平和胆汁淤积程度，血清水平升高提示肝脏代谢功能障碍；Alb反映肝脏的合成功能，血清水平下降提示肝脏储备功能减退和预后不良。LSM为非创伤性检测方法，能直观反映肝损伤和肝纤维化程度，与肝硬化的严重程度呈正相关[22]。本研究经Pearson 相关性分析结果显示，ALC患者的LPO和TGF-β1水平与TBil和LSM水平呈正相关，与Alb水平呈负相关；APN水平与Alb水平呈正相关，与TBil和LSM水平呈负相关，提示ALC患者的病情越严重和预后越差，LPO和TGF-β1水平越高，APN水平越低，在一定程度上可反映ALC患者的病情严重程度和疾病预后，这与栗红江[10]、赵春娟[15]和陈芳等[21]研究的结果相符。

本研究经过进一步采用ROC曲线分析显示，对ALC患者采用LPO、APN和TGF-β1水平以及三者联合检测的AUC分别为 0.806、0.784、0.835和 0.928，提示LPO、APN和TGF-β1三种指标联合检测的效能显著高于任一单项检测，对ALC患者病情严重程度和疾病预后的预测价值较高。

综上所述，ALC患者的LPO、APN和TGF-β1与病情严重程度和疾病预后显著相关，联合检测对早期诊断、临床治疗和预后评估的临床价值较高。当然，本研究也存在一些不足，比如样本量相对较小、未能对个体差异和治疗方案的分组不细等，以待在进一步研究中证实。

利益冲突声明：所有作者均声明不存在利益冲突。