血清闭锁蛋白和闭锁小带蛋白1表达与老年急性脑梗死患者认知功能障碍的相关性

王景 董坤 陈海云 杨青兰 (三亚中心医院神经内科，海南 三亚 572000)

急性脑梗死是由脑组织内部缺血而引起的神经功能障碍性疾病，多发于老年人，发病率呈逐年上升的趋势，发病突然、进展迅速、致残致死率高，若未及时治疗，往往可引发认知功能障碍、偏瘫等并发症〔1～3〕。因此，及时对老年急性脑梗死患者认知功能进行有效评估对该病的治疗及预后改善具有重大的指导意义。炎症与急性脑梗死的发生密切相关，临床上常通过检测炎性因子监测病情〔4,5〕。闭锁蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白(ZO)-1与细胞间紧密连接有关，在大多疾病的炎性反应及免疫反应中起重要作用，且与血管内皮功能关系密切〔6,7〕。但关于血清occludin、ZO-1与老年急性脑梗死患者认知功能障碍关系的研究鲜见报道。故本研究通过检测老年急性脑梗死患者血清occludin、ZO-1水平，并初步探讨其与认知功能的相互关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年7月至2020年10月三亚中心医院神经内科就诊的老年急性脑梗死患者70例(观察组)，平均脑梗死面积(4.1±0.4)cm2，脑梗死部位额叶27例，颞叶24例，其他位置19例，年龄60～73岁，平均(67.20±4.52)岁，其中男36例，女34例，平均心率(92.35±4.56)次/min，平均动脉压(97.54±4.82)mmHg，平均体重指数(21.85±2.35)kg/m2。另选取同期三亚中心医院健康体检者70例(对照组)，其中男39例，女31例，年龄60～72岁，平均(66.13±4.10)岁，平均心率(77.32±3.94)次/min，平均动脉压(85.67±4.96)mmHg，平均体重指数(22.17±2.42)kg/m2。急性脑梗死后认知功能障碍：参照2006年美国国立神经疾病和脑卒中研究所-加拿大脑卒中网(NINDS-CSN)〔8〕建立的关于血管源性认知功能障碍的统一标准。纳入标准：①患者均符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》〔9〕中的相关诊断标准。②临床资料完整。③发病48 h内入院。排除标准：①急性脑梗死发病前即存在认知功能障碍患者。②合并严重心理障碍、语言功能障碍、躯体疾病患者。③合并严重心、肝、肾等器官或内分泌系统疾病患者。④合并其他影响中枢神经系统疾病或脑外伤史患者。⑤合并颅内出血或有出血倾向患者。⑥合并血液系统疾病患者。患者及其家属知情同意，并签署同意书。本研究经三亚中心医院伦理委员会批准通过。两组年龄、性别及平均体重指数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。观察组平均动脉压、平均心率明显高于对照组(P<0.001)。

1.2血清occludin、ZO-1水平检测 所有研究对象采集静脉血5 ml，2 500 r/min离心10 min，取上层血清，-80℃保存。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清occludin、ZO-1水平，实验步骤严格按照occludin ELISA试剂盒(批号：JL19530-48T，上海江莱生物科技有限公司)、ZO-1 ELISA试剂盒(批号：ml058798，上海酶联生物科技有限公司)说明书进行。

1.3认知功能障碍评估 研究对象均于发病48 h内进行认知功能障碍评估。神经功能缺损情况采用美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评估，分值越高，神经功能损伤越严重〔10〕。认知功能障碍情况采用蒙特利尔认知评价(MoCA)量表评估，总分30分，26分及以上为正常〔11〕。

1.4统计学方法 采用SPSS22.0软件进行t检验、χ2检验、Pearson相关分析，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清occludin和ZO-1对老年急性脑梗死的诊断价值，采用Logistic回归进行影响因素分析。

2 结 果

2.1观察组与对照组血清occludin、ZO-1水平比较 观察组血清occludin、ZO-1水平明显低于对照组(P<0.05)。见表1。

2.2观察组与对照组NIHSS评分、MoCA评分比较 观察组NIHSS评分明显高于对照组，MoCA评分明显低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 观察组与对照组血清occludin、ZO-1、NIHSS评分、MoCA评分水平比较

2.3老年急性脑梗死患者血清occludin、ZO-1水平与NIHSS评分和MoCA评分的相关性 老年急性脑梗死患者血清occludin水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.594，P<0.001)，与MoCA评分呈正相关(r=0.556，P<0.001)；血清ZO-1与NIHSS评分呈负相关(r=-0.560，P<0.001)，与MoCA评分呈正相关(r=0.551,P<0.001)。

2.4血清occludin和ZO-1对老年急性脑梗死的诊断价值 血清occludin诊断老年急性脑梗死的曲线下面积为0.885(95%CI：0.824～0.945，P<0.001)，截断值为41.152 ng/ml，敏感度为92.9%，特异度为77.1%。血清ZO-1诊断老年急性脑梗死的曲线下面积为0.666(95%CI：0.574～0.758，P<0.001)，截断值为33.670 ng/ml，敏感度为81.4%，特异度为55.7%。血清occludin、ZO-1联合诊断老年急性脑梗死的曲线下面积为0.928(95%CI：0.885～0.970，P<0.001)，敏感度为90.0%，特异性为84.3%。见图 1。

图1 血清occludin和ZO-1对老年急性脑梗死的诊断价值

2.5影响老年急性脑梗死患者认知功能障碍的Logistic回归分析 以血清occludin和ZO-1均值为

界限，分为高表达和低表达，以血清occludin和ZO-1表达水平为自变量，以老年急性脑梗死患者是否发生认知功能障碍为因变量，进行Logistic回归分析，经校正混杂因素后结果显示，血清occludin和ZO-1低表达均为影响老年急性脑梗死患者认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 影响老年急性脑梗死患者认知功能障碍的Logistic回归分析

3 讨 论

脑梗死多发于老年群体，致病原因复杂。急性脑梗死是多种外界、自身因素共同作用的结果，发病率、病死率、致残率均较高，且随着疾病的进展，会引起一定程度的神经功能损伤和认知功能减退，患者预后差，极大地降低了生活质量〔12，13〕。刘琦等〔14〕研究指出，与健康者比较，老年急性脑梗死患者NHISS评分明显升高、MoCA评分明显降低，患者认知功能障碍程度较高。本研究结果提示老年急性脑梗死患者可能存在较严重的认知功能障碍。

炎性反应与急性脑梗死后继发神经损伤密切相关，炎性因子水平表现为明显的升高趋势，在认知功能障碍发生及发展中发挥重要作用〔15,16〕。occludin、ZO-1均是紧密连接蛋白的主要成分。occludin能够参与机体内的炎性反应和免疫反应。ZO-1在调节细胞物质转运、细胞增殖分化等过程中发挥重要作用〔17,18〕。吴晌犊〔19〕研究表明，溃疡性结肠炎患者血清occludin和ZO-1水平明显降低，在该疾病的炎性反应及免疫反应中起重要作用。紧密连接是由跨膜蛋白、外周膜蛋白和细胞骨架蛋白等多种蛋白组成的复合体，构成环绕细胞的线状结构，维持紧密连接的结构和功能。紧密连接具有复杂架构的动态结构，是形成血液与大脑之间血脑屏障的主要结构成分〔20〕。occludin可调控紧密连接的通透性、维持细胞极性，表达于各种细胞和组织中，且表达量较其他血管内皮细胞明显升高，并具有调节血脑屏障功能的作用〔21〕。ZO-1表达于各种组织和细胞中，主要作用是维持细胞组织的连接性，与其同源异构体ZO-2、ZO-3一起维持和调节上皮屏障功能，与血脑屏障损伤有着较为密切的关系，可作为血脑屏障破坏的标志性蛋白〔22，23〕。相关研究指出，occludin、ZO-1相互作用有助于紧密连接屏障的调节，能够调节血脑屏障的通透性，且二者表达量多少与血管的通透性增加与否密切相关〔24〕。

本研究结果表明血清occludin、ZO-1可能通过在机体炎性反应和免疫反应中发挥作用，进而参与老年急性脑梗死的发病机制，并发挥其调节血脑屏障功能的作用，在老年急性脑梗死继发认知功能障碍的过程中承担重要角色。本研究ROC曲线分析结果表明血清occludin、ZO-1水平对老年急性脑梗死具有一定的诊断价值，能够在一定程度上提示该疾病的发生。二者联合检测对老年急性脑梗死的诊断价值更高。本研究Pearson相关分析结果表明血清occludin、ZO-1水平变化与老年急性脑梗死患者发生认知功能障碍存在一定相关性，其水平降低提示老年急性脑梗死患者发生认知功能障碍的风险较大，二者可能作为老年急性脑梗死诊断和评估认知功能障碍的辅助指标。本研究经校正混杂因素后，Logistic回归分析结果也进一步说明血清occludin和ZO-1表达水平与老年急性脑梗死患者认知功能障碍密切相关。