血清E-cadherin、VEGF、nm23-H表达在同步放化疗的中晚期子宫颈鳞癌患者中的临床意义

邱华英，曾 程，王小波

(1.浙江金华广福肿瘤医院 检验科，浙江 金华 321000；2.杭州艾迪康医学检验中心，浙江 杭州 310030)

目前，以顺铂为基础的同步放化疗方案是治疗中晚期子宫颈癌的首选，但仍有部分患者对放化疗反应性低[1]。近年来发现，肿瘤自身对同步放化疗的敏感性是影响疗效的关键因素[2-3]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)为促血管生成及淋巴管形成的重要因子，在子宫颈癌发生、进展及侵袭过程中有着关键作用[4]。上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)为钙依赖型粘附分子，在维持上皮细胞正常形态及连接中起到重要作用，其低表达或表达缺失均与肿瘤侵袭、转移有明显关联[5]。肿瘤转移抑制基因(nm23-H)在较多恶性肿瘤中均呈明显低表达，在抑制肿瘤转移中有一定的作用[6]。本研究回顾性分析100例中晚期子宫颈鳞癌患者的临床资料，探讨中晚期子宫颈鳞癌患者同步放化疗前后血清VEGF、E-cadherin、nm23-H表达水平的变化及意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 回顾性收集2016年1月—2019年12月浙江金华广福肿瘤医院收治的中晚期子宫颈鳞癌患者100例的临床资料。纳入标准：①经病理确诊；②国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅱb—Ⅲ b期[7]；③入组前未接受任何抗肿瘤治疗；④接受同步放化疗；⑤临床及随访资料完整；⑥患者知情同意。排除标准：①心肝肾肺器质性功能障碍；②同时有其他恶性肿瘤；③远处器官转移；④自身免疫性功能障碍；⑤合并脑血管疾病；⑥无法配合治疗；⑦对研究用药过敏；⑧合并全身急慢性感染。本研究经医院伦理委员会批准。入组患者年龄40～69岁，平均(48.91±5.78)岁；FIGO分期：Ⅱ b期40例，Ⅲa期34例，Ⅲ b期26例；肿瘤直径：≤4 cm 58例，>4 cm 42例；盆腔淋巴结转移36例。

1.2 治疗方法 所有患者入院后均接受同步放化疗治疗，放疗采用体外联合腔内放疗的方式，采用6～15 MV X线直线加速器，先行全盆照射，剂量1.8～2.0 Gy/次，5次/周，总剂量30 Gy；后改为盆腔四野照射，1.8～2.0 Gy/次，4次/周，总剂量25 Gy，并交替行192Ir后装腔内放疗，6 Gy/次，总剂量36～42 Gy，1次/周，共放疗6～7次，腔内放疗当日不行体外放疗。放疗同时行顺铂(山东凤凰制药股份有限公司生产，国药准字H20056422)单药化疗，40 mg/m2，1次/周，共化疗4～6次。

1.3 观察指标

1.3.1 血清E-cadherin、VEGF、nm23-H mRNA水平 治疗前、治疗3个月后，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清E-cadherin、VEGF水平，采用荧光定量聚合酶链式反应法(RT-PCR)测定血清nm23-H mRNA表达情况。E-cadherin试剂盒购自晶美生物工程有限公司，VEGF试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，均严格参照试剂使用说明进行操作，Bio-Rad Model 550型酶标仪(购自美国Bio-Rad公司)读取光密度值，并绘制标准曲线获得E-cadherin、VEGF浓度。RNA提取、逆转录反应试剂盒及RT-PCR引物均购自大连宝生物工程有限公司，提取总RNA，nm23-H引物序列：上游：5'-AGGGCAGACCACATTGCTTTTC-3'，下游：5'-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3'，长度185 bp；内参β-actin上游引物；5'-GCTGGGAGGAAGCATTTTTAATC-3'，下游：5'-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3'，长度186 bp。RT-PCR反应条件：95 ℃预变性10 min，1个循环，95 ℃变性15 s，60 ℃退火/延伸1 min，循环45次，以目的基因/内参基因表达量作为nm23-H mRNA相对表达量。

1.3.2 疗效评定 治疗3个月后，参照实体瘤疗效标准[8]评定近期疗效。完全缓解(CR)：可测病灶消失，且持续超过4周；部分缓解(PR)：肿瘤最大直径及最大垂直径线乘积缩小超过50%，且维持超过4周；稳定(SD)：肿瘤最大直径及最大垂直径线乘积缩小不超过50%或增大不超过25%；进展(PD)：肿瘤最大直径及最大垂直径线乘积增大超过25%或有新病灶出现。PR+CR的患者为治疗敏感，SD+PD的患者为治疗抗拒。

1.3.3 复发和转移 所有患者完成为期1年的随访调查，以门诊复查或电话随访的形式，了解肿瘤进展情况，包括复发、转移。

2 结果

2.1 临床资料 入组患者治疗3个月后，治疗敏感77例，包括CR 34例、PR 43例；治疗抗拒23例，包括SD 17例、PD 6例；2组年龄、肿瘤大小、分期的差异均无统计学意义(P>0.05)，治疗抗拒组淋巴结转移比例高于治疗敏感组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 治疗敏感和治疗抗拒患者的基线资料比较

2.2 不同分期患者放化疗前后血清E-cadherin、VEGF、nm23-H的比较 治疗前，子宫颈癌Ⅲ期患者的血清E-cadherin、nm23-H低于Ⅱb期者，VEGF高于Ⅱb期者；治疗3个月后，各分期患者的E-cadherin、nm23-H上升，VEGF降低，Ⅲ期患者血清E-cadherin、nm23-H低于Ⅱb期者，VEGF高于Ⅱb期者；差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同分期子宫颈癌患者同步放化疗前后血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较

2.3 不同疗效子宫颈癌患者的血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较 治疗敏感组患者的血清E-cadherin、nm23-H 水平高于治疗抗拒组，VEGF水平低于治疗抗拒组，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同疗效患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较

2.4 不同随访结局患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较 100例患者均完成1年随访，随访期间复发8例、淋巴结转移11例、累积肿瘤进展19例，肿瘤进展患者血清E-cadherin、nm23-H水平低于未进展者，VEGF水平高于未进展者，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 不同随访结局患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H水平比较

2.5 子宫颈癌患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H表达相关性分析 Pearson相关分析结果显示，E-cadherin与VEGF、nm23-H(r=-0.178、0.007)、VEGF与nm23-H(r=0.024)均无显著相关性(均P>0.05)，见图1。

图1 中晚期子宫颈癌患者血清E-cadherin、VEGF、nm23-H表达的相关性分析散点图

3 讨论

Liu等[9]研究认为，肿瘤新生血管生成与子宫颈癌生物学行为及治疗反应存在密切联系。VEGF为特异性较高的促血管生成因子，以旁分泌的形式特异性作用于血管内皮细胞，刺激血管及淋巴微管，不仅可促进肿瘤内新生血管生成，同时可为癌细胞远处转移创造条件[10-11]。本研究结果显示，中晚期子宫颈鳞癌患者同步放化疗前血清VEGF水平较高，放化疗后不同分期子宫颈癌患者VEGF均明显降低，治疗敏感组血清VEGF水平低于治疗抗拒组，随访肿瘤未进展患者血清VEGF水平低于进展者，提示中晚期子宫颈鳞癌患者血清VEFG水平与临床分期、同步放化疗敏感性及肿瘤复发、转移均存在一定的关联，与苏文芳[12]研究结论一致。分析原因可能为：VEGF对肿瘤新生血管形成起促进作用，VEGF高表达可诱导内皮细胞增殖，促进基质细胞分泌大量基质金属蛋白酶，为肿瘤生长提供营养物质，同时促成癌细胞穿透血管壁进入血循环，增加癌细胞侵袭性，导致肿瘤增殖、浸润及转移，抑制细胞损伤修复，降低对同步放化疗的敏感度。

Cadherin为典型钙黏附素，系介导同类细胞互相黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白，是维持正常细胞连接的关键分子，对维持正常上皮细胞形态及完整性有重要作用[13]。本研究发现，同步放化疗前，中晚期子宫颈鳞癌患者血清E-cadherin水平较低，且Ⅲ期子宫颈癌E-cadherin水平低于Ⅱb期；同步放化疗后，患者血清E-cadherin水平上升，以Ⅱb期患者上升更突出，且治疗敏感组E-cadherin上升幅度较治疗抗拒组高，随访肿瘤未进展者血清E-cadherin水平高于肿瘤进展者，提示E-cadherin可能参与子宫颈鳞癌发病过程，可能为影响子宫颈鳞癌放化疗敏感性及肿瘤浸润、转移的相关因素，推测E-cadherin对子宫颈癌疗效的影响主要与肿瘤细胞发生间质上皮转化有关，促使间质上皮转化的癌细胞迁移至其他组织，逃离放疗辐射及化疗药效作用，经转化形成转移灶，降低同步放化疗反应性，导致肿瘤侵袭、转移。

nm23-H基因为肿瘤转移抑制基因，与原癌基因作用相反，可抑制细胞增殖及分化，其功能丧失可引起正常细胞恶性转化[14]。本研究发现，同步放化疗前中晚期子宫颈鳞癌患者血清nm23-H表达水平较低，Ⅲ期低于Ⅱb期，经同步放化疗后，患者血清nm23-H水平上升，Ⅱb期上升幅度高于Ⅲ期，且以治疗敏感组及随访肿瘤未进展患者的nm23-H上升幅度更高，提示nm23-H与子宫颈鳞癌发病、治疗反应及肿瘤浸润、转移存在紧密联系，低nm23-H表达通常提示治疗反应低及不良预后，考虑可能原因为：低mm23-H表达肿瘤负调控作用削弱或降低，对细胞分裂素活化蛋白激酶抑制作用丧失，提升其增殖活性，导致癌细胞增殖、分化、侵袭、转移；而放化疗均通过直接或间接损伤DNA，阻滞细胞增殖达到控制肿瘤细胞生长的目的，nm23-H、E-cadherin低表达及VEGF高表达的子宫颈癌患者肿瘤恶性程度高，癌细胞增殖活性强、血管生成活跃，影响同步放化疗效果。但进行相关性分析发现，三者间无明显相关性，考虑三种因子可能通过不同的生物学途径影响放化疗效果，并参与子宫颈癌进展过程，对其确切机制尚待进一步研究。

综上所述，中晚期子宫颈鳞癌患者血清E-cadherin、nm23-H呈低表达，VEGF呈高表达，临床分期较差的子宫颈鳞癌患者血清E-cadherin、nm23-H表达更低，VEGF表达更高，且三者均与患者同步放化疗治疗反应及肿瘤复发、转移有关，有望作为评估患者同步放化疗疗效及预测肿瘤复发、转移的新方向。