CD24、β-连环蛋白在卵巢癌及癌前病变患者组织中的表达及临床意义

刘海英，桂晓凤，姜家英

(安康市中医医院产科，陕西 安康 725000)

在妇科恶性肿瘤中，卵巢癌的致死率及发病率均位居前列，相关调查研究显示，每年约有24万人被确诊为卵巢癌，且卵巢癌患者 5年的生存率仅达到45%左右，严重威胁女性健康[1-2]。卵巢癌患者中以上皮性卵巢癌最为常见，临床常见病理类型主要有浆液性卵巢癌、黏液性卵巢癌[3]。患者发病初期，临床病理特征较为隐匿，不易被发觉，漏诊率较高，确诊时往往已经到达晚期，腹膜转移、淋巴转移等情况频繁出现，转移的癌细胞进入腹膜腔进而侵入器官，造成癌细胞转移，形成继发性病变[4-5]。临床治疗主要以手术、放疗、化疗为主，但患者病灶清除不够完全，预后较差，生存率较低，易复发[6]。早期对卵巢癌患者的筛查主要是妇科超声以及血清肿瘤标志物(CA-125、HE4等)，但超声检查易漏诊，血清肿瘤标志物在良性肿瘤和绝经后女性中的表达水平也会出现异常表达，因此，寻找更加敏感的生物标志物对卵巢癌患者的早期诊疗具有重要意义[7-8]。

CD24作为一种糖蛋白，其异常高表达与许多恶性肿瘤的发生发展均存在显著关联，能够与唾液酸连接；免疫球蛋白样凝集素-10(Siglec-10)是一种跨膜受体蛋白，能够识别唾液酸配体，因此Siglec-10会与CD24进行结合，进而使得免疫细胞受到抑制，加速肿瘤细胞的免疫逃逸[9]。当Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路未激活时，β-catenin与肿瘤抑制因子及酪蛋白激酶形成复合蛋白促进β-catenin降解，同时也会与胞质尾部结合阻止下游激活；当该通路被激活后，Wnt会与卷曲蛋白受体及LRP5/6形成复合体阻止β-catenin降解[10]。EN2属于一种转录蛋白，是同源异型盒基因家族的成员之一，能够通过参与激活Wnt /β-catenin信号通路调控癌细胞的增殖[11]。本文主要是探究CD24、β-catenin在卵巢癌及癌前病变患者中的表达情况，并分析其与卵巢癌患者临床特征的关联性，为患者的早期诊疗提供参考价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 研究对象选取2019年4月至2022年4月在本院就诊并进行治疗的40例良性卵巢肿瘤患者(A组)，40例交界性卵巢肿瘤患者(B组)，60例卵巢癌患者(C组)，并选取同期60例体检的健康女性患者作为正常组患者(N组)。其中A组年龄41～69岁，平均(52.85±6.29)岁；B组年龄44～69岁，平均(55.48±6.54)岁；C组年龄36～74岁，平均(53.20±7.07)岁；N组39～69岁，平均(53.43±7.45)岁，四组患者年龄比较无统计学差异(P>0.05)，具有可比性。本研究所选取实验标本及病理切片，均由医院医学伦理委员会审批通过。病例纳入标准：①研究所取标本均经临床病理检查诊断确诊；②所有研究对象临床资料完整且同意进行本研究；③病例患者均为首发病例；④患者配合度较高。排除标准：①存在其他恶性肿瘤患者；②纳入研究前接受过放、化疗及免疫治疗患者；③合并有严重的脏器功能障碍患者；④妊娠期以及哺乳期患者；⑤存在意识障碍或理解、沟通能力差患者；⑥不积极配合本研究患者。

1.2 研究方法 取研究对象的组织样本，并采用免疫组化染色的方法测定各蛋白在不同组研究对象组织中的表达情况，测定结果由两名工作经验丰富的病理科医师进行评定。将所有组织样本放入固定液中浸泡24 h后充分冲洗，使用不同梯度的乙醇溶液进行脱水处理，采用石蜡包埋后进行连续切片(厚度4 μm)。将切片标本依次进行烤片、脱蜡、复水、水化、抗原修复处理，之后在组织切片上加入相应第一抗体于4 ℃冰箱中放置24 h，冲洗后加入二抗增强剂室温静置20 min，之后再次冲洗并加入二抗于室温放置30 min，最后冲洗结束后加入显色液进行显色，采用苏木素进行复染，脱水封片后置于显微镜下分析。研究过程中所用的兔抗人CD24单克隆抗体(ab202073)、兔抗人Siglec-10单克隆抗体(ab198724)、兔抗人EN2单克隆抗体(ab227167)、兔抗人β-catenin单克隆抗体(ab32572)均购自美国abcam 贸易有限公司，免疫组化检测试剂购自南京迈克沃德生物科技有限公司，免疫组化封闭液和相应的试剂盒购自北京康药科技有限公司。

分析整理所有卵巢癌患者的临床资料，主要包括年龄、病理类型、临床分期、组织分化以及是否存在淋巴转移，分析CD24、β-catenin表达情况与临床病理特征之间存在的关联性。

1.3 研究指标 观察CD24、β-catenin与相关蛋白Siglec-10、EN2在各组研究对象组织中的表达情况，同时分析CD24、β-catenin表达与卵巢癌患者临床特征间的关联性；并对 CD24与Siglec-10、β-catenin与EN2表达的相关性进行分析。

2 结 果

2.1 CD24、β-catenin、Siglec-10、EN2在四组患者组织中的表达情况 A组、B组、C组、N组四组研究对象中，CD24阳性表达率分别为22.50%、57.50%、85.00%、6.67%；β-catenin阳性表达率分别为27.50%、67.50%、81.67%、10.00%；Siglec-10阳性表达率分别为25.00%、65.00%、88.33%、8.33%，EN2阳性表达率分别为35.00%、62.50%、78.33%、10.00%，且组间比较差异有统计学意义(均P<0.05)，见表1。

表1 CD24、β-catenin、Siglec-10、EN2在四组患者组织中的表达情况[例(%)]

2.2 CD24与卵巢癌患者临床特征间的关联性分析 CD24表达在卵巢癌患者年龄、病理类型方面比较均无统计学差异(均P>0.05)；在临床分期、淋巴结转移方面比较存在统计学差异(均P<0.05)，在组织分化方面，高分化患者与低分化患者间比较存在统计学差异(P<0.05)，见表2。

表2 CD24与卵巢癌患者临床特征间的关联性分析(例)

2.3 β-catenin与卵巢癌患者临床特征间关联性分析 β-catenin表达在卵巢癌患者年龄、病理类型、临床分期及淋巴结转移方面比较无统计学差异(均P>0.05)，在组织分化方面，高分化患者与低分化患者间比较存在统计学差异(均P<0.05)，见表3。

表3 β-catenin与卵巢癌患者临床特征间关联性分析(例)

2.4 卵巢癌患者组织中CD24与Siglec-10、β-catenin与EN2 表达的相关性 Spearman 相关性分析结果显示，对于卵巢癌患者而言，组织中CD24与Siglec-10、β-catenin与EN2 表达均呈现正相关性(r=0.865，P=0.000；r=0.901，P=0.000)，见表4、5。

表4 卵巢癌患者组织中CD24与Siglec-10、β-catenin与EN2 表达的相关性(例)

表5 卵巢癌患者组织中β-catenin与EN2 表达的相关性分析(例)

3 讨 论

随着肿瘤分子生物学的发展及靶向治疗方法的不断突破，卵巢癌患者的临床疗效及预后虽有好转，5年生存率虽有提高，但仍为达到理想效果，晚期卵巢癌患者的生存率并未得到显著改善[12-13]。明确卵巢癌的具体发病机制，寻找更为敏感的致病相关基因对患者的早期诊疗及尽早采取适当的干预措施具有积极的参考作用。

肿瘤细胞表面不仅存在肿瘤相关抗原、钙网蛋白、内质网伴侣等多种吞噬信号，同时也存在CD24、CD47、β2-微球蛋白及PD-L1等多种抗吞噬信号。CD24能够通过与Src激酶进行连接来参与肿瘤细胞的侵袭及增殖。当CD24与Siglec-10结合后，正常的吞噬细胞作用不能够完全清除肿瘤细胞，进而使得肿瘤细胞逃逸，间接加速的肿瘤细胞的增殖分化[14-15]。在很多恶性肿瘤细胞的增殖分化过程中，β-catenin均扮演着重要的角色，Wnt/β-catenin通路主要是通过对下游基因的转录表达进行调控来参与肿瘤细胞增殖分化、侵袭以及转移等[16]。相关研究显示，下调β-catenin的表达对卵巢癌细胞的增殖能够起到抑制作用，Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌的机制一方面是增加原癌基因的转录，另一方面是介导抗凋亡基因的表达[17-18]。临床研究显示，EN2能够激活Wnt信号传导通路中的β-catenin表达，促进原癌基因的转录，进而加速癌细胞增殖分化[11]。本研究结果显示，CD24、β-catenin以及相关蛋白Siglec-10与EN2 在卵巢癌及癌前病变患者中的阳性表达率由低到高依次为对照组、良性卵巢肿瘤组、交界性卵巢肿瘤组、卵巢癌组，提示随着患者组织病变程度的加深，CD24、β-catenin、Siglec-10与EN2的表达均上调，说明CD24、β-catenin、Siglec-10与EN2表达与卵巢病变存在显著关联，它们均直接或间接参与了癌前病变到卵巢癌的发展过程，对患者早起诊疗能够起到预警作用。

通过对卵巢癌患者CD24、β-catenin表达与其临床病理特征之间的关联性进行分析，发现其表达与患者组织分化存在显著关联，同时CD24表达与患者临床分期、淋巴结转移也存在显著关联，说明它们对卵巢肿瘤的的增殖、侵袭以及转移起到了一定的促进作用，与其在卵巢癌及癌前病变中的表达呈现一致性[19]。进一步分析卵巢癌患者组织中 CD24与Siglec-10、β-catenin与EN2 表达的相关性，得知CD24与Siglec-10、β-catenin与EN2 表达均呈现显著正相关，提示Siglec-10与CD24结合进而调控卵巢癌细胞的增殖分化，同时EN2 能够通过调控 Wnt/β-catenin 通路来调控卵巢癌细胞的增殖分化，但具体作用机制尚无明确定论，后续可进行更深层次的探究[20]。

综上所述，对于卵巢癌患者而言，随着患者病变程度的加深，CD24、β-catenin的表达呈现上调趋势CD24，相关蛋白Siglec-10、EN2的表达也呈现上调趋势；同时CD24的表达与患者临床分期、组织分化及淋巴结转移均存在显著关联，β-catenin的表达与患者组织分化存在显著关联。此外，卵巢癌患者组织中CD24与Siglec-10、β-catenin与EN2 表达均呈现正相关性，为临床诊疗提供了参考价值。