脑胶质瘤组织中肿瘤坏死因子与MG-Ags的表达及其临床意义

韩向阳 张红星 贾乐

(1.宜川县医院神经外科，陕西 宜川 716200；2.西北大学附属西安高新医院神经内三科，陕西 西安 710000；3.宝鸡市中医医院病理科，陕西 宝鸡 721001)

脑胶质瘤是一类基因、组织和临床特征存在异质性的颅内原位肿瘤，也是常见的脑部肿瘤，占颅内原位肿瘤的40.0%左右。影像学为脑胶质瘤的重要检查方法，但是很难明确患者的病情，且主观性比较强。当前随着分子生物学研究的逐渐深入，脑胶质瘤的研究逐渐向分子病理学方向发展，特别是当前脑胶质瘤的基因治疗方法与诊断方法也已经取得了比较好的效果[1]。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)为比较常见的炎性标志物，能加快肿瘤细胞的增殖并抑制肿瘤细胞的凋亡[2]。胃癌抗原(MG-Ags)的表达水平与胃炎、胃癌的发展密切相关，当前也是其他各种恶性肿瘤的重要标志物，比如MG-Ags在血液恶性疾病与消化道恶性疾病中呈现高表达状况，并参与凋亡、侵袭、增殖、转移等生物学过程[3]。本文旨在探讨脑胶质瘤组织中TNF-α与MG-Ags的表达及其临床意义，希望寻找脑胶质瘤潜在治疗靶点，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年8月至2021年5月在本院诊治的脑胶质瘤患者66例，其中男35例，女31例；年龄22～74岁，平均(55.62±4.18)岁；临床分期：Ⅰ期+Ⅱ期42例，Ⅲ期+Ⅳ期24例；组织学分化：高分化6例，中分化25例，低分化35例；肿瘤转移35例；病理类型：星形细胞瘤36例，胶质母细胞瘤30例。纳入标准：病理诊断为脑胶质瘤；首次手术并且术前未接受任何形式的抗肿瘤治疗；年龄20～75岁；临床资料完整；医院伦理委员会批准了此次研究；患者签署了知情同意书。排除标准：合并其他脑部疾病的患者；患有其他严重急危重症病的患者；妊娠与哺乳期妇女；合并其他部位肿瘤者；小学及其以下文化水平者。

1.2方法 (1)标本取样： 所有患者均接受手术治疗，术中留取脑胶质瘤组织(癌灶组)及癌旁组织(癌旁组，距癌组织3 cm处)。抗TNF-α抗体、抗MG-Ags抗体均购自上海优宁维生物科技股份有限公司，免疫组化检测试剂盒购自上海生工公司，总RNA提取试剂购自大连TAKARA公司。将所有组织标本分为两部分，一部分置于10%福尔马林液中固定，另一部分保存于1.5 mL EP冻存管并投至液氮中速冻。(2)荧光定量PCR检测：提取组织中的总RNA，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α与MG-Ags mRNA相对表达水平，检测体系为25 μL，其中样品量为5 μL。逆转录后TNF-α与MG-Ags反应体系：95℃预变性5 min，92℃变性60 s，55.0℃退火45 s，共40个循环，用(目的基因的吸光度值)/(β-actin 吸光度值)代表TNF-α与MG-Ags的mRNA相对表达水平。(3)Western-blot检测：将组织样本研磨后，使用RIPA进行裂解、匀浆，3 000 rpm/min离心30 min后弃沉淀，使用考马斯亮蓝法定量上清液蛋白浓度，以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白后，TBST封闭1 h，加入抗TNF-α抗体与抗MG-Ags抗体，工作浓度都为1：500，4℃过夜保存，TBST洗涤后，加入二抗(工作浓度1：2000)，TBST洗涤后进行化学发光试剂自显影，记录与计算TNF-α与MG-Ags的蛋白相对表达水平。

2 结 果

2.1TNF-α、MG-Ags的mRNA与蛋白相对表达水平对比 癌灶组TNF-α与MG-Ags的mRNA相对表达水平均高于癌旁组(t=9.913、12.482，P<0.05)，癌灶组的TNF-α与MG-Ags 蛋白相对表达水平高于癌旁组(t=12.733、9.783，P<0.05)。见表1。

表1 TNF-α、MG-Ags的mRNA与蛋白相对表达水平对比

2.2不同病理特征脑胶质瘤组织的TNF-α与MG-Ags 蛋白相对表达水平对比 在癌灶组中，不同临床分期、组织学分化、肿瘤转移的TNF-α与MG-Ags蛋白相对表达水平对比差异均有统计学意义(t=10.933、13.823，10.088、12.742，21.848、17.773，P<0.05)。见表2。

表2 不同病理特征脑胶质瘤组织的TNF-α与MG-Ags蛋白相对表达水平对比

2.3诊断价值分析 ROC曲线显示TNF-α、MG-Ags与联合检测诊断脑胶质瘤的曲线下面积分别为0.782、0.814和0.867，诊断敏感性分别为86.2%、85.8%、90.2%，特异性分别为80.2%、81.3%、88.6%。

3 讨 论

肿瘤的发生发展与炎性反应关系密切，其中TNF-α具有促炎作用，在肿瘤转移、侵袭过程中发挥重要作用[4]。其中肿瘤体内TNF-α来源并不单一，可由肿瘤细胞、单核-巨噬细胞产生，也可由二者共同产生。MG-Ags为一种胃肠道肿瘤相关的一种糖蛋白抗原，当正常组织细胞膜表面糖蛋白结构发生改变时，抗原决定簇可发生巨大变化，可发生出现抗原-抗体特异性结合，为此MG-Ags含量可以反映机体肿瘤相关抗原量的表达水平。MG-Ags对于诊断胃癌具有较高的敏感性及特异性，但是在诊断其他恶性肿瘤患者中也有所报道[5]。本文结果显示，癌灶组TNF-α、MG-Ags的mRNA与蛋白相对表达水平均高于癌旁组(P<0.05)，表明脑胶质瘤组织中多伴随有TNF-α、MG-Ags的mRNA与蛋白的高表达。从机制上分析，TNF-α可调控血管内皮生长因子，在多种恶性肿瘤中呈现高表达状况[6]。特别是脑胶质瘤患者血浆中TNF-α水平升高的患者生存期较短，且与患者的病理特征存在相关性。MG-Ags当前在机体免疫炎性反应中发挥着重要作用，特别是在恶性肿瘤患者的末期，血清MG-Ags表达会发生较大的波动，与患者预后存在相关性[7]。

在脑胶质瘤发生发展的早期过程，病理性血管生成以及肿瘤细胞的侵袭性生长起到了重要作用[8]。本文结果显示，不同临床分期、组织学分化、肿瘤转移的脑胶质瘤组织TNF-α与MG-Ags蛋白相对表达水平对比差异均有统计学意义(P<0.05)；ROC曲线显示TNF-α、MG-Ags与联合检测诊断脑胶质瘤的曲线下面积分别为0.782、0.814和0.867，诊断敏感性均>85.0%，特异性均>80.0%。提示TNF-α与MG-Ags在脑胶质瘤中可能发挥促癌作用，也可反映患者的病情状况。特别是在正常的中枢神经系统内，小胶质细胞内TNF-α的含量比较低；当中枢神经系统发生损伤后，激活的小胶质细胞可大量产生TNF-α，导致患者的病情恶化[9]。而MG-Ags的高表达可导致蛋白酶体降解磷酸化雌激素受体能减弱，并使其增殖功能，增加细胞的运动性，促进血管生成，参与恶性肿瘤的浸润[10]。

综上所述，脑胶质瘤组织中TNF-α、MG-Ags的mRNA与蛋白都呈现高表达状况，与患者的病理特征明显相关，也可为诊断与预测脑胶质瘤的重要分子标志物。本研究由于经费比较低，没有纳入非胶质瘤患者，也没有进行血清学分析，将在后续研究中探讨。