张浩钿 陶育和 文智举 覃杰*
(1.第二师畜牧兽医工作站,新疆巴音郭楞 841005;2.第二师30 团农发中心,新疆巴音郭楞 841005;3.第二师31 团农发中心,新疆巴音郭楞 841500)
肺炎是绵羊最常见的一种呼吸道疾病。其病因复杂,饲养管理不当以及细菌、病毒、支原体、寄生虫等病原均可引起肺炎。根据临床症状和病理变化肺炎可分为支气管肺炎、大叶性肺炎、化脓性肺炎、异物性肺炎等。绵羊肺炎的临床症状发展速度大多较慢,但部分羔羊发病迅速,死亡率的高低不定。本试验对巴州地区引起绵羊肺炎的病原进行筛查,旨在找到主要病原,为绵羊肺炎防治提供参考。
2019—2021 年分别在巴州地区12 家规模羊场和24 家散养户采集肺炎绵羊脏器(肝、肺、心、脾、淋巴和肾),眼结膜、鼻腔拭子以及相应的血清样品(颈静脉无菌采血5mL,离心后获得血清,采集前不对肺炎羊进行任何针对性治疗和免疫)各240 份,共960 份。巴音布鲁克羊、刀郎羊为本地品种,湖羊、小尾寒羊、杜泊羊和萨福克羊为外来品种。
主要培养基:普通营养肉汤培养基、普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、血琼脂培养基、脱纤维羊血。细菌微量生化反应管购自杭州滨和微(生物试剂有限公司。绵羊支原体检测试剂盒购自雅吉生物(批号202009)、呼吸道合胞体病毒抗体检测试剂盒购自爱德士蒙利埃有限公司(批号20150)、副流感病毒ELISA 抗体检测试剂盒购自爱德士蒙利埃有限公司(批号21046)、小反刍兽疫荧光PCR 检测试剂盒购自北京世纪元亨生物技术公司(批号21030)。
1.3.1 细菌分离鉴定
将采集的脏器、鼻拭子样品按照常规划线分离细菌的方法接种于普通营养琼脂、麦康凯琼脂培养基、血平板培养基上,于37℃细菌恒温培养箱中培养18~24h 后挑取单个菌落纯化培养后进行溶血性曼氏杆菌、链球菌、多杀性巴氏杆菌等细菌的生化鉴定[1-2]。
1.3.2 血清抗体ELISA 检测和眼结膜拭子荧光PCR核酸检测
血清中检测:支原体抗体、呼吸道合胞体病毒抗体、副流感病毒抗体ELISA 检测试剂盒分别检测支原体抗体、呼吸道合胞体病毒抗体、副流感病毒抗体,具体操作步骤按试剂盒说明书进行。
眼结膜拭子检测:小反刍兽疫荧光PCR 检测试剂盒检测眼结膜拭子中小反刍兽疫病毒,具体操作步骤按试剂盒说明书进行。
1.3.3 数据处理
运用统计软件SPSS19.0 对数据进行分析。
溶血性曼氏杆菌检出率27.1%,链球菌检出率为21.6%,多杀性巴氏杆菌检出率17.9%,支原体检出率16.7%,结核分枝杆菌检出率0.83%,其他细菌(葡萄球菌,大肠杆菌等)检出率8.3%,其中溶血性曼氏杆菌检出率最高,其次链球菌,再次为多杀性巴氏杆菌。溶血性曼氏杆菌的检出率显著高于多杀性巴氏杆菌、支原体、结核分枝杆菌抗体。多杀性巴氏杆菌、支原体、链球菌检出率显著高于结核分枝杆菌抗体。巴音布鲁克羊、刀郎羊、小尾寒羊、沙福克羊溶血性曼氏杆菌检出率最高,杜泊羊、湖羊多杀性巴氏杆菌检出率最高,其中小尾寒羊多杀性巴氏杆菌检出率显著高于巴音布鲁克羊、刀郎羊(表1)。
表1 细菌检测结果
呼吸道合胞体病毒检出率40.0%,副流感病毒抗体检出率18.8%,小反刍兽疫病毒检出率0%。其中呼吸道胞合体病毒检出率均显著高于副流感病毒。巴音布鲁克羊、刀郎羊、杜泊羊、湖羊呼吸道道合胞体病毒检出率最高,小尾寒羊副流感病毒检出率最高,其中湖羊、小尾寒羊、杜泊羊和萨福克羊副流感病毒检出率显著高于巴音布鲁克羊、刀郎羊(表2)。
表2 病毒检测结果
肺炎病因复杂,病原性肺炎由病毒、细菌或寄生虫引起,非病原性肺炎由营养因素及饲养管理引起。该试验中有20 份样品未检测到任何病原,可能为非病原性肺炎。溶血性曼氏杆菌检出率与冯旭飞[3]的检出率基本相同,链球菌的检出率与张丹[4]的检出率基本相同。支原体抗体检出率低于剡文亮[5]的检出率,可能与地域差异有关。
小尾寒羊多杀性巴氏杆菌检出率显著高于巴音布鲁克羊和刀郎羊,巴音布鲁克羊和刀郎羊副流感抗体显著低于其他羊,可能与新疆当地昼夜温差大,本地羊适应当地气候环境有关。
副流感病毒、呼吸道合胞体病毒均属于副黏病毒科,牛、绵羊易感,发病率高,病死率低[6],如继发细菌或支原体感染可引起病情加重,导致呼吸道疾病综合征,造成宿主的死亡。副流感病毒检出率与毛立[7]检出率基本相同。在加拿大、美国、北爱尔兰和新西兰已在绵羊体内检测到牛呼吸道合胞体病毒抗体[8],本实验中检测到牛呼吸道合胞体病毒抗体达到40%,说明巴州地区该病毒感染比较严重。
试验对几种绵羊肺炎病的情况进行分别检测,结果表明,巴州地区绵羊肺炎为多种细菌、病毒混合感染,呼吸道合胞体病毒、溶血性曼氏杆菌为其主要致病源,同时存在非病原性肺炎的情况,在巴州地区开展绵羊养殖需要加强饲养和养殖场所的管理。