雪白委陵菜化学成分的研究

高燕萍， 张亚梅， 刘 华

(江西中医药大学中药资源与民族药研究中心，江西 南昌 330000)

雪白委陵菜PotentillaniveaL.是蔷薇科委陵菜属植物，主要分布于山西、内蒙古、新疆、吉林等地，生长于海拔2 500～3 200 m的地区，资源较为丰富，为藏药“热衮巴”主要来源品种之一。作为常用藏药，“热衮巴”可用于肝炎、髙血压、月经不调及关节炎等症的治疗。目前，从委陵菜属植物分离鉴定的化学成分主要有黄酮类、单萜类、倍半萜类和三萜类，其中报道的三萜类有齐墩果烷型、乌苏烷型、羽扇豆烷型以及A环为五元环的五环三萜、2, 3开环的乌苏烷型三萜和骨架新颖的具有20, 28环氧片段的蒲公英烷型三萜类等[1-2]。但是，作为“热衮巴”主要来源品种之一，有关雪白委陵菜化学成分的研究却未见报道，其药效物质基础尚不明确。基于此，本实验对雪白委陵菜80%乙醇提取物进行初步研究，从中分离得到12个化合物，所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

1 材料

RY-2型熔点仪(天津分析仪器厂)；Vector 22红外光谱仪、DRX-600 MHz型核磁共振仪(德国Bruker公司)；UV-2550紫外光谱仪、LC-2010AHT液相色谱仪器(日本岛津公司)；MSD-Trap-XCT质谱仪(美国安捷伦公司)；C605中压制备液相色谱仪(瑞士Büchi公司)；硅胶色谱硅胶、柱层析硅胶(烟台芝罘黄务硅胶开发试验厂)；Sephadex LH-20 (美国Pharmacia公司)；反相硅胶C18(50 μm，日本富士公司)。提取用乙醇为工业试剂，其余化学试剂均为分析纯；液相色谱用为色谱纯。

雪白委陵菜药材购自成都荷花池药材市场，经江西中医药大学钟囯跃教授鉴定为蔷薇科委陵菜属植物雪白委陵菜PotentillaniveaL.的干燥全草。

2 提取与分离

雪白委陵菜药材约10 kg，用80%乙醇冷浸提取3次，每次3 d，合并醇提液，减压浓缩得浸膏约896 g。将浸膏加水混悬，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部位。乙酸乙酯部位约280 g经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0～1∶1)梯度洗脱，各流分经薄层色谱检识、合并，得到10个组分Fr. 1～Fr. 10。Fr. 2(24.1 g)经ODS反相柱层析分离，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脱、Sephadex LH-20继续纯化，采用二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱和制备薄层色谱(氯仿-甲醇=30∶1)分离纯化得化合物1(11.5 mg)、2(16.1 mg)、12(8.3 mg)。Fr. 3(23.5 g)经ODS反相中压柱色谱，甲醇-水(20∶80～100∶0)梯度洗脱、Sephadex LH-20进行分离，采用二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱，然后用半制备HPLC甲醇-水(70∶30)进行纯化，得化合物3(18.2 mg)、5(9.5 mg)、8(11.0 mg)。Fr. 4(39.8 g)经过ODS反相中压柱色谱，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脱、Sephadex LH-20分离，采用甲醇洗脱，再用半制备HPLC甲醇-水(45∶55)进行纯化得化合物4(8.3 mg)、6(11.2 mg)。Fr. 8(58.6 g)经ODS反相中压柱色谱，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脱、Sephadex LH-20分离，采用甲醇洗脱，再用半制备HPLC甲醇-水(34∶66)进行纯化得到化合物7(30.0 mg)、9(16.6 mg)、10(10.6 mg)、11(15.3 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：无色油状物。ESI-MSm/z: 457.0[M + H]+，分子式C30H48O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：3.19(1H，m, H-3)，0.74, 0.80, 0.88, 0.95, 0.96, 1.68(6×CH3，s)；13C-NMR(CDCl3, 100 MHz)δ：38.7(C-1)，27.5(C-2)，78.6(C-3)，38.8(C-4)，55.3(C-5)，18.5(C-6)，34.5(C-7)，40.5(C-8)，50.5(C-9)，37.3(C-10)，20.8(C-11)，25.5(C-12)，38.5(C-13)，42.5(C-14)，30.5(C-15)，32.3(C-16)，56.3(C-17)，47.0(C-18)，49.5(C-19)，150.5(C-20)，29.5(C-21)，37.2(C-22)，27.8(C-23)，15.3(C-24)，15.9(C-25)，16.3(C-26)，14.6(C-27)，178.8(C-28)，109.3(C-29)，19.3(C-30)。以上数据与文献[3]报道基本一致，故鉴定为白桦酸。

化合物2：白色无定形粉末。ESI-MSm/z: 479.0[M + Na]+，分子式C30H48O3。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：11.98(1H，s)，5.13(1H，m)，3.15(1H，m, H-3)，0.89, 1.02, 1.05, 1.19, 1.24(5×CH3，s)，0.94, 1.00(2×CH3，d，J=5.2 Hz)；13C-NMR(C5D5N, 100 MHz)δ：38.7(C-1)，27.5(C-2)，78.6(C-3)，38.8(C-4)，55.3(C-5)，18.5(C-6)，34.5(C-7)，40.5(C-8)，48.5(C-9)，37.3(C-10)，23.8(C-11)，125.5(C-12)，139.3(C-13)，42.5(C-14)，28.5(C-15)，24.9(C-16)，48.1(C-17)，53.6(C-18)，39.5(C-19)，39.4(C-20)，31.1(C-21)，37.2(C-22)，28.8(C-23)，16.6(C-24)，17.4(C-25)，17.5(C-26)，23.7(C-27)，179.8(C-28)，15.6(C-29)，21.3(C-30)。以上数据与文献[4-6]报道基本一致，故鉴定为熊果酸。

化合物3：白色无定形粉末。ESI-MSm/z: 479.0[M + Na]+，分子式C30H48O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：5.28(1H，s)，3.20(1H，m)，0.74，0.75，0.88，0.89，0.91，0.96，1.11(7×CH3，s)；13C-NMR(CDCl3, 100 MHz)δ：38.7(C-1)，27.8(C-2)，79.1(C-3)，38.8(C-4)，55.2(C-5)，18.3(C-6)，32.5(C-7)，39.5(C-8)，47.7(C-9)，37.1(C-10)，23.0(C-11)，122.5(C-12)，143.5(C-13)，41.6(C-14)，27.7(C-15)，23.3(C-16)，46.5(C-17)，41.0(C-18)，46.0(C-19)，30.5(C-20)，33.8(C-21)，32.5(C-22)，28.1(C-23)，15.5(C-24)，15.3(C-25)，17.1(C-26)，26.0(C-27)，183.1(C-28)，33.1(C-29)，23.6(C-30)。以上数据与文献[7-9]报道基本一致，故鉴定为齐墩果酸。

化合物4：白色无定形粉末。ESI-MSm/z: 443.0[M + H]+，分子式C30H50O2。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：5.21(1H，t,J=4.2 Hz, H-12)，3.49(1H，d,J=11.2 Hz, H-18α)，3.21(1H，m, H-3)，3.17(1H，d,J=11.2 Hz, H-18β)，0.80, 0.87, 0.90, 0.94, 0.97, 1.01, 1.21(7×CH3，s)；13C-NMR(CDCl3, 100 MHz)δ：38.6(C-1)，27.2(C-2)，79.1(C-3)，38.9(C-4)，55.1(C-5)，18.3(C-6)，32.6(C-7)，40.3(C-8)，47.2(C-9)，37.0(C-10)，23.8(C-11)，122.1(C-12)，143.9(C-13)，41.8(C-14)，25.4(C-15)，22.0(C-16)，47.5(C-17)，42.5(C-18)，46.3(C-19)，30.9(C-20)，33.9(C-21)，30.8(C-22)，28.0(C-23)，16.0(C-24)，15.7(C-25)，17.0(C-26)，25.9(C-27)，69.9(C-28)，33.1(C-29)，23.6(C-30)。以上数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定为古柯二醇。

化合物5：白色形粉末。ESI-MSm/z: 489.0[M + H]+，分子式C30H48O5。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：5.28(1H，brs, H-12)，3.61(1H，m, H-3)，3.52(1H，d,J=12.8 Hz, H-24β)，3.30(1H，m, H-24α)，1.13(3H，d,J=6.8 Hz, H-30)，0.85, 1.07, 1.12, 1.47, 1.68(5×CH3，s)；13C-NMR(C5D5N, 100 MHz)δ：34.1(C-1)，26.5(C-2)，69.9(C-3)，44.0(C-4)，50.2(C-5)，19.3(C-6)，34.7(C-7)，40.6(C-8)，48.0(C-9)，37.5(C-10)，24.3(C-11)，128.1(C-12)，140.0(C-13)，42.4(C-14)，29.3(C-15)，26.4(C-16)，48.3(C-17)，54.7(C-18)，72.7(C-19)，42.4(C-20)，27.0(C-21)，38.5(C-22)，23.6(C-23)，65.7(C-24)，16.0(C-25)，17.2(C-26)，24.6(C-27)，180.7(C-28)，27.5(C-29)，16.6(C-30)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为barbinervic acid。

化合物6：黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MSm/z: 325.0[M+Na]+，分子式C15H10O7。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.61(1H，d，J=1.8 Hz, H-2′)，7.53(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz, H-6′)，6.85(1H，d，J=8.4 Hz, H-5′)，6.41(1H，d，J=1.8 Hz, H-8)，6.15(1H，d，J=1.8 Hz, H-6)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：147.0(C-2)，135.6(C-3)，176.3(C-4)，160.9(C-5)，98.5(C-6)，164.1(C-7)，93.7(C-8)，156.0(C-9)，103.1(C-10)，121.7(C-1′)，114.9(C-2′)，145.2(C-3′)，147.9(C-4′)，115.0(C-5′)，120.2(C-6′)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定为槲皮素。

化合物7：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MSm/z: 463.0[M-H]-，分子式C21H20O12。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.71(1H, d,J=1.8 Hz, H-2′)，7.59(1H, dd,J=8.4, 1.8 Hz, H-6′)，6.87(1H, d,J=8.4 Hz, H-5′)，6.39(1H, d,J=2.4 Hz, H-8)，6.20 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6)，5.27 (1H, d,J=7.8 Hz, H-1″)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：158.5(C-2)，135.3(C-3)，179.3(C-4)，162.9(C-5)，99.9(C-6)，166.0(C-7)，94.7(C-8)，159.2(C-9)，105.6(C-10)，123.0(C-1′)，116.2(C-2′)，146.0(C-3′)，149.7(C-4′)，117.8(C-5′)，123.3(C-6′)，104.2(C-1″)，75.7(C-2″)，78.3(C-3″)，71.2(C-4″)，78.0(C-5″)，62.3(C-6″)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MSm/z: 309.0[M + Na]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.98(2H，d，J=8.4 Hz, H-2′, 6′)，6.83(2H，d，J=8.4 Hz, H-3′, 5′)，6.43(1H，d，J=1.8 Hz, H-8)，6.16(1H，d，J=1.8 Hz, H-6)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：146.8(C-2)，135.7(C-3)，176.0(C-4)，160.9(C-5)，98.3(C-6)，164.2(C-7)，93.4(C-8)，155.9(C-9)，103.0(C-10)，122.1(C-1′)，129.9(C-2′, 6′)，115.6(C-3′, 5′)，159.5(C-4′)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定为山柰酚。

化合物9：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MSm/z: 315.0[M-H]-，分子式C16H12O7。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.86(1H，d，J=1.8 Hz, H-2′)，7.78(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz, H-6′)，7.03(1H，d，J=8.4 Hz, H-5′)，3.93 (3H, s, 3′-OCH3)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：156.5(C-2)，132.6(C-3)，176.5(C-4)，158.9(C-5)，99.5(C-6)，163.2(C-7)，95.9(C-8)，160.9(C-9)，106.5(C-10)，123.1(C-1′)，114.9(C-2′)，149.2(C-3′)，151.9(C-4′)，116.6(C-5′)，121.3(C-6′)，56.5 (3′-OCH3)。以上数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定为异鼠李素。

化合物10：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MSm/z: 449.0[M + H]+，分子式C21H20O11。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.46(1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-6′)，7.42(1H, d,J=2.4 Hz, H-2′)，6.93(1H, d,J=8.4 Hz, H-5′)，6.79(1H, d,J=2.4 Hz, H-8)，6.75(1H, s, H-3)，6.45 (1H, d,J=2.4 Hz, H-6)，5.10 (1H, d,J=7.2 Hz, H-1″)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：164.7(C-2)，103.3(C-3)，182.1(C-4)，161.3(C-5)，99.9(C-6)，163.0(C-7)，94.9(C-8)，157.2(C-9)，105.5(C-10)，121.6(C-1′)，113.9(C-2′)，146.1(C-3′)，150.3(C-4′)，115.8(C-5′)，119.3(C-6′)，100.2(C-1″)，73.3(C-2″)，76.8(C-3″)，70.2(C-4″)，77.5(C-5″)，61.3(C-6″)。以上数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定为木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物11：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MSm/z: 433.0[M + H]+，分子式C21H20O10。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.76(2H, d,J=8.4 Hz, H-2′, 6′)，6.95(2H, d,J=8.4 Hz, H-3′, 5′)，6.36(1H, s, H-8)，6.19(1H, s, H-6)，5.36 (1H, d,J=1.6 Hz, H-1″)，0.95 (3H, d,J=7.2 Hz, H-6″)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：157.1(C-2)，134.8(C-3)，178.1(C-4)，161.8(C-5)，98.6(C-6)，164.2(C-7)，93.5(C-8)，160.2(C-9)，104.5(C-10)，121.5(C-1′)，130.8(C-2′，6′)，115.3(C-3′，5′)，157.8(C-4′)，102.2(C-1″)，70.6(C-2″)，70.8(C-3″)，71.5(C-4″)，70.4(C-5″)，16.3(C-6″)。以上数据与文献[17]报道基本一致，故鉴定为山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物12：淡黄色粉末，盐酸-镁粉反应阳性。ESI-MSm/z: 319.0[M + H]+，分子式C15H10O8。1H-NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ：7.36(1H, s, H-2′, 6′)，6.38(1H, s, H-6)，6.17(1H, s, H-8)；13C-NMR(DMSO-d6, 100 MHz)δ：148.2(C-2)，137.3(C-3)，177.4(C-4)，162.5(C-5)，99.5(C-6)，166.0(C-7)，94.5(C-8)，158.2(C-9)，104.5(C-10)，123.3(C-1′)，108.8(C-2′，6′)，146.8(C-3′，5′)，137.6(C-4′)。以上数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定为杨梅素。

4 讨论

研究发现从委陵菜属植物分离鉴定的化学成分主要有黄酮类、萜类、鞣质类等，且黄酮及三萜类成分具有一定的抗炎活性[19-20]。本研究从雪白委陵菜药材全草中分离鉴定了5个三萜和7个黄酮类化合物。本课题组将继续对其化学成分进行研究，并对其抗炎活性进行筛选，以期阐明其药效物质基础，为该药材的开发及质量标准研究奠定基础。