原发性高血压与ACE基因rs12709426多态性关系及影响因素

汪 莉 宋婷婷 董昌武

1.安徽中医药大学中医学院，安徽合肥 230012；2.安徽中医药大学第二附属医院，安徽合肥 230061

原发性高血压（essential hypertension，EH）是一 种环境与遗传因素相互作用所致的疾病，研究表明，40%血压变异由遗传因素决定，50%由环境因素决定［1-2］。EH是心血管病和外周血管病的重要危险因素，长期患有EH易引起心、脑、肾等器官损害［3］。EH影响了全球近14亿人口的健康，是人类死亡和疾病负担的主要原因［4-5］。在中国，EH影响着超过四分之一的人口，预计到2025年，全球EH患者将达到15.6亿［6］。

EH作为一种多基因遗传性疾病，其发病机制尚处于探索阶段。肾素-血管紧张素系统（reninangiotensin system，RAS）可通过多种途径影响血管容积、心血管重塑和体内盐、水平衡，在血压调节方面起到关键作用。RAS中任一成分功能异常或表达量改变都在EH病理过程中发挥重要的作用。ACE基因作为RAS系统的关键基因，其编码的基因变异产物在EH的形成中起着至关重要的作用。血管紧张素原是肾素作用的唯一底物，是RAS酶系中第一步限速反应底物，能促进血管紧张素Ⅰ（angiotensinⅠ，AngⅠ）及AngⅡ的生成，对血压的调节及EH的发生也具有很重要的作用［7］。ACE又名激肽酶Ⅱ，是一种外肽酶。ACE对AngⅡ形成起着类似限速酶的生理作用，能导致具有强烈血管收缩活性的AngⅡ生成，AngⅡ是RAS的主要活性物质，可使血管壁的平滑肌细胞收缩，促进肾上腺皮质球状带细胞分泌醛固酮，增加肾对钠的重吸收［8］。而这些均是导致心血管疾病尤其是EH发病的关键因素［9］。近年来，国内外针对不同民族与地区作了一些关于ACE基因与EH间的关系的研究，发现基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点因不同地域、种族和个体而存在差异，可导 致 对EH不 同 的 易 感 性［10］。而ACE基 因rs12709426这一位点的研究较少，本研究从基因水平探讨EH的遗传学因素，研究ACE基因rs12709426多态性与EH的关系，并结合纳入病例年龄、性别、吸烟、饮酒、饮食、家族史等资料，探讨EH的诱发因素。

1 材料与方法

1.1 观察对象

入选EH组病例400例，来自2022年3月至2022年5月安徽中医药大学第一附属医院心内科中符合纳入标准的患者，其中男性192例，女性208例，平均年龄（67.97±12.88）岁，均为中国安徽合肥市人。对照组100例，平均年龄（63.76±11.37）岁，均为同期健康体检者。本研究经过医院道德伦理委员会批准通过（伦理号：2022-zj-02）。

1.1.1 纳入病例标准（1）性别不限，年龄均大于18周岁；符合《中国高血压治疗指南2018》［11］的诊断标准。连续3次非同日坐位时收缩压≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）或舒张压≥90 mmHg。（2）患者同意参加本项临床研究。（3）取血前未服用β受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI）和血管紧张素受体拮抗剂（angiotensin receptor blocker，ARB），若服用上述药物，则停药5个半衰期后纳入。在停药期间，使用α受体阻滞剂替代。（4）同时具有2个以上主治医师确认。

1.1.2 排除病例标准（1）严重肾病和肝功能障碍者；（2）恶性高血压患者、继发性高血压患者，（3）严重的瓣膜性心脏病、心肌病、6个月内发生过不稳定性心绞痛者；（4）有酗酒、滥用药物或精神疾病史者；（5）恶性肿瘤患者；（6）因其他原因造成不易随访和不合作者；（7）孕妇、哺乳期妇女。

1.2 方法

（1）依据《中国高血压治疗指南2018》［11］规定的测量方法。在未使用降压药物的情况下，收缩压≥140 mmHg和（或）舒张压≥90 mmHg。（2）DNA提取：清晨空腹采血（肘正中静脉血5 mL），使用EDTA抗凝，存放于-20℃冰箱。并于采血后1周内提取DNA，放于-80℃冰箱保存。（3）聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）及SNP测序方法。PCR引物，rs12709426F：CTGTGCCCATGGTACCCAC TCT，rs12709426R：CACTGGGTGACTGGCTGGAAGT。采用多重高温连接酶检测反应技术（improved multiple ligase detection reaction，imLDR）多重SNP分型试剂盒对500个样本进行SNP位点分型。反应体系（10 μL）包含：1x GC-I buffer（Takara.）；3.0 mmol/L Mg2+；0.3 mmol/L dNTP 1 μL；1U HotStarTaq polymerase（Qiagen Inc.）；1 μL样本DNA和1 μL多重PCR引物。（4）SNP测序：产物上ABI3730XL测序仪，ABI3730XL测序仪上收集的原始数据用GeneMapper 4.1（Applied Biosystems，USA）分析。

1.3 统计学处理

资料输入Excel软件建库，应用SPSS 23.0进行数据分析，计量资料使用均数±标准差表示，两组间比较采用独立样本t检验。分类资料采用n（%）表示，两组间比较使用卡方检验，并计算OR值及95%置信区间（confidence interval，CI）。遗传平衡检验采用Hardy-weinberg平衡定律，计算研究对象总体的等位基因频率。所有实验都独立重复3次。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 EH组与对照组一般临床资料比较

选择年龄、性别、吸烟、饮酒、饮食、家族史等临床资料比较EH组与对照组间的差异，结果显示，饮酒、饮食、家族史、体质量指数（body mass index，BMI）、谷氨酸（glutamate，Glu）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterin，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterin，HDL-C）等因素两组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其余差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 EH组与正常对照组一般临床资料比较

2.2 ACE基因rs12709426位点多态性与EH发病关系

2.2.1 Hardy-Weinberg平衡检验经χ2检验，ACE基 因rs12709426位 点P＞0.999，频 率 符合Hardy-Weinberg遗传平衡，具有群体代表性。

2.2.2 ACE基因多态性分布本研究结果显示，ACE基因rs12709426只有纯合子AA型，缺失杂合子，没有变异，无基因位点多态性。EH组基因型多态性频率与对照组比较，χ2=0，P＞0.999，差异无统计学意义。推测ACE基因rs12709426与EH发病无关联。

3 讨论

EH是遗传因素与环境因素共同作用的结果，不同地域人群的遗传背景存在差异将造成其对疾病的易感性差异。一项包括100万人的研究发现，无论是男性还是女性，每周饮酒≥140 mL EH患病风险是不饮酒者的5.1倍［12-13］。此外，饮食钠摄入过量也明显增加患EH风险［14-15］。据统计，世界上大多数国家的膳食盐摄入量为9～12 g/d［16］。Moslemi等［17］在研究中指出，减少盐摄入是EH和心血管疾病重要的预防和治疗方式，建议平均每日摄入不超5 g。EH家族史是遗传因素的重要标志，常被作为研究遗传因素与疾病关系的替代指标。一项包含684名28～87岁的EH患者的研究中，男性占50.73%，女性占49.27%，76.17%患者有EH家族史，23.83%患者无EH家族史［18］。Westerdahl等［19］对瑞典人的研究显示，父母一方患有EH，其子女患病风险为无EH家族史的1.84倍，父母都患有EH时，子女患病风险增至3.62倍。家族中有2个兄弟姐妹患EH，其患病风险高达44.83倍。血脂异常是公认的心血管疾病的危险因素，也被确认是EH的独立危险因素［20］。肥胖是一种具有重要公共卫生意义的慢性代谢疾病，可以激活RAS系统，引起血压波动，与EH密切相关［21-23］。Barriors等［24］研究发现，BMI 20～24.9、25～29.9和≥30 kg/m2，血压控制率分别为51.7%、42.4和29.2%，P＜0.001；LDL-C控制率分别为35.2%、30.5%和27.9%，P=0.03；糖尿病控制率分别为38.6%、27.6%和22.2%，P=0.023。长期以来，人们使用较多的动物脂肪来制作各种糕点和炒菜，新鲜果蔬摄入少，高脂饮食如培根、熏肉等摄入过多，导致脂肪在体内堆积，并伴有血脂异常等血清学指标的变化，与EH等血管疾病有重要关系［25］。BMI指数增高，EH患病率风险也增高，相关临床资料也变差［26］。随着现代社会饮食谱的改变，考虑安徽合肥地区饮食习惯偏嗜腌制食品、喜咸及油腻，运动量减少、脂质堆积，结合一般临床资料，本研究除了吸烟因素外，其余结果与Dalai等［27］对中国蒙古族EH危险因素的研究相一致。

ACE基因多态性已被广泛研究。研究表明，EH组与对照组I/D、A2350G基因型和等位基因频率分布，差异有统计学意义，ACE基因A2350G和I/D多态性使中国北方省份人群EH发病风险增加，其中D等位基因和G等位基因个体EH发病风险较高。He等［29］的研究结果显示，ACEI/D多态性和ACE活性对EH有显著影响，而循环ACE mRNA的表达在中国人群中并不是EH相关的重要因素。应用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应（fluorogenic quantitive reverse transcri ptionpolymerize chain reaction，FQ-RT-PCR）检测循环ACE mRNA的表达，可作为EH早期筛查和监测的一种有效方法。此外，还有研究发现，ACEI/D DD型携带者发生EH的风险是Ⅱ型携带者的1.99倍（95%CI：1.14～3.51）。ACE DD基因型可能使男性易患EH［30］。Liu等［31］的Meta分析共涉及32 862名患者，探讨ACE基因I/D与EH发病风险的关系，研究发现，ACE基因D等位基因与EH易感性较高相关，且具有ACE基因D等位基因的亚洲人群在所有模型中均表现出较高的EH易感性。此外，在HWE、NO HWE、高加索人群和混合人群中，ACE基因D等位基因与EH易感性密切相关。研究发现，对于年轻发病的EH患者，ACE基因rs12709426位点与ACE基因启动子SNP存在连锁不平衡，ACE基因rs12709426与EH发病有关［32］。但是，至今尚未见ACE基因rs12709426纯合子的病例报道。本研究在探讨EH关键基因多态性时发现，ACE基因rs12709426在安徽合肥地区EH患者中只有纯合子AA型，缺失杂合子，没有变异，无基因位点多态性。EH组基因型多态性频率与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.999），与EH发病无明显相关性。本研究对揭示EH的发病机制具有重要意义，为进一步研究EH在不同地域中表现出的易感性差异及其发病机制提供了有意义的线索。

由于EH的高度异质性，病程长，进展较缓慢，不同阶段有不同机制参与，某一种机制异常或缺失常可被其他机制代偿［33-34］。今后的研究要进一步扩大研究群体，结合环境因素，兼顾基因-基因、基因-环境间的交互作用。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突