深圳市宝安区＜5岁婴幼儿急性腹泻病原学及心肌酶及同工酶分析

杨锦平，张现明，杨庆珣

1.深圳市宝安区中心医院输血科，广东 深圳 518102；2.深圳市宝安区中心医院检验科，广东 深圳 518102

急性腹泻是导致5岁以下婴幼儿死亡的重要原因之一，近期来日益引起医务工作者的重视，急性腹泻可由细 菌、病毒和寄生虫等多种病原体引起，其中病毒是造成急性腹泻暴发的主要病原体，其主要包括轮状病毒（RV）、杯状病毒（HuCV）、腺病毒（AdeV）和星状病毒（AstV）［1］。RV、HuCV、AdeV和AstV不仅可以引起肠道内感染，致患儿严重脱水［2］，也会引发患儿心肌损伤，这严重影响患儿的生长发育乃至生命安全［3］，但对关注＜5岁急性腹泻患儿的心肌损伤有关实验室检查的系统报道很少。因此，为了深圳市宝安区5岁以下婴幼儿急性腹泻患儿病原体流行及心肌损伤情况，选取2017年1月—2019年12月对深圳市宝安区中心医院收治的＜5岁急性腹泻患儿的病原体进行检测分析，并对其心肌酶及同工酶进行对比分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2017年1月—2019年12月深圳市宝安区中心医院就诊的＜5岁急性腹泻就诊的1 095例患儿为研究对象，其中男621例，女474例；病程1～3 d，平均病程（1.2±0.6）d，其中，四种病毒（RV、HuCV、AdeV和AstV）阴性为阴性组，阳性为阳性组，其中阳性组的RV阳性为RV组，HuCV阳性为HuCV组，AdeV阳性为AdeV组，AstV阳性为AstV组。均符合《儿童急性感染性腹泻病诊疗规范（2020年版）》中的急性腹泻诊断标准［4］。纳入标准：（1）月龄28～59 d，平均月龄（13.4±2.36）月龄。（2）具有食欲不振、呕吐、恶心、腹痛及腹泻等临床症状。（3）每日排便次数≥3次。（4）粪便性状异常，性状主要为稀便、蛋花样、水样便、黏液便或脓血便等。（5）未服用抗菌药物。（6）大便高倍镜检查白细胞数≤5个/HP。（7）患儿的监护人均签署了知情同意书。排除标准：（1）由其他疾病引起的急性腹泻。（2）合并重症营养不良。（3）合并有心血管、肝、肾或者造血系统疾病。（4）合并中度脱水或者低血容量性休克。（5）大便细菌培养致病菌阳性。本临床研究项目均经医院医学伦理委员会审核批准执行。

1.2 方法

1.2.1 病毒检测 均采用逆转录—聚合酶的链反应（RT-PCR）法，RV、HuCV、AdeV和AstV的引物，均来自于高度保守碱基序列，根据美国生物医学信息中心已发布的RV、HuCV、AdeV和AstV基因序列设计引物，各型基因PCR引物及测序由赛默飞世尔科技有限公司所提供，RT-PCR反应系体的试剂盒购自赛默飞世尔科技有限公司。

1.2.2 心肌酶及同工酶检测 肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、谷草转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶（LDH）检测：仪器使用日立7070全自动生化分析仪，试剂使用日立原装试剂。

1.2.3 标本采集 （1）血清标本采集，入院后治疗前，所有患儿均于清晨抽取空腹静脉血15 mL，置于37℃静置医用恒温水浴箱30 min，接着置于低速常温离心仪上3 500 r/min离心15 min，然后提取血清，最后置于-20℃医用低温箱备用。（2）大便采集标本，采集自然排出新鲜的粪便，不可混人尿液，粪便盛器应洁净干燥，用无菌棉签取中央部分粪便或黏液脓血部分2～5 g置于培养瓶内或50～100μL水样便置于采样管内，盖紧塞子送检。

1.3 观察指标

（1）分析婴幼儿病毒性腹泻病原构成情况。（2）比较分析婴幼儿病毒性腹泻各组的心肌酶及同工酶浓度水平。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料以例数和百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 婴幼儿病毒性腹泻病原构成情况

四种病毒（RV、HuCV、AdeV和AstV）阴性的占30.14%为阴性组，阳性率占69.86%为阳性组，差异有统计学意义（P＜0.05）。其中阳性组的RV占35.98%为RV组，HuCV占12.51%为HuCV组，AdeV占4.38%AdeV组，AstV占2.01%为AstV组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 分析婴幼儿病毒性腹泻各组的心肌酶及同工酶浓度水平

阳性组的CK、CK-MB、AST和LDH的浓度水平均高于阴性组，差异有统计学意义（P＜0.05）；RV组、HuCV组、AdeV组与AstV组的CK、CK-MB、AST和LDH的浓度水平均高于阴性组，差异有统计学意义（P＜0.05）；RV组、HuCV组、AdeV组与AstV组之间的CK、CK-MB、AST和LDH的浓度水平，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 婴幼儿病毒性腹泻各组的心肌酶及同工酶浓度水平（±s）U/L

表2 婴幼儿病毒性腹泻各组的心肌酶及同工酶浓度水平（±s）U/L

组别阳性（n=765）HRV（n=558）HuCV（n=137）AdeV（n=48）AstV（n=22）阴性（n=330）t阳性与阴性比较值P阳性与阴性比较值t HRV与阴性比较值P HRV与阴性比较值t HuCV与阴性比较值P HuCV与阴性比较值t AdeV与阴性比较值P AdeV与阴性比较值t AstV与阴性比较值P AstV与阴性比较值CK 139.8±14.6 132.3±16.4 137.5±13.3 136.3±14.3 135.8±15.8 65.5±10.1 38.342 0.001 35.435 0.001 36.321 0.001 37.123 0.001 38.342 0.001 CK-MB 36.3±3.7 38.6±5.3 34.6±6.4 32.7±5.8 37.8±3.4 12.7±3.7 30.421 0.001 29.345 0.001 28.453 0.001 30.123 0.001 29.645 0.001 AST 96.1±11.4 98.5±12.3 92.1±10.7 93.1±13.5 97.1±12.5 36.8±7.9 35.645 0.001 34.765 0.001 35.321 0.001 35.645 0.001 35.354 0.001 LDH 246.7±18.8 253.3±19.9 261.3±17.9 256.9±16.6 243.3±17.6 124.5±17.4 46.922 0.001 45.443 0.001 44.565 0.001 46.922 0.001 44.224 0.001

3 讨论

5岁以下婴幼儿急性感染性腹泻是发病率高且流行比较广泛的传染病，每年＞210万婴幼儿死于腹泻疾病及其相关并发症，对5岁以下婴幼儿的健康危害严重也给国家和家庭带来了比较沉重的经济负担［5］。本研究对1 095例＜5岁腹泻患儿的研究中，四种病毒（RV、HuCV，AdeV和AstV）阳性检出率为69.86%，不论在发达国家还是在发展中国家，婴幼儿病毒急性腹泻都是非常普遍的，是许多国家5岁以下婴幼儿死亡的主要病因，也是我国危害5岁以下婴幼儿健康的主要疾病［6］，5岁以下婴幼儿急性腹泻病的主要病原为病毒，引起病毒性腹泻最常见的病原主要包括RV、HucV、AdeV和AstV，这跟马文超［7］研究结果一致，其中HuCV的阳性检出率最高超过35%，高于葛桂芝等［8］研究结果，其次为RV与吕红霞等［9］研究结果一致，这提示HuCV和RV一直是本地区引起婴幼儿腹泻的主要病原体。这也与于秋丽等［10］研究结果有差别，而与叶新华等［11］研究结果基本相一致，RV和HucV广泛存在于我们的自然界，其传染性非常强，患儿和隐性带菌患儿均为传染源，RV和HucV随着患儿的粪便排出体外，都可以经粪、口途径传播或者呼吸道传播，患儿既可以散发也可以暴发流行。RV和HucV主要在患儿的十二指肠粘膜细胞中增殖，使患儿的十二指肠黏膜表面的绒毛变短或者钝化，致使患儿有十二指肠表皮细胞内a-半乳糖甘酶减少，从而影响患儿的肠道的正常吸收能力，使肠道内呈高渗状态，最终引起急性腹泻。AdeV是80年代发现的一种婴幼儿腹泻病原，在世界范围内均有分布，发达国家检出率为4%～10%，在发展中国家发生率为2%～3%。本课题研究中，AdeV检出率为4.38%，与盛伟松等［12］报道基本一致。AstV也是引起5岁以下婴幼儿急性腹泻的重要病原之一，国外AstV感染检 出率为2%～16%，本研究AstV的检出率为2.01%，低于孙亚萍等［13］（4.2%）的报道，尽管本研究中发现，AdeV、AstV感染率远远低于RV及HuCV病毒，但因其可以散发，也可引起暴发，故应继续观察并评估AdeV和AstV的5岁以下婴幼儿急性腹泻患者。5岁以下婴幼儿急性腹泻病的主要病原与不同地域的环境因素密切相关，5岁以下婴幼儿是预防病毒性腹泻的重点人群，其流行毒株的多样性和多变性，这提示研究者根据地区不同流行特点，因地制宜地对疾病进行有针对性的防治显得尤为重要。

本研究结果中发现，病毒性5岁以下婴幼儿急性腹泻患儿CK、CK-MB、AST和LDH的浓度水平均高于非病毒性5岁以下婴幼儿急性腹泻患者，同时，本研究结果显示各类病毒性急性腹患儿心肌损伤差异无统计学意义，其主要原因：（1）5岁以下婴幼儿处于生长发育阶段，机体抵抗及防御能力不完善，经病毒感染后，容易降低该患儿的抵抗及防御能力，更容易损伤肠道以外的其他脏器，容易导致病情继续恶化。（2）病毒是侵犯患儿心肌细胞，病毒能分泌的毒素导致心肌细胞被侵害。（3）患儿高热、频繁呕吐脱水后导致机体电解质等物质代谢紊乱，脱水情况越严重，心肌缺氧越重，继续加重心肌组织代谢紊乱程度。（4）因心肌组织缺血与缺氧，引起心肌组织的氧自由基大量外放，并增强脂质过氧化反应，导致心肌细胞损伤，累及患者心血管系统，最终损害患儿心肌。因此，心肌酶及同工酶除了可反映心肌细胞损害的发生及进展情况，同时，可将心肌酶及同工酶作为毒性肠炎严重程度的判定指标。RV、HucV、AdeV和AstV是一类全身性感染性病原体，除了侵犯患儿胃肠道外，还能引起患儿的心肌损害与病毒性心肌炎，甚至引发患儿心源性休克而猝死。故在临床上治疗病毒性5岁以下婴幼儿急性腹泻患儿时有必要同时作心肌酶及同工酶检测和心电图检查，特别是心肌酶及同工酶的检测，及早发现心肌损害，对心肌损害的患儿作心功能监护及相应治疗。

综上所述，RV和HuCV是＜5岁急性腹泻患儿主要病原，需要针对性地做好预防控制措施，RV、HuCV、AdeV和AstV病毒性急性腹泻的患儿均伴有不同程度心肌损害，故在治疗时应作心肌酶和同工酶的监测。