lncRNA CCAT1在子宫内膜癌组织中的表达及其与病理参数的关系

姜秋慧 宋晓霞

郑州人民医院妇科，郑州 450053

子宫内膜癌又称子宫体癌，是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，好发于肥胖、高血压、糖尿病、患有多囊卵巢综合征、绝经后长期服用单一雌激素而无孕酮拮抗的妇女。早期通常无明显症状，随着病情的发展可表现为绝经后阴道出血、阴道排液等［1］。子宫内膜癌的发生是原癌基因活化和抑癌基因失活等因素相互作用的结果，但其发病机制尚不明确。因此深入研究子宫内膜癌的发病机制对其病情的早期诊断及预后有重要意义［2］。长链非编码RNA结肠癌相关转录因子1（lncRNA CCAT1）是一种在结直肠癌中表达异常增高的lncRNA，其与结直肠癌的发展密切相关，由于其在多种恶性肿瘤的发生发展的过程中有重要作用，因此被认为是致癌基因［3］。本研究旨在探讨lncRNA CCAT1在子宫内膜癌组织中的表达及与病理参数的关系，现报道如下。

资料与方法

1、一般资料

回顾性选取2021年1月至2022年1月郑州人民医院收治的105例子宫内膜癌行手术治疗的患者为研究对象，收集患者术后切除的子宫内膜癌组织标本及相应癌旁距肿瘤边缘约5 cm以上的组织标本。患者年龄30～73（55.37±3.46）岁，肿瘤长径≤2 cm 52例、＞2 cm 53例。纳入标准：（1）符合《子宫内膜癌筛查和早期诊断专家共识（草案）》［4］中的相关标准者；（2）癌旁组织经诊断标准证实未经肿瘤细胞入侵者；（3）术前未接受过放疗、化疗等抗肿瘤治疗方案者等。排除标准：（1）合并其他肿瘤性疾病者；（2）中途退出者；（3）合并血液系统疾病者等。本研究经医院医学伦理委员会审批同意。

2、方法

所有子宫内膜癌组织在分离后30 min内注入液氮，存放于-80℃冰箱中备用。采用总RNA试剂（Redzol）对患者子宫内膜癌组织进行提取：（1）依据培养皿的面积估算Redzol和组织细胞的用量，每1 ml Redzol的组织用量为50～100 mg。（2）吸尽培养液，加入Redzol，用枪反复吹打数次，确保全部裂解，之后将其转移至新的离心管中。（3）将新鲜组织剪成小块，置入匀浆器内，加入Redzol后用匀浆器匀浆，再转移至新的离心管中。（4）将匀浆液置于15～30℃中静置5 min使其充分溶解，每1 ml Redzol中加入0.2 ml氯仿，震荡混匀置于15～30℃中静置2～3 min后进行离心（2～8℃，12 000 rpm，15 min，离心半径8 cm）。（5）转移上层水相至另一新离心管中，按0.5 ml异丙醇/1 ml Redzol的比例加入异丙醇，充分混匀后置于15～30℃中静置10 min，再次进行离心（2～8℃，12 000 rpm，10 min，离心半径8 cm），RNA形成的白色团状沉淀在离心管的底部和侧面。（6）按1 ml乙醇/1 ml Redzol加入乙醇，漂洗2～3次RNA沉淀，离心（2～8℃，7 500 rpm，5 min，离心半径8 cm），弃去上清。（7）尽量弃去乙醇溶液，于超净工作台自然风干5～10 min，离心管蒸发完毕，白色RNA沉淀萎黄即可。（8）采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）扩增仪（湖南圣洲生物科技有限公司，注册证20212220277，规格：Cycler Z200），进行反转录，置于冰上冷却或放入-20℃冰箱中待用。

3、观察指标

采用PCR技术检测并观察lncRNA CCAT1在子宫内膜癌组织与癌旁组织中、不同病理分期、不同组织分级、不同分化程度、不同肌层浸润程度、有无淋巴结转移中的表达及其关系。

4、统计学方法

数据进行计算与分析的软件为SPSS 21.0，P＜0.05提示其数据差异有统计学意义。采用配对t检验、方差分析、独立样本t检验分析以（）代表的符合正态分布的计量资料，使用Spearman相关性分析分析各指标间的相关性。

结 果

如表1所示，lncRNA CCAT1在子宫内膜癌组织、病理Ⅲ+Ⅳ期、肌层浸润≥1/2、有淋巴结转移中的表达水平高于癌旁组织、病理Ⅰ+Ⅱ期、肌层浸润＜1/2、无淋巴结转移，同时lncRNA CCAT1在G1级、G2级、G3级与高分化、中分化、低分化中的表达水平呈逐渐升高趋势，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。 经Spearman相 关 系 数 分 析 ，lncRNA CCAT1表达水平与病理分期、组织分级、肌层浸润程度、淋巴结转移呈正相关（r=0.458，0.425，0.472，0.436；均P＜0.05），lncRNA CCAT1表达水平与分化程度呈负相关（r=-0.423，P＜0.05）。

表1 lncRNA CCAT1在105例子宫内膜癌组织与癌旁组织中的表达及其与病理参数的关系（）

表1 lncRNA CCAT1在105例子宫内膜癌组织与癌旁组织中的表达及其与病理参数的关系（）

注：lncRNA CCAT1为长链非编码RNA结肠癌相关转录因子1

类别组织子宫内膜癌组织癌旁组织不同病理分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期不同组织分级G1级G2级G3级不同分化程度高分化中分化低分化不同肌层浸润程度肌层浸润≥1/2肌层浸润＜1/2有无淋巴结转移无有例数105 105 75 30 26 48 31 28 47 30 65 40 76 29 lncRNA CCAT1表达水平4.25±0.47 1.18±0.13 3.25±0.47 5.82±0.52 2.23±0.33 3.86±0.44 7.63±0.68 1.46±0.24 4.12±0.58 8.89±0.75 6.35±0.72 1.45±0.26 2.12±0.47 10.64±1.36 t/F值64.510 24.550 906.780 1 278.528 41.350 47.916 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

讨 论

子宫内膜癌是发生在女性子宫内膜上皮组织的恶性肿瘤，发病率呈逐年上升趋势［5］。Ⅰ型子宫内膜癌早期容易诊断，且预后情况较好；Ⅱ型子宫内膜癌多发于绝经后萎缩的子宫内膜组织，恶性程度较高［6］。研究证实子宫内膜癌的发展是由于细胞内部及表面遗传的改变、癌基因的激活等引发的一种慢性持续的过程［7-8］。

lncRNA能够影响细胞凋亡信号，在肿瘤侵袭和转移的过程中均发挥着重要作用。lncRNA基因序列较长，功能比较复杂，并且其空间结构多样，其不仅可以通过影响附近基因的表达引发染色体的重塑而调控基因，还可以与转录因子进行结合，激活辅助蛋白灭活靶基因［9-10］。Ⅲ+Ⅳ期子宫内膜癌患者病程已经发展至中晚期，病灶出现严重扩散，癌细胞已经广泛转移且呈现高表达。肌层浸润主要指肿瘤细胞突破基底膜，进而发生的间质浸润，其可以提高肿瘤细胞向远处组织器官发生侵袭的可能性，此外，癌细胞的浸润深度由内向外逐渐加深，恶性程度也会逐渐升高，此后患者治疗和预后效果较差。恶性肿瘤可以通过淋巴结转移至其他部位，造成淋巴肿瘤细胞在淋巴结滋养、繁殖，进而引起淋巴结癌性的肿大。恶性肿瘤的侵袭迁移受多种信号通路的调控，例如MAPK信号通路可参与细胞增殖、分化以及迁移、侵袭，在肿瘤细胞的生长发育及浸润中发挥着重要作用。李林等［11］的研究结果显示，CCAT1可以通过MAPK信号通路促进神经管细胞瘤的转移，进而参与恶性肿瘤细胞的侵袭过程。lncRNA CCAT1最早被发现在结肠癌患者组织中呈现较高表达，此后发现其可与miRNA相互作用，参与靶细胞的表达，并形成相关基因调控网络，可以参与肿瘤产生的多个过程，进而促进病情的发展［12］。本研究结果显示lncRNA CCAT1在子宫内膜癌组织、病理Ⅲ+Ⅳ期、肌层浸润≥1/2、有淋巴结转移中的表达水平高于癌旁组织、病理Ⅰ+Ⅱ期、肌层浸润＜1/2、无淋巴结转移，同时lncRNACCAT1在G1级、G2级、G3级与高分化、中分化、低分化中的表达水平呈逐渐升高趋势，经Spearman相关系数分析，lncRNA CCAT1表达水平与病理分期、组织分级、肌层浸润程度、淋巴结转移呈正相关关系，表明lncRNA CCAT1参与了子宫内膜癌细胞的侵袭、基层浸润和转移的过程，其在子宫内膜癌的发病过程中起重要作用。

综上，lncRNA CCAT1在子宫内膜癌组织中呈现较高表达，与组织分级、分化程度、肌层浸润程度、淋巴结转移呈正相关，且其水平变化可为子宫内膜癌的临床诊疗提供参考。

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