营养小肽对异育银鲫血清生化、肠和肝组织的影响

胡 贺，陈 鹏，万 兵，袁 化

1.江苏福润德科技有限公司，南京 210036；2.南京农业大学，南京 210036；3.大连海洋大学，辽宁 大连 116023

异育银鲫（Carassius auratus gibelio）是运用雌核发育技术经人工培育的品种，具有生长快、个体大、食性广和抗逆性强等特点，其因良好的性状优势已成为池塘养殖的优质品种之一。随着养殖规模和养殖密度的加大，通过提供优质的饲料蛋白，提高氨基酸利用率，充分发挥生产性能，已成为饵料营养研究的主要任务。近年来，随着对营养小肽代谢特点以及对养殖动物营养作用和生理功能的深入了解[1-3]，营养小肽已成为绿色饲料添加剂的首选，应用和发展前景越来越受到重视[4-5]。

试验选择江苏省东台市弶港镇养殖区，以养殖异育银鲫为试验动物。在基础饲料中添加营养小肽，经投喂养殖128 d 后，随机抽样检测。通过观察营养小肽对异育银鲫血清生化指标的影响以及肠道（前肠）和肝组织的病理情况，探讨营养小肽作为饲料添加剂对养殖异育银鲫的影响，为营养小肽作为饲料添加剂在水产养殖中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 基础饲料和营养小肽

基础饲料为混养鱼配合饲料，产品标准为Q/320924 YCHD 001-2021。粗蛋白≥28.0%，粗脂肪≥2.5%，赖氨酸≥1.35%，水分≤12.2%，粗纤维≤11.5%，粗灰分≤15.0%，总磷≥0.7%。

营养小肽为江苏福润德科技有限公司产品，商品名为天乐泰（SBP）。以豆科植物为原料，选用四联菌分阶段式密闭深层发酵，通过生物发酵和物理处理等工艺消除抗营养因子，同时保留丰富的不饱和脂肪酸，并充分分解释放不同肽段的营养小肽类产品。部分检测指标含量：粗纤维0.9%，粗脂肪1.5%，粗蛋白4.3%，酸溶蛋白（占总蛋白）33.5%，水苏糖和棉子糖均未检出，活菌数乳杆菌22.6×107CFU/g，酵母1.02×107CFU/g，芽孢杆菌105CFU/g，pH 3.5。

1.2 养殖与管理

试验在江苏省东台市弶港镇养殖区进行，试验设2 个试验组和1 个对照组，放养鱼种的平均体重为50 g/尾。苗种放养7 d 后开始投喂饲料，对照组投喂基础饲料，试验组投喂添加天乐泰的饲料，天乐泰添加量为基础饲料重量的2.0%。每天投饵前用已静置24 h 的自来水将天乐泰溶解，充分混合后，在基础饲料中均匀喷涂，待表面干燥后投喂。投饵量按鱼体重2.0%～3.0%计算，每天投饵4 次，投喂时间为07:00、10:00、13:30 和16:30。养殖期间水温26～33 ℃，溶氧3.5～8.3 mg/L，pH 8.5～8.8。

投饵养殖128 d 后，试验组和对照组随机取样异育银鲫10 尾，进行体重、体长和体高检测，观察异育银鲫的生长情况（表1）。

表1 添加营养小肽养殖128 d 异育银鲫生长情况 （n=10）

1.3 血清制备

试验组和对照组随机取样异育银鲫5 尾，用一次性注射器尾静脉取血（无抗凝剂），4 ℃静置24 h后，2 500 r/min、-5 ℃离心5 min，取上层血清，-20 ℃保存，备用。

生化检测仪为罗氏cobas C311 全自动生化分析仪，检测指标为总蛋白（TP2）、白蛋白（ALB2）、碱性磷酸酶（ALP2L）、脂肪酶(LIPC)、血糖（GLUC3）和尿素氮（U-BUN）。

1.4 组织病理

试验组和对照组随机取样异育银鲫5 尾，进行解剖观察，分别取前肠和肝组织。前肠以肠道开口处为起点至第1 个回折处之间的部分，切取0.5～1.0 cm 组织。肝组织取肝脏中间部分，修切0.5 cm×0.5 cm 组织。纯净水冲洗，浸泡4.0%甲醛溶液，固定24 h 后更换甲醛溶液（4.0%），备用。

病理切片采用美国赛默飞公司全自动组织脱水机（Xcelsior AS），染色机（Gemini AS），包埋机（Histo STAS）和切片机（HM 325）完成。切片厚度4～5 μm，HE 染色，中性树胶封片，Olympus 光学显微镜观察，显微照片记录。

1.5 数据统计分析

试验数据以Excel 整理，“平均值±标准差（Means±SD）”表示。采用GraphPad prism 8.0 软件进行单因素方差分析和多重比较，P＜0.01 差异极显著，P＞0.05 无显著差异。

2 结果与分析

2.1 血清生化指标

在基础饲料中添加营养小肽（天乐泰）投喂异育银鲫128 d 后，试验Ⅰ组和Ⅱ组血清总蛋白分别为（37.86±1.09）、（36.21±1.66） g/L，试验组间比较无显著差异，试验组与对照组差异极显著。试验Ⅰ组、Ⅱ组和对照组的血清白蛋白分别为（16.20±0.32）、（15.08±0.30）和（12.08±1.18） g/L，试验组与对照组比较均有极显著差异。试验Ⅰ组和Ⅱ组血清血糖分别为（2.60±1.03）、（2.90±0.44）mmol/L，对照组（7.46±1.97） mmol/L，试验组间比较无显著差异，试验组与对照组比较差异极显著。试验Ⅰ组和Ⅱ组分别与对照组比较，血清碱性磷酸酶、血清脂肪酶、血清尿素氮均无显著差异（表2）。

表2 营养小肽对异育银鲫血清生化指标的影响 （n=5）

2.2 肠组织病理观察

解剖观察，试验组和对照组肠道紧连接食道之后，管径逐渐变细，前、中、后肠分界不明显，呈粉色。

组织病理观察：肠道组织各层显示清晰，由内向外依次为黏膜层（A）、黏膜下层（B）、肌层（C）和浆膜层（D）。黏膜层是消化管的最内层，有许多向肠腔凸出的肠绒毛组成；肌层有内层环肌（F）和外层纵肌（E）2 层平滑肌组成；肠的外表面均覆1 层浆膜（图1-A）。

试验组2 层平滑肌结构排列紧密，内层环形肌层较为发达，外层纵行肌层则比较薄（图1-A）。黏膜下层与肌层之间的基底层结构清晰，明显较厚且致密；肠绒毛结构清晰，分叉明显；黏膜层的上皮层由单层柱状上皮细胞（M）构成，其间散布杯状细胞（N），上皮层下的固有层（L）清晰可见（图1-B）。

对照组内层环肌（f）结构排列疏松，基底膜结构清晰（h），基膜层和内环肌层厚度比试验组薄。肠绒毛稀疏（a），肠绒毛上单层柱状上皮细胞（m）排列紧密，杯状细胞极少，固有层（l）清晰（图1-C）。

2.3 肝组织病理观察

解剖观察，试验组和对照组肝脏大小形态正常，呈鲜亮的暗红色，紧贴肠系膜上，胆囊与肝脏相连。

试验组肝组织结构较清晰，肝细胞形状较规则（A），呈略带圆形的多角形，细胞界限分明。细胞核1个，核仁清晰，位于细胞中间。细胞质丰富，HE 红染。肝细胞围绕中央静（C）脉呈放射状排列，成串形成肝索样结构，每2～3 层肝细胞间可见肝血窦（B），中央静脉和血窦中可见血细胞（图2-A、图2-B）。对照组肝细胞形态结构正常，肝细胞排列比试验组密集，肝细胞大小略小于试验组（图2-C）。

3 讨 论

3.1 营养小肽对异育银鲫血清生化指标的影响

鱼类的血液承担着能量运输、生理调节和防御的功能[6]，血清总蛋白是反映动物的营养水平和动物对蛋白质的消化程度以及鱼的健康状况的指标[7-8]。尾崎久雄[7]认为硬骨鱼类血清总蛋白的含量为30～50 g/L。血清白蛋白由肝实质细胞合成，具有维持血浆渗透压和pH 的平衡，作为转运蛋白调节被运输物质的生理作用。当营养状况良好时，血清蛋白维持在较高的水平[9]。试验Ⅰ和Ⅱ组总蛋白分别为（37.86±1.09）、（36.21±1.66） g/L，白蛋白分别为（16.20±0.32）、（15.08±0.30）g/L，血清总蛋白和白蛋白检测值均高于对照组，而且具有极显著差异。因此，营养小肽（天乐泰）的添加在一定程度上促进了养殖异育银鲫血清蛋白质的合成，鱼体表现出良好的营养状况。

血清碱性磷酸酶主要来源于肝脏、肠道和骨骼等组织，是动物生长和生存的重要调控酶，其活性在一定程度上反映了动物的生长速度[10-11]。试验组血清碱性磷酸酶均高于对照组，结合异育银鲫形体指标检测结果（表1），与罗莉等[11]碱性磷酸酶活性与动物的生长呈正相关理论相符合。

鱼类的肝胰腺是生成脂肪酶的主要器官[12]，脂肪酶的活性与饵料中的脂肪含量呈正相关[13-16]。脂肪含量高的食物会增加脂肪酶活性，而摄食脂肪含量低的食物，则脂肪酶的活性也随之降低。试验组血清脂肪酶平均值略高于对照组，多重比较显示无显著差异，反映了异育银鲫的脂质代谢状况和健康水平。

血糖是反映糖代谢和机体组织细胞功能状态的重要指标，同时也反映饵料和营养的合理性[17]。在基础饲料中添加2%天乐泰后，试验组血糖分别为（2.60±1.03）、（2.90±0.44） mmol/L，对照组为（7.46±1.97） mmol/L，多重比较显示有极显著差异。研究认为，低蛋白的饲料中碳水化合物的比例相对较高，养殖动物为摄食足量的蛋白质而加大摄食量，间接增加了碳水化合物的摄入量，导致血糖水平的升高[19-20]。因此，血糖含量随饲料蛋白质含量的升高而降低。

血清中尿素氮水平反映了肝脏和肾脏功能，以及体内蛋白质分解和沉积情况[21-22]。试验结果显示，试验组血清尿素氮平均值与对照组相同。试验结果与李清[23]的研究结果一致。营养小肽（天乐泰）具有促进氨基酸的吸收、提高蛋白质沉积率的作用。

3.2 营养小肽对异育银鲫肠组织的影响

鱼类肠道具有容纳、运输、消化食物和吸收营养的功能。肠道组织结构主要分4 层：黏膜层、黏膜下层、肌层和浆膜层。肠道组织结构的差异主要表现在肌层和黏膜层。黏膜皱襞的高低和疏密，上皮柱状细胞和杯状细胞数量与消化吸收能力密切相关[24]。

异育银鲫摄食添加营养小肽的饵料128 d 后，在一定程度上对异育银鲫的肠道结构产生影响。试验组内层环形肌层较为发达，结构排列紧密，而对照组内层环肌结构排列疏松。环肌的波状收缩形成肠的蠕动，纵肌的舒缩形成肠的摆动。因此，试验组前肠的肠壁收缩力有助于食物的混匀和运输。试验组黏膜层的上皮层单层柱状上皮细胞丰富，其间散布少量杯状细胞，肠绒毛结构清晰，分叉明显。对照组单层柱状上皮细胞排列紧密，杯状细胞极少，肠绒毛稀疏。杯状细胞能分泌黏液和消化酶，柱状上皮细胞具有吸收作用，黏膜褶的增多，表现出较大吸收面积，有助于食物的消化和营养物质的吸收。

黏膜下层由疏松结缔组织构成，是肠黏膜的支柱，同时有利于肠壁相应的扩张，将营养物质由此输入血液并到达全身[25]。试验组较对照组黏膜下层中度增厚，细胞成分增多，还有待于进一步研究探讨。

3.3 营养小肽对异育银鲫肝组织的影响

鱼类的肝脏不仅是鱼体代谢器官，也是鱼体最大的腺体，是功能多样化的新陈代谢器官之一。试验组异育银鲫肝脏表面被浆膜，大小形态正常，呈鲜亮的暗红色。试验组肝胰腺组织结构较清晰，密集形成网状，肝细胞呈略圆形的多角形，细胞界限分明。细胞核1 个，核仁清晰，位于细胞中间。细胞质丰富，HE 红染。肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，成串形成肝索样结构，每2～3 层肝细胞间可见肝血窦，中央静脉和血窦中可见血细胞。在饲料中添加营养小肽有助于养殖异育银鲫营养的吸收和糖元合成，增加新陈代谢和免疫抗病能力。

通过对异育银鲫血清生化指标检测、肠和肝组织病理观察发现，在基础饲料中添加2%营养小肽（天乐泰），有助于食物的消化，促进了氨基酸的吸收，提高了蛋白质的合成，反映出异育银鲫良好营养状况和健康水平。营养小肽作为养殖鱼类饲料添加剂，具有良好的促生长效果、无残留、无抗药性和无污染的优势，是作为绿色饲料添加剂的首选。