紫外分光光度法测定凝胶中葡萄糖酸氯己定含量

苏 淮，禹 柳，杨素珍，陈玉荣，张 辉

（山东福瑞达生物股份有限公司，山东 济南 250101）

氯己定（也称为洗必泰）属胍类消毒防腐剂，其中醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定因其良好的溶解性、广谱的抑菌性能，在药品中常作为防腐剂使用，对革兰阴性菌和革兰阳性菌都有效，用于滴眼剂、凝胶剂等剂型的防腐，使产品保持良好的微生物限度水平[1-3]。

葡萄糖酸氯己定的含量测定方法，目前在中国药典（2020年版）、胍类消毒剂卫生要求（GB/T 26367-2020）等国家标准中均有收载，如紫外分光光度法、滴定法、高效液相色谱法等，但在凝胶剂型中，由于增稠剂的存在，对葡萄糖酸氯己定的含量测定存在一定影响[4-5]。本研究采用紫外分光光度法，消除了增稠剂的影响，准确测定了葡萄糖酸氯己定的含量，具有经济、准确的优点。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV-610S紫外/可见光分光度计（上海元析仪器有限公司）；Agilent 8454紫外/可见光分光度计（安捷伦科技中国有限公司）；ME204电子天平[梅特勒托利多仪器（上海）有限公司]；KQ-500E超声波仪（昆山市超声仪器有限公司）；LAB DANCER S000旋涡混合器（德国IKA）；DHG-9023烘箱（广东泰宏君科学仪器股份有限公司）。

1.2 试药

醋酸氯己定对照品（中国食品药品检定研究院，纯度：96.9 %，批号：1TN6-YNOQ）；葡萄糖酸氯己定凝胶（自制，浓度：0.5 %）；乙醇（国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20201222）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20190724）。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备 取醋酸氯己定对照品约10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，振摇均匀，备用。

2.1.2 供试品溶液制备 取凝胶样品4份，每份约2 g（含葡萄糖酸氯己定约10 mg），精密称定，分别置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液至刻度，分别按以下方式处理：（1）室温2800 r/min振摇10 min，得溶液1；（2）常温超声（40 kHz）提取30 min，得溶液2；（3）40 ℃水浴加热60 min，得溶液3；（4）室温，2800 r/min 振摇3次，每次10 min，放置过夜（约16 h），得溶液4。4种溶液分别精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，分别得供试品溶液1～4，备用。

2.1.3 空白辅料溶液制备 按凝胶处方制备不含葡萄糖酸氯己定的空白凝胶，取约2 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液稀至刻度，按2.1.2项下方法处理。精密量取处理后溶液5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，得空白辅料溶液1～4。

2.2 葡萄糖酸氯己定含量测定

精密称取样品2 g（相当于醋酸氯己定对照品10 mg），置100 ml量瓶中，加入1.5 mol/L的醋酸溶液溶解并稀释至刻度，按2.1.2项下方法（1）处理，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，260 nm波长处测定吸光度。按下式计算样品中葡萄糖酸氯己定的含量。

式中，X为样品中葡萄糖酸氯己定的含量（g/kg），m为醋酸氯己定对照品的质量（mg），A1为醋酸氯己定对照品溶液的吸光度值，A2为供试品溶液的吸光度值，m0为供试品质量（g），1.4348为醋酸氯己定与葡萄糖酸氯己定的换算系数。

2.3 波长的选择

以醋酸-乙醇溶液为空白，取2.1项下的对照溶液、空白辅料溶液1及供试品溶液1，200～400 nm范围内扫描。对照溶液1及供试品溶液1在260 nm处有最大吸收峰，空白溶液1在260 nm处无吸收干扰。采用同样的方法重复扫描供试品溶液2～4，均可得出相同结论，因此确定260 nm为检测波长。

图1 紫外扫描光谱

2.4 线性关系考察

取醋酸氯己定对照品约20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，摇匀，精密量取1，2，3，4，5 ml，分别置50 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。以乙醇为空白，在260 nm处测定吸光度。以对照品溶液的吸光度（A）对浓度（C）做标准曲线，线性方程为：A=0.03101C+0.09813（r=0.9998）。结果表明，醋酸氯己定在4～20 µg/ml范围时浓度与吸光度呈线性关系。

2.5 精密度试验

2.5.1 重复性 取0.5 %葡萄糖酸氯己定凝胶，按2.1.2项下方法平行制备6份供试品溶液，分别测定。供试品溶液1，2，3，4的含量RSD分别为4.22 %，2.27 %，2.71 %，1.52 %。其中方法4的重复性最佳。

2.5.2 中间精密度 在不同时间，由研究室另一名试验人员，按2.1.2项下供试品溶液4的处理方式，配制6份供试品溶液，使用不同厂家及型号的仪器进行检测。供试品溶液含量RSD值为0.90 %，表明方法中间精密度良好。

2.5.3 仪器精密度 取2.1.1项下对照品溶液，平行测定6次，计算RSD。结果，6次测定平均吸光度为0.4101，RSD为0.47 %，表明仪器的精密度良好。

2.6 耐用性

2.6.1 稳定性 取对照品溶液及供试品溶液，分别于配制后0，1，2，4，8 h，在260 nm处检测吸光度，结果表明对照品溶液及4种供试品溶液8 h内吸光度RSD值分别为1.79 %，1.14 %，1.22 %，0.81 %，0.95 %，表明溶液稳定性良好。

2.6.2 提取液浓度影响 精密称取12份样品，每份2 g，分别置100 ml量瓶中，分为3组，每组4份，组1、组2、组3分别加1.45，1.50，1.55 mol/L醋酸溶液至刻度；每组4份样品分别按2.1.2项下4种方法处理后，分别精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，260 nm波长处测定吸光度，见表1。结果显示，提取液浓度改变对4种供试品溶液的含量检测数值影响不大。

表1 提取液浓度影响试验结果

2.7 回收率

按处方制备不含葡萄糖酸氯己定的空白凝胶。取空白凝胶9份，每份约2 g，精密称定，置100 ml量瓶中，分别加入葡萄糖酸氯己定对照品溶液，使其终浓度达0.4 %，0.5 %，0.6 %，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，按2.1.2项下方法处理。精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，分别测定，结果见表2。由表2可见，采用方法4处理，葡萄糖酸氯己定回收率最佳。

表2 回收率试验结果

2.8 样品测定

取3批葡萄糖酸氯己定免洗消毒凝胶，按方法4制备供试品溶液，每批平行检测3次，结果见表3。

表3 葡萄糖酸氯己定免洗消毒凝胶含量测定结果

3 讨论

葡萄糖酸氯己定的几种国标检测方法中，紫外分光光度法及高效液相色谱法使用广泛，由于凝胶剂型的特殊性，需采取特殊的前处理去除辅料干扰。有报道采用高效液相色谱法检测，样品需经超声振荡提取、转移离心、过滤等步骤，其分离提取过程步骤较多，易导致目标成分损失[6]。

本研究比较了不同样品处理方式对凝胶中葡萄糖酸氯己定含量测定的影响。研究结果显示多次振荡结合静置过夜的处理方法，提取效率最佳[7]。本研究建立的测定方法具有操作简单、经济环保的优势，且具有较高的回收率、稳定性和重复性，适用于氯己定凝胶剂型的含量测定，同时也便于基层生产企业推广使用。