菟丝子颗粒的制备工艺和质量标准研究

侯秋苑，冯白茹，殷 蕾，申 茹

（惠州卫生职业技术学院，广东 惠州 516025）

菟丝子颗粒为菟丝子的单方颗粒剂。菟丝子味甘、辛，性平，是常用的补益中药，具有补益肝肾，明目，固精缩尿，安胎及止泻等功效[1-3]。现代药理学研究表明，菟丝子提取物具有补肾、护肝、免疫调节、抗衰老、抗疲劳、安胎、改善卵巢早衰及生殖保护等作用，并提示其有效成分为黄酮类物质[4-10]。为保证药品质量，保障人体用药安全，本文对菟丝子颗粒的制备工艺和质量标准进行了研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

JA3003电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；ZF-7型暗箱三用紫外分析仪（上海和勤分析仪器有限公司）；Agilent 1260高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；PS-40A超声波清洁机（深圳市科洁超声科技有限公司）；SHZD(III)型循环水真空泵（广州市星烁仪器有限公司）；RE-3000A旋转蒸发器（上海越众仪器设备有限公司）；YK-60小型颗粒机（吉首市中诚制药机械有限公司）；BPG-9240A鼓风干燥箱（上海百典仪器设备有限公司）。

1.2 试药

金丝桃苷对照品（含量≥98 %，批号：160201，北京世纪奥科生物技术有限公司）；菟丝子颗粒（自制，批号：170701，170702，170703，170704，170705）；聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；甲醇（色谱纯，批号：20161020，天津市科密欧化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，批号：160918，天津市科密欧化学试剂有限公司）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 金色桃苷含量测定

采用高效液相色谱法（HPLC）测定[1,11-12]。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×150 mm，5 µm）；流动相：乙腈-0.1 %磷酸溶液（15:85）；检测波长：360 nm；柱温：25 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。理论塔板数按金丝桃苷峰计算应不低于5000[1,11]。

2.2 制备工艺研究

2.2.1 提取工艺 取菟丝子，粉碎成中粉，加75 %乙醇浸泡50 min，加热回流提取3次，每次1 h[13]，合并提取液，滤过。

2.2.2 浓缩工艺研究 取菟丝子提取液50 ml，分别在减压70 ℃、80 ℃、90 ℃，常压90 ℃、100 ℃条件下浓缩至10 ml，过滤，滤液按2.1项下色谱条件进样测定，结果见表1。结果显示，不同浓缩条件下浓缩液中金丝桃苷含量变化不大，考虑到浓缩效率及成本，最终选择在减压80 ℃环境下对提取液进行浓缩。

表1 浓缩条件考察结果

取菟丝子提取液，减压80 ℃浓缩，在浓缩过程中认真观察菟丝子浓缩液状态，浓缩至浓缩液黏稠且挂壁后及时从烧瓶内转移适量至100 ml量筒中，垂直放进密度计测定该菟丝子稠膏的相对密度为1.15。

综上，确定菟丝子提取液的浓缩工艺为减压80 ℃浓缩，浓缩至浓缩液呈黏稠状且挂壁后测定其相对密度，测得相对密度在1.15（80 ℃）以上即可。

2.2.3 制剂成型工艺研究 取菟丝子提取浓缩液5.0 g，共6份，分别以常用辅料淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、蔗糖、可溶性淀粉和糖粉制备颗粒，以颗粒流动性、引湿性及成型率[14]为主要考察指标，结果见表2。

表2 辅料种类考察结果

由表2可见，只有乳糖与糖粉的成型性符合制粒要求，但用量大且流动性不佳，其余4种辅料制得的颗粒细粉多或不成粒，均未达到制粒要求，综合考虑下选用淀粉、乳糖、微晶纤维素和糊精这4种辅料进行后续的复合配比研究，结果见表3。

由表3可见，微晶纤维素:乳糖为1:5时所得颗粒硬度适中，成型率高，流动性及引湿性好，最终确定菟丝子颗粒辅料为微晶纤维素、乳糖，微晶纤维素:乳糖=1:5，经验证，菟丝子浓缩液与混合辅料的比例确定为1:2.5。

表3 辅料配比考察结果

2.2.4 制备工艺 取菟丝子，粉碎成中粉，加75 %乙醇浸泡50 min，加热回流提取3次，每次1 h，合并提取液，滤过，滤液80 ℃下减压浓缩，得相对密对1.15的稠膏，加入辅料（微晶纤维素:乳糖=1:5），混合均匀，制成颗粒，干燥，即得。

2.3 质量标准研究

2.3.1 薄层色谱（TLC）鉴别[1,11]

2.3.1.1 对照品溶液的制备 取金丝桃苷对照品2 mg，精密称定，置入100 ml量瓶，加甲醇制成浓度为0.02 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

2.3.1.2 供试品溶液的制备 取本品0.5 g，加甲醇40 ml，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。

2.3.1.3 阴性样品溶液的制备 取不含菟丝子稠膏的空白辅料颗粒0.5 g，按2.3.1.2项下方法制成菟丝子颗粒阴性样品溶液。

2.3.1.4 TLC条件及结果 分别吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性样品溶液各1～2 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-冰醋酸-水（9:0.5:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品在相应位置上不显示荧光斑点（见图1），表明辅料对TLC鉴别无干扰。

图1 菟丝子颗粒TLC图谱

2.3.2 含量测定

2.3.2.1 色谱条件[1,11-12]同2.1项下色谱条件。

2.3.2.2 对照品溶液的制备 取金丝桃苷对照品5 mg，精密称定，置入100 ml量瓶，加甲醇制成每1 ml含50 μg的溶液，即得。

2.3.2.3 供试品溶液的制备 取菟丝子颗粒适量，研细，取约1 g，精密称定，置于50 ml量瓶中，加入75 %乙醇40 ml，超声处理（功率240 W，频率40 kHz）15 min，放冷，加75 %乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3.2.4 阴性样品溶液的制备 取不含菟丝子稠膏的空白辅料颗粒适量，研细，取约0.5 g，精密称定，置于50 ml量瓶中，加入75 %乙醇40 ml，超声处理（功率240 W，频率40 kHz）15 min，放冷，加75 %乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为菟丝子颗粒的阴性样品溶液。

2.3.2.5 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μl，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，结果见图2。供试品溶液的色谱图中，在与对照品溶液的色谱图相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性样品溶液在此保留时间处无色谱峰，表明辅料对金丝桃苷的HPLC检测无干扰。

图2 菟丝子颗粒中金丝桃苷含量测定的HPLC图谱

2.3.2.6 标准曲线绘制 精密称取金丝桃苷对照品10.00 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。精密量取对照品储备溶液0.10，0.20，0.50，1.00，5.00 ml，分别置入10 ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，配制成浓度为0.01，0.02，0.05，0.10，0.50 mg/ml的金丝桃苷对照品溶液。分别精密吸取上述溶液各10 μl，按2.1项下色谱条件进样测定，以金丝桃苷对照品的质量浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：Y=19 817X-14.351，r=1.0000。结果表明金丝桃苷进样浓度在0.01～0.50 mg/ml的范围内，线性关系良好。

2.3.2.7 精密度试验 精密吸取供试品（批号：170703）溶液10 μl，按2.1项下色谱条件连续进样6次，测得金丝桃苷峰面积的RSD为0.26 %（n=6），说明仪器精密度良好。

2.3.2.8 重复性试验 取同一批供试品（批号：170703）的细粉6份，各约1.0 g，精密称定，按2.3.2.3项下方法制成供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，测得金丝桃苷的平均含量为3.54 mg/g，RSD为0.91 %（n=6），说明方法重复性良好。

2.3.2.9 稳定性试验 精密吸取2.3.2.3 项下供试品（批号：20170703）溶液10 μl，按2.1项下色谱条件，分别于0，2，4，6，8，10，12 h进样测定，测得金丝桃苷峰面积的RSD为0.34 %（n=7），说明供试品溶液12 h内稳定性良好。

2.3.2.10 加样回收试验 取已知含量的同一颗粒样品（批号：170703）的细粉9份，每份约0.2 g，精密称定，置于10 ml量瓶中，按表4准确加入金丝桃苷对照品溶液（1.03 mg/ml）后，加入75 %乙醇40 ml，超声处理（功率240 W，频率40 kHz）15 min，放冷，加75 %乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按2.1项下色谱条件测定金丝桃苷含量并计算加样回收率，结果见表4。

表4 加样回收率试验结果（n=9）

2.3.2.11 样品含量测定 取批号为170701，170702，170703，170704，170705的菟丝子颗粒各1袋，按2.3.2.3项下方法制得供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积，按回归方程计算金丝桃苷的含量，结果见表5。

表5 供试品含量测定结果（n=2）

3 讨论

3.1 辅料确定

研究发现，以淀粉为辅料制备的颗粒细粉多，以糊精为辅料制备的颗粒黏性强；以糖粉为辅料，制得的颗粒符合要求，但辅料用量大。采用微晶纤维素与乳糖（1:5）为辅料，用量符合要求，制得的颗粒成型且硬度适中，流动性较好，几乎没有引湿性，成型率最高，最终选择微晶纤维素与乳糖的复合辅料作为菟丝子颗粒的辅料。

3.2 TLC鉴别展开系统确定

首先采用2020年版《中国药典》一部菟丝子鉴别项下规定的展开系统甲醇-冰醋酸-水（4:1:5）对颗粒进行TLC鉴别，结果发现样品主斑点拖尾情况严重，考虑可能是样品的点样量过大，减少样品点样量后采用同样的展开系统展开，发现除了斑点的荧光颜色变淡外，拖尾情况无改善，经分析可能是展开系统的极性偏大。调整展开剂比例，对以下展开系统进行筛选：甲醇-冰醋酸-水（5:1:4）、甲醇-冰醋酸-水（6:1:3）、甲醇-冰醋酸-水（7:1:2）、甲醇-冰醋酸-水（9:0.5:0.5）、甲醇-冰醋酸（9:1）、乙醇-水（3:1）及甲醇，最后发现甲醇-冰醋酸-水（9:0.5:0.5）的展开效果最佳。

3.3 色谱条件确定

首先参考2020年版《中国药典》一部菟丝子含量测定项下的色谱条件进行测定，结果金丝桃苷的分离度不符合要求，考虑可能是流动相极性因素影响，调整流动相比例为乙腈:0.1 %磷酸=15:85，此条件下金丝桃苷的分离度大于1.5。

3.4 供试品的提取溶剂和提取时间确定

对供试品溶液的提取溶剂（75 %乙醇，80 %乙醇，甲醇）和提取时间（超声处理15，30，45，60 min）进行考察，结果发现75 %乙醇的提取效果明显优于甲醇和80 %乙醇，超声15 min金丝桃苷的提取率可达95 %以上，故确定提取条件为75 %乙醇超声时间15 min。

3.5 含量标准确定

根据5批菟丝子颗粒的含量测定结果，平均每克颗粒含金丝桃苷3.40 mg。结合现行版《中国药典》中菟丝子药材中金丝桃苷的含量不得少于0.10 %，以及考虑制剂生产和贮存等因素，暂定菟丝子颗粒中每克含金丝桃苷不得少于1.0 mg。