苓甘五味姜辛汤对慢性支气管炎的作用机制*

郑瑜泓 袁世清

慢性支气管炎(Chronic bronchitis，CB)是由于黏液的过度产生和分泌导致小气道管腔阻塞、上皮重塑和气道表面张力改变而引发咳、喘等临床表现的慢性非特异性炎症[1]。若此病迁延不愈，可导致肺功能加速下降、呼吸道多发感染，进而引发肺气肿、肺高压、呼吸功能不全甚至呼吸衰竭等危急重症[2]。近年来CB发病率逐年上升，然而由于其发病机制尚不明确，目前仍缺乏理想的药物治疗方式。但中医药辨治CB具有良好的临床效果，仲景在《金匮要略·痰饮咳嗽病脉证并治》就有运用“温肺化饮”代表方苓甘五味姜辛汤治疗咳喘的相关阐释，临床研究亦证实经方苓甘五味姜辛汤治疗寒饮蕴肺型咳喘疗效确切，总有效率可达94.7%[3]。临床研究结果显示，寒饮蕴肺型占肺系疾患中医证型总数的24.15%，并有49.12%的概率诱发哮喘[4]。因此本研究拟从炎症反应与气道液体分泌的角度，通过建立CB尤其是寒饮蕴肺型的大鼠模型，对“温肺化饮”理论在苓甘五味姜辛汤的运用及其对治疗CB的作用机制进行进一步分析。

1 实验材料

1.1 实验动物雄性SD大鼠，体质量 (210±10)g，40只，购自成都硕达生物科技有限公司。

1.2 仪器电热恒温培养箱(型号：DHG-9023A，生产厂家：上海精实验设备有限公司)；离心机(型号：TGL-168，生产厂家：上海安亭仪器厂)。

1.3 药物及试剂配置苓甘五味姜辛汤所有药物均购自北京同仁堂中医馆，将茯苓∶甘草∶干姜∶细辛∶五味子按照12∶9∶9∶9∶5的比例，在水中浸泡30 min后加水煎煮2次，混合浓缩为1 g/ml，4 ℃保存备用。

2 实验方法

2.1 动物分组及模型构建动物分组：40只雄性SD大鼠，每组10只，随机分为：空白组、慢支炎组、寒饮蕴肺组与中药治疗组。

构建模型：①除空白组外，每组于第1天和第14天，气管内注入200 μg(1 μg/ul)脂多糖溶液[5]，并于第2～30天进行烟熏操作，每日2次；②中药组和寒饮蕴肺组大鼠，每日冷水浴1次，每次持续30 min，水温控制在1～3 ℃，并给予寒凉饮食30 d；③自实验第16天起，中药组予苓甘五味姜辛汤灌胃，其他组予生理盐水灌胃，灌胃用量均以1 ml/100 g为准。

2.2 标本采集时间：各组大鼠行灌胃操作2周后。采集前处理：①称重并记录；②依据大鼠体质量数据配置麻醉剂行麻醉操作；③采血，取凝固血液的上清液分装保存；④脱颈处死相关实验大鼠。

2.3 标准检测采用双抗体夹心ABC-ELISA法[6]检测模型大鼠血清中IL-2、IL-4与肺、支气管中AOP-1的表达水平。①依次于每孔中加入标准品或待测样品100 μl,充分混匀后置于37 ℃保温箱内40 min；②洗涤：在每次加液后操作，用洗涤液冲洗4～6次；③分别依次加入蒸馏水和第一抗体工作液各50 μl,以上述条件静置20 min；加酶标抗体工作液100 μl、底物工作液100 μl,分别静置10 min,静置15 min；④每孔加入100 μl终止液；⑤检测其在450 nm处的吸光值。

3 实验结果

3.1 大鼠一般状况空白组大鼠表现正常，慢支炎组和寒饮蕴肺组大鼠较之少神，出现咳、喘等临床表现，部分可闻及痰鸣音，此外寒饮蕴肺组大鼠兼有躁动不安，毛发干枯脱落，大便溏薄等症状。灌胃前中药组大鼠症状同寒饮蕴肺组，予中药灌胃后,中药组咳喘症状明显减轻，毛发干枯脱落现象好转。

3.2 大鼠肺组织观察空白组大鼠双肺外观光滑白润,肺组织在开胸后快速萎陷；慢支炎组、寒饮蕴肺组大鼠双肺晦暗、支气管红肿,均可见部分瘀血，开胸后双肺萎陷不明显。中药组大鼠双肺表面呈灰白色,光滑度介于上述2组之间,质软,双肺及支气管可见少量瘀点。

表1 各组大鼠肺组织IL-2与IL-4含量比较

图1 肺组织IL-2与IL-4含量

3.4 苓甘五味姜辛汤对大鼠肺和支气管AQP-1含量的影响与空白组相比，寒饮蕴肺组，慢支炎组和中药组的AQP-1水平均降低(P<0.01)；寒饮蕴肺组AQP-1表达水平较中药组低(P<0.05)。见表2。寒饮蕴肺组支气管AQP-1的表达水平稍低于慢支炎组，说明寒冷刺激更易损害肺组织的液体转运功能；寒饮蕴肺组大鼠支气管的AQP-1表达比中药组低(P<0.05),即说明中药可在一定程度上修复肺组织液体转运的功能。见图2。

表2 大鼠肺组织肺和支气管AOP-1含量比较

图2 肺组织肺与支气管AOP-1含量

4 讨论

CB是由于黏液的过度产生和分泌导致小气道管腔阻塞、上皮重塑和气道表面张力改变的慢性非特异性炎症，表现为气管、支气管的炎症反应和肺内水通道蛋白(AQPs)的表达降低，水平衡失调。一方面,细胞因子介导的炎细胞激活和聚集，促进了气道高反应的发生。另一方面，水通道蛋白(AQPs)可促进细胞代谢过程中水的跨膜转运，起到调节水平衡的作用。其中AQP-1与肺部水液代谢疾病关系密切[7]，若其表达降低，则可见水液转运障碍,水饮积聚于肺的现象。Xie等[8]通过实验研究证明，炎症因子可通过NF-KB途径降低AQP-1蛋白的表达水平，而AQP-1亦可通过参与炎症反应，加剧肺部损伤，加重炎症反应[9]。因此当CB发病时,炎症因子损伤肺泡-毛细血管膜屏障,使AQP-1的表达降低,导致肺内水分子跨膜转运效率低下,水液易在肺内积聚,形成水肿、痰液等,并进一步加重了肺及支气管的损伤。

实验结果显示，中药组血清IL-2、IL-4的含量明显低于慢支炎组和寒饮蕴肺组，且其肺和支气管内AOP-1表达水平较寒饮蕴肺组和慢支炎组明显升高。苓甘五味姜辛汤缓解炎症反应的作用可由此得到验证；同时证明苓甘五味姜辛汤可能对肺泡-毛细血管膜屏障具有保护作用,故能缓解因炎症损伤引起的AQP-1表达水平降低,帮助恢复肺组织正常的水液代谢功能,同时减少炎性介质分泌，减轻炎症损伤，起到治疗CB的作用。

中医证候调查研究结果显示，痰饮停蓄于肺是CB的关键病机，痰饮为阴邪，妨碍阳气，同时CB为慢性迁延性疾病，随着年龄的增长，人体阳气逐渐衰减，或加之贪凉饮冷，所以寒饮蕴肺在CB的证型中所占比例逐渐增高。针对寒饮蕴肺所致肺失宣降的病机，张仲景在《金匮要略·痰饮咳嗽病脉证并治》中抓住疾病本质，运用“温肺化饮”的治法治疗CB，并创制了很多简洁实用的“温肺化饮”的代表方，如小青龙汤、苓甘五味姜辛汤、射干麻黄汤等。临床调查显示，CB寒饮蕴肺证患者对中药“温肺化饮”法大多表现敏感。如王倚东[10]以小青龙汤加减治疗CB急性期，临床总有效率可达94.7%；叶旭霞等[11]治疗缓解期中老年CB，运用射干麻黄汤去除肺内寒饮，临床有效率亦达到较高水平。

干姜、细辛、五味子三药是仲景“温肺化饮”治法的核心药组。其中苓甘五味姜辛汤即是在姜辛味的基础上增加茯苓、甘草，被后世誉为“温肺化饮”的基本方。该方常用于既有久病正气亏虚，又有肺内寒饮复动而虚实夹杂的患者。苓甘五味姜辛汤遵循“病痰饮者当以温药和之”的基本原则，取干姜、细辛“味辛而厚，气温而烈”的特点，温补肺脾阳气以通调水道，起到温化肺中寒饮的作用，即魏念庭所言：“胸膈之阳大振，而饮邪自不能存”。但干姜、细辛辛散太过，且久咳易损伤肺气，故遵循《黄帝内经》“用酸补之”的治疗原则，取五味子之酸苦达到补益肺气、敛肺的作用[12]。本方与小青龙汤均以“姜辛味”为基本药组，但因配伍不同，而主治有别。本方较小青龙汤用药更为平和，加用茯苓性味甘平，可健脾渗湿，既可利水饮之邪又杜绝生饮之源；甘草补肺脾气，调和诸药。本方一方面通过祛除水饮，达到缓解咳、喘等肺系病证的目的；另一方面通过茯苓甘草等补益肺脾之气，提高了人体正气，可减少发病次数。本方广泛应用于治疗长期咳痰，对寒饮蕴肺型CB具有良效。

综上所述，苓甘五味姜辛汤可缓解炎症反应，保护与促进AQP-1的表达，进而调节肺内水液平衡，减少肺内痰饮的蓄积，起到温肺化饮的作用，对治疗寒饮蕴肺型CB有明显优势。本实验为中医药防治CB的进一步研究提供了客观的实验数据，但其更深入的机制有待进一步研究。