高效液相色谱法在阿司匹林检验中的应用及对不确定度标准的估算

秦迎春（湖南省张家界市食品药品检验所，湖南 张家界 427000）

阿司匹林为临床常用药品，常有片剂、胶囊剂、散剂剂型，具有解热镇痛、抑制血栓形成的作用，属于非甾体抗炎、抗血小板聚集药物，适应证范围广泛，既可应用于抗血栓治疗中，也可应用于风湿病等多种疾病治疗中。通过对阿司匹林进行检验，以保证药物质量，保障患者用药安全。研究发现，应用高效液相色谱法对阿司匹林进行检验分析，检测方法安全、可靠，检验检测结果准确。有研究证实，高效液相色谱法具有分离效率高、灵敏度高等优势特点，该检测方法在药品检验中的作用显著，可控制药品质量，为我国药品检验提供了全新的思路[1]。基于此，本文采用高效液相色谱法进行检测，对阿司匹林肠溶片的药物质量进行分析。

1 检验方法

1.1 仪器以及试剂 仪器：LC-20AT高效液相色谱仪；SPD-20A检测器（日本岛津） CBM-20A色谱工作站；SIL-20A自动进样器；AUW220D电子分析天平。试剂及试样：阿司匹林肠溶片（沈阳奥吉娜药业有限公司，100mg×30，批号：21112801）；甲醇（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20201106）；乙腈（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20200507）；磷酸二氢钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：F20110524）。

1.2 试液制备 ①取阿司匹林对照品适量，精密称定，30mg阿司匹林作为供试样品，旨在配制标准溶液。将样品置于烧杯中（100mL），掺入30mL的乙腈，在超声下溶解，将溶解后的溶液置于容量瓶中（100mL），加入一定量的稀释液摇匀，获取到300ug/mL的标准溶液。②将0.3mg/mL标准溶液，分别分配在1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL容量瓶中，分别加入乙腈进行稀释，进而获取到不同浓度的样品标准溶液。③取10片阿司匹林肠溶片进行研磨成细粉，取阿司匹林细粉适量，精密称定，置入烧杯中（250mL），加入80mL的乙腈，超声处理20min；将经超声处理的溶液转移至250mL容量瓶中；用乙腈稀释至刻度，摇匀后，静置存放。取1mL的上清液置入10mL容量瓶中，加乙腈稀释至刻度。摇匀，即得供试品溶液。④取10mL冰醋酸溶液置于试剂瓶中（100mL），加入纯水稀释，稀释的溶液量为1000mL，将其摇匀，即得1%冰醋酸溶液。

1.3 色谱柱条件 色谱柱Inertsil ODS-3柱（5um 4.6×150mm）；流动相：乙腈-磷酸二氢钠溶液（12∶88）；柱温：25℃；流速：1.0ml/min；液体流动相，乙腈，磷酸二氢钠，并对色谱柱的流速进行设置，设定适宜的温度，并对进样量和紫外线检测波长进行设定。

1.4 观察指标 观察阿司匹林样品检测结果，计算平均回收率。

1.5 统计学方法 采用SPSS21.0软件处理数据，计数资料采用χ2检验，以（%）表示。计量资料采用t检验，以（±s）表示。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 分析阿司匹林色谱情况 阿司匹林色谱分析过程中，量取了不同容量对照组溶液，加入水和乙腈混合溶液，稀释后，得到标准液，取一定量标准溶液进行实验分析，发现阿司匹林肠溶片峰值在5.68min。

2.2 高效液相色谱法检验阿司匹林的回收率和重复性分析 检测发现，高效液相色谱法检验重复性结果为0.64%；阿司匹林浓度范围在0.01-0.06mg/mL时，呈现了明显的线性关系，回收率达到了101.75%。

2.3 高效液相色谱法检验阿司匹林准确性分析 分别对两种不同样品溶液进行检验，检测RSD结果为1.35%、2.14%，充分展现了高效液相色谱法检验准确性的优势，保证了检验稳定性。

3 讨论

当前，阿司匹林在临床上广泛应用，在治疗心脑血管疾病、伤风、关节痛等疾病方面发挥了药物的药理作用。研究发现，使用不同方法检验阿司匹林，存在一定的差异性，高效液相色谱法相比于其他检验方法，更具优越性，检验结果更精准。

3.1 高效液相色谱技术原理及优势 研究发现，高效液相色谱技术在长期发展和应用中，不断提升了检测速度和分离效率，自动化程度更高，广泛应用在生物科技工程、药品检验等诸多领域中，被视为重要的药品检验技术手段。①就高效液相色谱技术原理看，主要是在高压输液系统支持下，将隔离缓冲液与混合溶剂注入到色谱柱中，其液体为流动相。高压输液泵满足色谱柱对液体流速的要求，分离效能显著，其灵敏度达到了μL级要求，可在15-30min时间完成分析任务。②就高效液相色谱技术在药品检验中的应用情况看，能够检出药物中的有效成分及具体含量，确保满足国家规定标准后进入市场销售。在药物检验中应用高效液相色谱法，不易受外界因素的干扰，检测结果准确，稳定性好，可保证药品质量。有相关研究指出，高效液相色谱技术可检出不同剂型药物中的有效成分含量，在具体检验不同剂型药物中阿司匹林的含量时，将色谱柱选定为色谱柱Inertsil ODS-3柱，将流动相设定为乙腈（-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液），波长设定为230nm，流速设定为1.0mL/min，柱温在24℃-26℃，检测效果满意；充分展现了高效液相色谱技术检验检测便捷、检测快速、可重复性等优势特点[2]。

3.2 高效液相色谱法应用进展及药品成分检验 我国药品质检部门对药品质量标准设定了严格标准，对药物检验检测，可检出药物中的杂质含量，确定有无有害物质。借助高效液相色谱技术可检出药品中附加物的含量，与常规的液相色谱检测技术比较，优势显著。有研究发现，将高效液相色谱技术联合质谱技术、分子生物技术等技术，可进一步发挥相关技术在药品检验中的作用。就高效液相色谱法应用进展看，在现代科学技术发展推动下，高效液相色谱法具有较高的敏感度和分离度，受到药品检验和药品检定单位的认可和青睐。最早是由国外一家公司推出了高效液相色谱仪，预示着高效液相色谱技术诞生，在色谱柱填料应用支持下，进一步提高了分离速度，提高了色谱柱效率。有研究证实，高效液相色谱法比常规的液相色谱法优势更显著，分离效能好，经试验研究发现，高效液相色谱法检验精确度高，检验结果误差小，能够保障检验质量，因此，为实验室检验工作提供了全新的思路[3]。

研究发现，高效液相色谱柱填料直径小，大大提升了检验敏感性，也有实验证实了这一观点。将高效液相色谱技术应用于药物成分分析中，提高了分离速度，可在短时间内得出检验结果，为药品成分分析提供了科学的参考依据。有研究人员的研究结果显示，高效液相色谱法可应用于氨氯地平贝那普利胶囊成分检验中，检验回收率达到了99%。有研究结果证实，将高效液相色谱技术应用于检验水杨酸软膏中水杨酸含量发现，测定敏感度高，检验结果精准，满足药品质量检验和药品质量控制要求。普遍研究发现，进行药品检验时，会受到色谱仪灵敏度和敏感性的影响，为提高分离效率，建议使用灵敏度较高的色谱仪。应用高效液相色谱法检验药品，能够解决上述问题，应用高效液相色谱技术可有效分析A1z、A2z、A3z化合物，分析速度较快，节省了大量的时间，快速得出分析结论，展现了应用高效液相色谱技术的灵敏度和精确度。其在分析常规药物成分方面，检测精度高，满足药品检测需要，保证药品使用效果。

3.3 高效液相色谱法在药品质量控制中的应用 分析高效液相色谱法在药品质量中的应用情况发现，在测定药物成分基础上，应用高效液相色谱法可控制药物质量。有研究证实，应用高效液相色谱法检验丹参酮注射液成分过程中，测定速度快，分离程度高，保证了药物检验质量，发挥了应用高效液相色谱技术的作用。普遍研究发现，当色谱柱之间＜2um时，柱效最好，分离速度很快。有研究人员将高效液相色谱法应用于乙醚萃取血氧试验中，发现分离效果好，研究结果显示，检测环孢素A的峰值＜10%，说明应用高效液相色谱法切实可行，满足精密度要求，应用效果显著。

3.4 分析药品检验结果偏离原因 药品本身具有特殊性，其质量安全直接关乎到人们的生命安全，加大药品质量控制力度，可保证患者用药安全。有研究结果显示，采用高效液相色谱法分别对中药和西药样品进行检测，生化药物≤1.5%（期望结果）为290，中药材制剂≤2.0%（期望结果）为154，与其他检验方法比较，检验结果更精准。分析药品检验结果出现偏差的相关因素发现，与人为因素、设备因素及其他因素均有一定的关系：①人为因素：相关检验人员自身的专业技能欠缺，理论知识匮乏，自身的专业素质有待提升，因此，在药品检验操作过程中，容易引发人为操作失误等因素，操作行为不规范，进而影响到最终的检验结果，造成检验值偏差，影响药品质量判断[4]。②设备因素：部分检验设备老化、陈旧，未及时更新换代，加之，日常管理维护力度不够，无法保证相关检验设备的精密性和灵敏性，因此，难以保证检验结果的准确性。③其他因素：包括药品存储环境不合理以及药品检验过程中，出现的各种不确定因素，均会影响药品最终的检验结果，致使最终的检验结果出现偏差。

基于此，为控制药品检验结果出现偏离，建议在药品检验中加强对检验全过程中的管控，加强对检验人员的技术培训和专业化指导，促使检验人员提高自身的专业水平，熟练掌握相关仪器设备，如在应用色谱仪过程中，要精准设定相关的参数量，能够科学配制标准溶液等，并在检验实践中，不断积累经验，规范自身操作行为，避免因人为因素造成检验结果偏离现象。同时，要定期更换检验仪器和设备，积极引进新技术、新方法，做好日常设备维护和保养工作，药品检验前，对仪器进行调试和检查，避免因仪器设备故障造成药品检验结果偏离。此外，科学管理药品，营造良好的药品存储环境，控制存储时的温度和湿度，避免药品本身发生变质，更好地为药品检验提供保障，保证检验结果精准，将检验误差控制在合理范围内。

3.5 本文研究成果 本研究中，对阿司匹林样品标准溶液检验，主要将水-乙腈作为流动相，检验发现，与传统的水-甲醇流动相比较，优势显著。有研究证实，高效液相色谱法可控制检验检测误差，保证检验结果更贴近理论结果，高效液相色谱法不受阿司匹林辅料影响，检验结果更准确。本研究中，展现了高效液相色谱法检验优势，保证检验结果更可靠，避免重复操作，稳定性好。研究发现，高效液相色谱法检验阿司匹林比两步酸碱滴定法操作更简单，可保证回收率，与本文研究结果一致[5]。本文检测发现，高效液相色谱法检验重复性结果为0.64%；阿司匹林浓度范围在0.01-0.06mg/mL时，呈现了明显的线性关系，回收率达到了101.75%；说明高效液相色谱法可作为检验阿司匹林的有效技术手段，是检测阿司匹林的理想实验方法[6-7]。进一步研究发现，分别对两种不同样品溶液进行检验，检测RSD结果为1.35%、2.14%，再次证实了高效液相色谱法的检验优势，表明高效液相色谱技术可实现定量分析，保证实验结果准确，可将此种技术手段应用在阿司匹林检验中[8]。本文研究成果，再次证实了高效液相色谱法在药物检验检测中的价值作用，应用于阿司匹林检验中，展现了显著的应用效果，为临床药品成分检验、药品质量控制提供了技术保障。

综上所述，高效液相色谱法在阿司匹林检验中的应用价值较高，便于人员操作，稳定性和回收率高，发挥了高效液相色谱技术的优势，值得广泛推广。