新疆部分地区猪瘟病毒抗体水平检测及分析

常军帅，李 娜，王紫阳，屈勇刚，梁 晏，赵 玉，陈 宁

（1.石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.动物疾病防控兵团重点实验室，新疆 石河子 832003）

随着我国经济的飞速发展，对猪肉的需求量也日益增多，促使我国生猪存栏量、猪肉产量稳居全球第一[1]。但与发达国家相比，我国养殖水平相对较低，规模较小，致使猪病易发、频发、较难净化，严重影响了猪场的经济效益。猪瘟（CSF）俗称“猪霍乱”，又称“烂肠瘟”，是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种只感染猪的病毒性传染病，该病毒自1810年在美国发现之后，100多年内法国、英国、日本及我国也相继报道出CSFV的本土病例出现[2]。CSFV传播迅速，致死率高，被世界动物卫生组织（Office International Des Epizooties, OIE）在《国际动物卫生法典》中列为必须上报的疾病，在我国的《家畜家禽防疫条例实施细则》中也明确规定其为一类传染病。《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》将CSF列为优先防治和重点防范的动物疫病[3]。CSFV分为3个基因型（基因1～3型）和11个基因亚型（1.1～1.4、2.1～2.3和3.1～3.4），其中我国流行的优势毒株为2.1b[2]。20世纪50年代，我国研发出了猪瘟兔化弱毒疫苗（C株），并于1965年提出根除猪瘟计划，在我国及世界猪瘟净化工作上发挥了关键作用。但由于我国养殖模式多元化、养殖人员技术水平参差不齐、生物安全防控意识薄弱、相关政策不够完善等原因，导致CSF在我国净化不彻底，急性型转变为慢性型、温和型，呈现种猪长期带毒、仔猪先天感染等症状。对于净化CSF而言，疫苗免疫是最简单、最有效的方法，但由于各种原因，导致疫苗免疫不合格，抗体水平低，致使CSF在我国以散发流行为主。

ELISA（酶联免疫吸附试验）抗体检测方法，价格低廉、快捷方便、特异灵敏，在评价抗体水平时最为常用。本试验为了解新疆部分地区CSFV的免疫状况，对2019—2020年采集的1 238份猪血清进行CSFV抗体检测，根据结果对各猪场、各猪群进行免疫程序优化，以减少CSFV及其相关疾病的发生。

1 材料

1.1 样品

2019年1月至2020年12月期间从新疆石河子市、伊犁哈萨克自治州、阿克苏市、巴音郭楞蒙古自治州、奎屯市、塔城地区，按照地区、猪场及猪群类别的不同随机采集了1 238份血样，分离血清后立即在石河子大学动物科技学院进行检测。其中哺乳仔猪145份、保育猪132份、肥育猪81份、后备猪163份、繁殖母猪548份、种公猪169份。

1.2 材料和仪器

猪瘟病毒（CSFV）抗体检测试剂盒购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；兽用一次性采血器5 mL为南昌市山力畜牧器械有限公司产品；自动酶标仪购自青岛智汇谷信息技术有限公司。

2 方法

2.1 样品及试剂准备

新鲜的、冷藏（2～8 ℃少于8 d）的、冰冻的血清都可用于检测；所有试剂需恢复至20 ℃，轻微震荡混匀。

2.2 ELISA检测方法

在每个CSFV抗原包被孔内加入50 μL样品稀释液，每孔再分别加入50 μL样品、阴性对照、阳性对照（阴、阳对照各2孔），轻微震荡后加盖封条放入20 ℃环境下孵育2 h；洗涤3次，每孔加100 μL酶标，加盖封条后放入20 ℃环境下孵育30 min；再次洗涤，加入100 μL底物溶液，放置10 min后再加入100 μL终止液，即可在450 nm出测量样本及对照的吸光值。

2.3 结果判定

试验成立的标准为阴性对照平均值＞0.50，且阳性对照阻断率＞50%，该检测结果才能有效。阻断率%=（阴性对照平均值-样品OD450）/阴性对照平均值。当阻断率≥40%判定为阳性，阻断率≤30%为阴性，阻断率介于30%～40%之间为可疑。

2.4 数据分析

使用SPSS软件对数据进行统计分析，计算各组数据的差异。

3 结果

3.1 不同猪场PRRSV抗体检测结果

在1 238份样品中，85.70%（1 061/1 238）的血清有CSFV的抗体存在，平均阻断率为67.88%。A～F猪场的阳性率分别为91.11%（287/315）、94.91%（56/59）、81.40%（210/258）、80.80%（101/125）、86.35%（215/249）、82.76%（192/232）；其中B场的平均阻断率最高，为70.26%，D场的平均阻断率最低，为61.00%；D猪场的平均阻断率与A、B、C、E场存在显著差异（P＜0.05）；F猪场的平均阻断率与A、B、C、D、E场差异不显著（P＞0.05）。结果见表1。

表1 不同猪场CSFV抗体检测结果

3.2 不同类别猪群CSFV抗体检测结果

各类别猪群中，哺乳仔猪、保育猪、肥育猪、后备猪、繁殖母猪、种公猪阳性率分别为62.76%（91/145）、68.18%（90/132）、69.14%（56/81）、90.18%（147/163）、94.34%（517/548）、94.75%（160/169）；其中繁殖母猪的平均阻断率最高，为74.05%，保育猪的平均阻断率最低，为50.91%；肥育猪的平均阻断率与哺乳仔猪、保育猪、后备猪、繁殖母猪、种公猪存在显著差异（P＜0.05）；种公猪的平均阻断率与后备猪、繁殖母猪差异不显著（P＞0.05）。结果见表2。

表2 不同类别猪群CSFV抗体检测结果

4 讨论与分析

目前我国CSFV主要表现为持续性感染和非典型性感染，造成这个结果的原因主要有两个：一是CSFV可垂直传播，种猪群净化不彻底，所产仔猪在生长过程中可持续向环境排毒，对其他健康猪造成威胁；二是无效的疫苗免疫驱动了CSFV向低毒力净化，才导致CSF病例多为非典型症状[4]。因此，对免疫效果及时评价、定期调整，才能更好地保证健康养殖。

检测结果得出，CSFV的抗体阳性率为85.70%（1 061/1 238），明显高于国家规定的70%，证明各地区对CSFV的免疫效果良好[5]；平均阻断率为67.88%，明显高于40%，说明该地区猪群CSFV抗体水平较高。谷思颖等[6]曾对该地区进行过CSFV抗体检测，得出2018年的平均阳性率为84.11%（270/321），与之相比，本试验抗体水平略有上升，可能受2019—2020年高猪价的影响。在各猪场中，D猪场阳性率最低，为80.80%（101/125），而B猪场阳性率高达94.91%（56/59），造成D猪场阳性率低的原因可能是疫苗注射量不足。免疫剂量不足是免疫失败的主要原因，D猪场可结合本猪场传统和现状制定出更科学、高效的免疫程序[7]。各类别猪群中，哺乳仔猪的阳性率最低，为62.76%（91/145）。对于这种现象，可在母猪产前40～20 d加强免疫1次，提高乳汁中母源抗体水平；也可检测该地区仔猪母源抗体半衰期时间，即母源抗体的效价在1∶8～1∶64时，及时对仔猪进行CSFV疫苗免疫，这样才能使母源抗体不干扰免疫效果；保育猪、肥育猪的阳性率也未达到国家规定的70%的抗体阳性率，为了提高免疫效果，注射疫苗同时肌肉注射亚硒酸钠维生素E或左旋咪唑等免疫增强剂[7]。

总之，在防控CSFV中疫苗免疫虽是最重要的一个环节，但也离不开综合防控措施。加强饲养管理，保证猪舍环境卫生，才能更好地提高猪群对疾病的抵抗力。同时净化猪场中的猪圆环病毒病、猪蓝耳病等免疫抑制疾病，减少疫苗免疫过程中的干扰因素，免疫效果才能达到预期效果。同时，针对抗体值明显高于平均水平的猪只要进行CSFV的抗原检测，才能确保生猪养殖事业能够长久稳定的发展。