柠檬酸对草鱼肠道组织形态的影响

王思乐

(潍坊市高崖水库运营维护中心，山东潍坊 262402)

柠檬酸(Citric acid，2-羟基-均丙三羧酸，C6H8O7)作为有机酸的一种，具有高效、低残留、无耐药等特点，在畜禽养殖生产中可以替代抗生素的使用[1-3]。动物养殖生产中使用柠檬酸可以通过促进机体对饲料中营养物质的消化吸收，而提高生长性能。在肉兔的生产中使用适量的柠檬酸与酶制剂联合使用，可以有效提高肉兔机体的免疫功能，降低腹泻率，改善生长性能[4]。在犊牛养殖中使用1.0g/d～1.5g/d的柠檬酸可以提高犊牛的采食量，提高养分表观消化率[5]。郭春苹[6]研究发现，在鲤鱼生产中添加使用适量的柠檬酸可以提高其生长性能，且柠檬酸的最适添加量为0.2%。在异育银鲫和草鱼养殖生产中，使用适量的柠檬酸可以显著促进机体对饵料中养分的消化吸收，进而促进其生长发育[7-8]。目前，关于柠檬酸对动物的影响研究主要集中在动物生长性能方面，在肠道形态及消化酶方面的研究较少，尤其在水产动物方面的研究甚少。因此，该试验以草鱼(Ctenopharyngodonidella)为研究对象，探讨不同剂量的柠檬酸对其肠道形态及消化酶活性的影响，并确定柠檬酸在草鱼养殖中的最适添加量，为柠檬酸在水产动物养殖中的高效利用提供参考意见。

1 材料和方法

1.1 柠檬酸

该试验中使用的柠檬酸购自当地原料市场，其有效纯度大于99%。

1.2 试验设计

试验选择健康、体况较好、体重无显著性差异的草鱼320尾，随机分成4组，每组80尾草鱼。对照组草鱼饲喂基础饲料，试验1组草鱼饲喂基础饲料+0.2%的柠檬酸，试验2组草鱼饲喂基础饲料+0.4%的柠檬酸，试验3组草鱼饲喂基础饲料+0.6%的柠檬酸。试验周期为60d。试验结束后，采集各组草鱼的肠道，检测肠道形态及消化酶的活性。试验草鱼基础饲料配方见表1。

表1 试验草鱼基础饲料配方 %

1.3 养殖管理

草鱼在网箱中进行试验，正式试验开始前7d进行驯化，使草鱼适应养殖环境。每日草鱼被饲喂3次，分别在7:30、12:00、17:00各投喂一次，每日的投喂量约为草鱼体重的3.5%。养殖期间持续供氧，每4d～5d换水一次，每次换水量约为1/3。试验期间，严格检测水质环境，pH值约为7.6，水温约为28℃，氨氮浓度小于0.1mg/L，溶解氧大于5mg/L。

1.4 测定项目和方法

从每组中选择8尾草鱼麻醉后解剖，分离肠道，排空食糜，取1.5cm的前肠，采用生理盐水冲洗干净，-80℃冷冻保存，用于肠道形态及消化酶活性的检测。

草鱼肠道组织使用乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，染色，封片后，使用光学显微镜拍照，检测绒毛高度、绒毛宽度及肌层厚度等形态指标。

将草鱼肠道解冻后，加入4倍剂量的生理盐水进行匀浆，取上清液检测蛋白酶活性和淀粉酶活性，参考试剂盒说明书进行检测。试剂盒由南京建成生物工程研究所生产。

1.5 数据分析

各组草鱼的肠道形态及消化酶数据，使用SPSS25进行分析，采用单因素方差和LSD分析显著性，数据结果以平均值表示，P<0.05表示数据差异显著。

2 试验结果

不同剂量的柠檬酸对草鱼肠道形态及消化酶活性的影响见表2，与对照组相比，试验2组和试验3组草鱼肠道淀粉酶活性和蛋白酶活性显著提高(P<0.05)。试验组草鱼肠道绒毛高度显著高于对照组(P<0.05)，且试验2组和试验3组显著高于试验1组(P<0.05)；试验组草鱼肠道肌层厚度均高于对照组(P<0.05)，但试验组间无显著性差异(P>0.05)。

表2 不同剂量的柠檬酸对草鱼肠道形态及消化酶活性的影响

3 讨论

肠道的绒毛高度、肌层厚度及消化酶活性可以反映鱼类机体对饲料的消化吸收情况。在罗非鱼生产中使用1.0g/kg～1.6g/kg的苹果酸使其肠道前肠的绒毛高度及密度得到显著改善[9]。程卓等[10]研究表明，在草鱼生产中使用适量的柠檬酸可以提高草鱼的蛋白酶和淀粉酶活性，改善肠道绒毛形态，提高肠道肌层厚度，促进了肠道健康，且柠檬酸的最适添加量为0.3%。该试验中，与对照组相比，0.4%和0.6%柠檬酸组草鱼肠道淀粉酶活性和蛋白酶活性显著提高，柠檬酸组草鱼肠道绒毛高度、肌层厚度均高于对照组，与上述研究结论类似。柠檬酸改善草鱼肠道健康可能是因为柠檬酸降低了饲料的pH值，改善了饲料的适口性，调节了肠道菌群结构；并参与三羧酸循环，为肠道组织的生长发育提供更多的能量，进而改善了肠道健康。

4 结论

该试验研究表明，在草鱼养殖生产中添加适量的柠檬酸可以一定程度地提高肠道淀粉酶活性和蛋白酶活性，并能提高绒毛高度及肌层厚度，改善了肠道健康，且柠檬酸的最适添加量为0.4%。