p53及Survivin表达与食管癌患者胸腔镜下根治术后疗效的关系分析

刘 勤 张卫国 王新帅

食管癌是造成死亡的重要原因，具有高度侵袭性，且其5年生存率普遍较低[1]。食管癌发病过程复杂，涉及多基因、多分子水平以及多途径参与[2]。Survivin作为凋亡抑制因子，不仅可以通过阻断线粒体细胞色素C释放，还能抑制下游凋亡效应因子活性，进而抑制细胞凋亡[3]。在机体发育过程中均能在组织中检测出有survivin蛋白表达，且在生理状态下，绝大多数组织中均检测不到survivin基因表达。有部分研究者认为survivin基因在食管癌中异常表达的现象与食管癌的生物学特性息息相关[4]。p53是目前公认的抑癌基因，p53基因失活可促进细胞分裂、增殖，致使肿瘤形成[5]。既往研究显示[6]，p53在早期肺腺癌中高表达，且随着组织病理学分级增高，其蛋白阳性率升高。有学者分析低级别异型增生、高级别异型增生、早期食管癌组织中p53阳性表达率，发现p53阳性表达率呈逐渐上升趋势，可用于评估病变程度和进展趋势[7]。本研究分析食管癌患者组织中p53及survivin表达水平，并分析其与胸腔镜下根除术疗效之间的关系，旨在为食管癌临床诊断治疗及预后评估提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2019年1月在本院胸腔镜下行根治术的食管癌患者150例作为观察对象，经病理学检查确诊。其中男性78例，女性72例；年龄45～75岁，平均年龄(58.45±6.42)岁；肿瘤分期：Ⅰ期85例，Ⅱ期60例，Ⅲ期5例；鳞癌145例，腺癌5例；高分化20例，中分化55例，低分化75例。入选标准：初次接受治疗；手术方法方式为微创；无明显手术禁忌证；患者临床资料完整。排除标准：失访；既往存在肺部手术切除史患者；患者确诊已经发生远处转移；合并恶性肿瘤；合并心肝肺等重要器官功能障碍或者损伤。本研究已获得本院伦理委员会的批准。

1.2 治疗方法

患者行双腔气管插管全麻，取左侧卧位，行单肺通气，在右侧行腹腔镜根治术将食管病灶去除，术中密切监测患者血压、脉搏、心率情况。术中取食管病灶组织及距食管肿瘤组织边缘至少2 cm癌旁食管正常组织。术后留置胸腔引流管，并关闭胸腔，经腹腔行静脉营养支持。

1.3 临床资料

根据研究目的，自行设计调查表，通过本院病理系统统计患者临床资料：性别、肿瘤分化程度、病变部位以及周围淋巴结转移等。

1.4 免疫组织化学染色及结果判定

采用SP法(上海西宝生物科技股份有限公司)进行免疫组织化学染色，采用常规方法进行包埋切片，梯度脱蜡，加入一抗100 μL，4 ℃过夜孵育；复温后加入100 μL酶标记二抗，孵育30 min；二氨基联苯胺显色剂显色；苏木精复染后脱色、脱水、封片、读片。

结果判定：以黄色颗粒为阳性，显微镜下随机选取5个视野进行观察。Survivin定位在细胞质,染色为棕褐色颗粒为阳性表达。p53定位于细胞核，染色为棕褐色颗粒为阳性表达。细胞无染色为(-)、阳性细胞<25%(+)、26%～50%为(++)、>51%为(+++)。

1.5 生存统计

对术后患者进行为期3年随访，所有患者均有效随访，随访起始时间为手术日，每3个月进行随访，随访终止时间为2022年1月。随访终点为患者死亡。术后生存期从手术之日开始计算。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 癌组织和癌旁组织中survivin和p53基因表达比较

癌组织中survivin和p53阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)，见表1。

表1 survivin和p53基因在食管癌及癌旁组织中表达情况比较(例，%)

2.2 survivin和p53基因与食管癌临床病理特征的关系

食管癌高分化患者survivin阳性蛋白表达率高于低分化患者(P<0.05)。survivin阳性蛋白表达率与患者年龄、病变部位、淋巴结转移无关(P>0.05)。食管癌淋巴结转移患者p53阳性蛋白表达率高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。p53阳性蛋白表达率与患者性别、分化程度、病变部位无关(P>0.05)，见表2。

表2 survivin和p53基因与食管癌临床病理特征的关系(例，%)

2.3 survivin和p53基因表达与食管癌疗效的关系

远处转移患者survivin和p53阳性表达率高于无远处转移患者(P<0.05)；复发患者survivin和p53阳性表达率高于非复发患者(P<0.05)，见表3。

表3 survivin和p53基因表达与食管癌患者疗效的关系(例，%)

2.4 survivin和p53基因表达相关性

在150例食管癌患者中，survivin阳性表达107例，p53阳性表达92例，其中survivin和p53同时阳性表达85例，统计结果发现，在食管癌组织中survivin与p53表达呈正相关(γ=0.352，P<0.05)。

2.5 survivin和p53基因表达与食管癌生存期的关系

截止至随访时间结束，150例患者3年内死亡71例(47.33%)。survivin阳性表达患者3年生存率为48.60%，明显低于survivin阴性表达患者(62.79%)(P<0.05)；p35阳性表达患者3年生存率为45.79%，明显低于p35阴性表达患者(69.77%)(P<0.05)，见图1。

图1 survivin和p53基因表达与食管癌生存期的关系

3 讨论

食管癌是发生在食管黏膜上皮的消化道恶性疾病，其早期症状无明显特异性，容易误诊，致使患者错失最佳手术时机，当患者出现吞咽困难时就诊已处于食管癌中晚期[8]。食管癌发展过程与基因激活或失活灭相关，并通过其表达产物作用于细胞生长分化及凋谢过程，最终导致癌变[9]。因此，深入研究基因表达异常变化，不仅可以了解食管癌发病的机制，同时也可以寻找早期诊断和治疗食管癌的潜在靶基因，为临床基因检测提供理论证据。

多数研究表明survivin基因在胃癌、大肠癌、肝癌等多种肿瘤中高表，且被认为与肿瘤的恶性生物学行为有关，是一个独立预后指标[10-11]。本研究分析发现，survivin和p53在食管癌组织中高表达，且存在远处转移患者survivin和p53阳性表达率高于无远处转移患者；食管癌中高分化患者survivin阳性蛋白表达率高于低分化患者survivin阳性蛋白表达率，食管癌淋巴结转移患者p53阳性蛋白表达率高于无淋巴结转移患者p53阳性蛋白表达率；且复发患者survivin和p53阳性表达率高于非复发患者。既往研究显示[12]，survivin基因在食管癌患者组织中高表达，且阳性表达率明显高于正常食管癌组织中阳性率，推测survivin基因可能通过抑制食管癌细胞凋亡参与肿瘤恶性发展过程，其异常可作为判断食管癌发生、发展、转移等过程的重要指标。抑癌基因可以抑制细胞过度生长、增殖，进而遏制肿瘤，当此类基因受到外界因子或自身调节刺激而引发正常细胞癌化，进而导致肿瘤形成[13-14]。p53基因是目前临床较关注的一类抑癌基因，可以分为野生型和突变型两种[15]。野生型p53基因作为抑癌基因，参与细胞增殖和分化，主要生理作用是影响细胞有丝分裂，调控细胞生长周期，当细胞受到损伤时，野生型p53基因可使细胞生长周期受到阻滞并诱导细胞凋亡，促使细胞修复损伤的DNA[16]。野生型p53作为原癌基因不仅可以抑制其他抑癌基因的活性，还能激活下游系列靶基因过度表达。野生型基因半衰期较短，不易检出；而突变型基因结构稳定能在肿瘤细胞核内稳定表达并沉积[17]。因此，免疫组织化学法在肿瘤组织有效检测过程中一般检出p53蛋白为突变后表达的蛋白。Survivin和p35阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者。既往研究显示[7]，p53在早期食管癌中高表达，且其阳性率随恶性程度升高而增加，推测可能是食管癌p53抑癌基因发生突变，造成患者术后出现远处转移及复发，影响患者术后生存期，p53基因可能作为食管癌患者术后高复发危险个体的重要标志物。

肿瘤机体在各种因素叠加作用下形成的新生物，细胞周期调控异常与肿瘤发生密切相关[18]。本研究中，食管癌癌组织中survivin和p53表达呈正相关。survivin和p53关系较为复杂，p53表达可以下调Bcl-2凋亡基因表达，促进细胞凋亡；而survivin可以通过激活Bcl-2基因转录阻止细胞内线粒体释放细胞色素C，进而调节细胞凋亡过程，还可以直接调节于细胞凋亡途径中的终末效应酶caspase-3和caspase-7表达[19-20]。survivin和p53表达同时在食管癌中高表达且呈正相关，推测可能是p53基因突变是的对survivin基因表达调控作用失活。survivin和p53之间在食管癌中发挥作用及机制需要更多临床研究验证。

综上所述，本研究发现survivin和p53基因阳性表达率在癌组织中明显高于癌旁正常组织；survivin和p53基因阳性表达率在预后不良患者组织中明显较高，且两组在食管癌中异常表达呈正相关，说明survivin和p53基因异常表达可能影响患者术后疗效。本研究纳入样本量基数较小，且观察对象均来自同一家医院的住院患者，存在选择性偏差。