皮肤鳞状细胞癌73例血清膜联蛋白A2的表达水平及与预后的关系

黄友光

作者单位：济宁市皮肤病防治院检验科，山东 济宁 272007

皮肤鳞状细胞癌（CSCC）是一种起源于皮肤表皮或表皮附属角质层形成细胞的一种非黑色素瘤皮肤癌症之一［1］。CSCC好发于皮肤白皙、易晒黑人种，发病率仅次于基底细胞癌，占所有皮肤恶性肿瘤的15%~25%，此种疾病好发于老年人，50岁以上较多，但最常见于70岁，且男性患病率是女性的2倍［2-3］。该肿瘤呈逐级发展演变进程，临床表现多样，具有侵袭性，可通过淋巴结、血液途径转移，研究显示，大多原发性病灶，5年复发率和转移率分别为5%和8%，死亡率约1%，其中头面部CSCC淋巴结转移风险比其他部位高，且近来头面部CSCC病人呈增加趋势，严重威胁病人生命健康［4-5］。膜联蛋白是一类钙磷脂结合蛋白超家族，其中膜联蛋白A2是A家族一个重要成员，主要存在于人来组织器官中，参与细胞增殖、凋亡及分化，在外阴硬化性苔藓疾病及外阴鳞癌、结直肠癌、肝癌、胰腺导管腺癌、上皮性卵巢癌等恶性肿瘤发生发展过程中起重要作用［6-10］。然而关于膜联蛋白A2在CSCC中的作用研究较少，因此本研究拟探究CSCC病人血清膜联蛋白A2表达水平及其与预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料根据样本量计算公式：n=Z2×［P×（1-P）］/E2计算样本量，其中n为样本量，Z为置信区间，P为概率值，E为误差值，设定P=0.5，设定E=10%，设定Z=1.64，得出本研究所需样本量为73例。本研究通过对2011年10月至2014年3月济宁市皮肤病防治院收治的CSCC病人根据上述公式随机数字表法抽取73例且均符合此次研究的纳入和排除标准，其中年龄范围36~82岁，年龄（63.57±10.41）岁；男性48例，女性25例；发病于头部者48例，于面部者25例；根据原发灶类型分为瘢痕组织12例，局部肿块47例，其他类型14例；根据有无淋巴结转移分为有淋巴结转移者10例，无淋巴结转移者63例；根据癌组织分化程度分为低分化者12例，中分化者15例，高分化者46例；根据癌组织侵犯深度分为表皮40例，真皮20例，皮下组织13例。另取同时期门诊健康体检者血清标本73例为对照组，年龄范围35~83岁，年龄（64.19±10.35）岁，男性46例，女性27例。两组受试者年龄、性别比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。收集受试者所有临床资料，本研究经过济宁市皮肤病防治院道德伦理委员会批准通过（14-0635），所有样品采集及资料调查均取得病人及其近亲属知情同意并签字确认。

1.2 纳入与排除标准纳入标准：①在该院住院治疗并经病理检查确诊为CSCC病人；②均行手术切除病灶；③临床资料及随访资料完整；④自愿配合参加本次调查研究并遵循医嘱配合治疗者。排除标准：①合并其他恶性肿瘤或癌症转移病人；②有头部或面部手术史者；③随访过程中死于其他疾病或意外者；④患有遗传性疾病或传染性疾病者。

1.3 血清膜联蛋白A2水平检测采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测受试者血清膜联蛋白A2水平（美国Invitrogen，货号03-4400），具体操作严格按照试剂盒说明书进行。

1.4 随访每月对术后CSCC病人进行电话或入院复查随访，共随访5年，以2019年7月31日为随访截止日期，死亡或复发病人以死亡、复发日期为截止日期。采用临床视诊、初诊及影像学检查等方法对病人进行随访复查，根据随访结果，其中死亡、局部复发、出现淋巴结转移者为预后不良组共19例，未发生死亡、复发或淋巴结转移者为预后良好组共54例。

1.5 统计学方法使用SPSS 20.0软件进行统计分析。符合正态分布计量资料以±s表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA检验），方差分析差异有统计学意义者再进一步采用SNK-q进行检验。计数资料以（%）表示，比较采用χ2检验。采用Cox回归模型进分析影响CSCC病人不良预后的危险因素。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CSCC组与对照组血清膜联蛋白A2水平比较CSCC组病人血清膜联蛋白A2（64.78±6.23）μg/L水平显著高于对照组（16.45±5.64）μg/L，差异有统计学意义（t=49.14，P<0.001）。

2.2 血清膜联蛋白A2水平与皮肤鳞状细胞癌（CSCC）病人临床病理参数的关系血清膜联蛋白A2水平与CSCC病人年龄、性别、发病部位、原发灶相比差异无统计学意义（P>0.05），与淋巴结转移、分化程度、侵犯深度有关，差异有统计学意义（均P<0.05），详见表1。

表1 血清膜联蛋白A2水平与CSCC病人临床病理参数的关系/±s

表1 血清膜联蛋白A2水平与CSCC病人临床病理参数的关系/±s

参数年龄≤50岁50~65岁≥65岁性别男 女发病部位头部面部原发灶瘢痕局部肿块其他淋巴结转移有 无分化程度低中高侵犯深度表皮真皮皮下例数16 23 34 48 25 48 25 12 47 14 10 63 12 15 46 40 20 13膜联蛋白A2/（μg/L）63.54±10.03 65.42±10.26 65.47±10.53 66.08±10.25 65.39±10.42 64.75±10.72 65.48±10.65 66.12±9.68 65.23±10.32 64.91±10.24 75.84±10.13 60.42±10.06 70.52±10.11 65.97±9.26 60.15±8.43 62.53±9.34 69.84±10.42 76.95±11.06 t（F）值（0.21）0.27 0.28（0.05）4.50（7.51）（11.34）P值0.808 0.787 0.783 0.951<0.001 0.001<0.001

2.3 不同预后结局CSCC病人血清膜联蛋白A2水平比较与预后良好组（60.09±10.25）μg/L比较，预后不良组CSCC病人血清膜联蛋白A2（69.67±10.62）μg/L水平显著升高，差异有统计学意义（t=3.47，P<0.001）。

2.4 Cox分析影响CSCC病人不良预后的危险因素以CSCC病人预后结局为因变量，以年龄、性别、分化程度、淋巴结转移、侵犯深度及血清膜联蛋白A2水平为自变量，单因素分析发现，分化程度高、淋巴结转移、侵犯深度及血清膜联蛋白A2水平高是影响CSCC病人预后的危险因素（P<0.05）。Cox多因素分析发现，淋巴结转移、侵犯深度及血清膜联蛋白A2水平高是影响CSCC病人预后的独立危险因 素［HR=2.547、2.726、3.520；95%CI：（1.518，3.274）、（2.035，3.652）、（1.701，7.284），均P<0.001］。详见表2。

表2 影响皮肤鳞状细胞癌（CSCC）病人不良预后的Cox回归分析

3 讨论

膜联蛋白A2又名p36，该基因定位于15号染色体，包含13个外显子和12个内含子，是Annexin超家族中一个重要成员，具有钙磷脂结合特性，广泛分布于细胞核、细胞质及细胞膜中［9］。研究发现，膜联蛋白A2可促进细胞DNA合成及RNA的翻译过程，还可通过Toll样受体4与巨噬细胞、β2糖蛋白I共同作用影响纤溶酶系统，参与纤维酶的形成，加速局部基质降解，促进新生血管芽生及血管外基质重建，在肿瘤血管生成、侵袭转移中发挥重要作用［11］。牛广旭等［12］研究报道，膜联蛋白A2在肝细胞癌组织中呈高表达，且与肝癌病人肿瘤长径、浸润转移有关。陈雪等［13］研究发现，膜联蛋白A2在人宫颈癌组织及细胞中表达水平高于正常宫颈组织及永生化上皮宫颈细胞。本研究结果发现，与对照组比较，CSCC血清膜联蛋白A2水平显著升高，提示血清膜联蛋白A2水平升高可能与CSCC发生有关。

CSCC致病因素复发多样，常见有日光照射、人乳头瘤病毒感染、慢性炎症、免疫抑制等，其发生发展一个逐级连续渐进性过程，主要包括癌前病变、原位癌、浸润性CSCC及转移性CSCC［14］。研究报道，膜联蛋白A2在多种癌症中过表达，且可与肿瘤表面纤溶酶关联，介导细胞外机制降解，促进血管生成，从而促进肿瘤生长［15-16］。Wu等［17］研究报道，膜联蛋白A2在非小细胞肺癌中高表达，与病人临床高分期、淋巴结转移及5年总生存率低有关，且下调膜联蛋白A2表达可抑制非小细胞肺癌细胞增殖和上皮细胞间质化转移过程。He等［6］研究报道，膜联蛋白A2在结肠癌组织中过表达，下调膜联蛋白A2可抑制结肠癌caco2细胞及肝癌SMMC7721细胞活力，其伪足、丝足发育及微丝和微管聚合明显受到抑制。本研究结果发现，血清膜联蛋白A2水平与CSCC病人分化程度高、淋巴结转移、浸润深度增加及预后不良有关，提示膜联蛋白A2可能与CSCC发展进程及严重程度及预后有关，可能通过增加细胞活力，在CSCC浸润转移中起一定作用，推测可能是由于膜联蛋白A2具有一定的膜磷脂结合性，其能与细胞外基质如胶原蛋白、肌动蛋白及肌腱蛋白C等结合参与黏附，从而导致CSCC发生后促进肿瘤细胞黏附而发生浸润及转移的情况。虽然目前国内外关于CSCC与膜联蛋白A2发生关系尚无研究，但是从上述研究及本研究结果，认为膜联蛋白A2在CSCC的表达或是在分子水平上评估CSCC发生以及浸润、转移的可能性还是较大的，关于此结论还需要进一步深入分析。还有研究显示，复发性CSCC相对于原发病灶，侵袭性更加明显，复发性CSCC病人病灶转移率为25%~30%，严重影响病人生存质量［4］。潘腾等［18］研究报道，复发入院、发病至就诊时间长、分化程度低是影响CSCC病人预后的危险因素。邱禹杉等［11］研究报道，膜联蛋白A2是肝癌、非小细胞肺癌、胃癌等多种癌症细胞中表达上调，且与其癌细胞发生侵袭和转移密切相关。本研究结果发现，淋巴结转移、侵犯深度及血清膜联蛋白A2水平高是影响CSCC病人预后的独立危险因素，提示检测血清膜联蛋白A2可能对CSCC病人预后评估有一定指导意义。此外，膜联蛋白A2水平与输卵管癌病人生存率有关，并且是影响输卵管癌病人预后的影响因素［19］。

综上所述，血清膜联蛋白A2水平表达上调与CSCC病人淋巴结转移、分化程度、侵犯深度有关，是影响CSCC病人不良预后的危险因素。但由于本研究样本量少，存在不足，另关于膜联蛋白A2在CSCC中具体作用机制尚不清楚，有待进一步增加样本量、深入探索。