TEAD4、SHP-2及Ang-2表达与口腔鳞癌病理参数和预后的关系

孟媛媛 赵亭亭 吕红娟

口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是头颈部鳞癌中发病率最高的一种恶性肿瘤，据相关数据显示，OSCC 发病率近年有逐渐上升趋势［1］。临床中对于OSCC 患者的治疗方式包括外科手术、放/化疗以及其他辅助治疗，且获得了较好的临床疗效，但患者五年生存率仍在50%以下［2］。如何提高改善患者预后，寻找预后评估相关指标成为临床研究热点。组蛋白赖氨酸去甲基化酶4A（Histone lysine demethylase 4，TEAD4）属于TEA结构域DNA 结合转录因子家族（TEA domain transcription factor，TEAD）中的核心成员，在人体疾病以及各种生物学反应中具有重要的作用［3］。蛋白酪氨酸磷酸酶-2（Protein tyrosine Phosphatase-2，SHP-2）在组织、细胞中均广泛表达，与胚胎发育、细胞迁徙、繁殖、分化等均有密切的联系，有研究显示，SHP-2 的异常表达与多种癌症发生具有密切联系［4］。促血管生成素-2（Angiopoietin-2，Ang-2）是促肿瘤血管生成的相关因子，对病理性血管生成及发育有调节作用，可影响肿瘤的恶性发展［5］。本研究将通过分析TEAD4、SHP-2 及Ang-2在OSCC 患者中的表达情况，了解三者与患者病理参与及预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2019年12月至2020年12月于河北北方学院附属第一医院行外科手术治疗或活检的的OSCC 患者121 例，其中男72 例，女49 例，平均年龄为（59.59±4.16）岁，根据国际抗癌联盟（Union for International Cancer Control，UICC）［6］中分期标准分为：Ⅰ～Ⅱ期55 例，Ⅲ～Ⅳ期66 例；68 例淋巴结转移；组织分化：低分化74 例，中-高分化47 例；肿瘤直径≥3 cm 57 例，＜3 cm 64 例。纳入标准：①均经临床病理诊断确诊为OSCC，符合《口腔鳞状细胞癌时辰化疗中国专家共识》中相关诊断标准［7］；②在检查前均未进行放疗或化疗；③患者知情且同意；④临床资料完整。排除标准：①存在血液系统或免疫系统疾病者；②合并存在心、肝、肾等严重原发性疾病者；③合并其他肿瘤者；④存在严重并发症者。以患者术中病理送检组织作为OSCC 组，癌旁组织（距离癌组织＞5 cm）为对照组。本研究经院医学伦理委员会批准通过。

1.2 方法

1.2.1 资料收集

收集患者临床资料，包括年龄、性别、肿瘤直径、病理特征等，病理特征包括：临床分期（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期）、组织分化（低分化、中高分化）、淋巴结转移。并对患者进行为期12 个月随访，以电话、短信、回院复查等方式了解患者预后情况，随访时间：2021年1月1日至2022年1月1日，根据患者预后情况进行分组：预后良好（无复发、转移、死亡），预后不良（死亡、转移、复发等）。

1.2.2 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 检测

TEAD4、SHP-2 及Ang-2 均使用免疫组化法进行检测。获取病理标本，使用4%甲醛固定，常规石蜡包埋，行4 mm 厚连续切片，用于后续检查。TEAD4 以兔抗人KDM4A 多克隆抗体Abnova（上海煊翎生物科技有限公司）为一抗；SHP-2 使用兔抗人SHP-2 多克隆抗体（英国Abcam 公司）；Ang-2 以兔抗人Ang-2 单克隆抗体标记Ang-2 蛋白（武汉博士德公司）。每组实验均设阳性对照和用PBS 缓冲液代替一抗作阴性对照，阳性对照为已知染色阳性切片。

结果判定［6］：由2 名经验丰富病理科医生在双盲情况下对结果进行判断，TEAD4 表达阳性为细胞膜或胞浆内有棕色颗粒为阳性，SHP-2 阳性为细胞质中出现棕黄色颗粒，Ang-2 以细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。在高倍镜下（×400）随机选择5 个视野对切片进行观察，一个视野200 个细胞，一共计数1 000 个细胞。采用4 级半定量法评分。着色程度：基本不着色为0 分、淡黄色为1 分、黄色为2 分、棕黄色为3 分；阳性细胞百分比：选取有代表性的10 个高倍镜视野，随机计数100 个细胞，计算阳性细胞百分比，＜5%得0 分、5%～25%得1 分、25%～50%得2 分、50%～75%得3 分、＞75%得4 分；每张切片的最后得分为着色程度与阳性细胞百分比乘积，≥3 分为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0 统计软件进行统计分析，计数资料采用n（%）表示，采用χ2检验；并采用多元Logistic回归分析TEAD4、SHP-2 及Ang-2 与OSCC 患者预后关系，以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中TEAD4、SHP-2 及Ang-2 表达情况比较

OSCC 癌组织中TEAD4、SHP-2 及Ang-2 阳性表达均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1、图1。

表1 不同组织中TEAD4、SHP-2 及Ang-2 表达情况比较［n（%）］Table 1 Comparison of TEAD4，SHP-2 and Ang-2 expression in different tissues［n（%）］

图1 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 免疫组化图（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemistry of tead4，SHP-2 and Ang-2（SP，×400）

2.2 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 与OSCC 患者病理特征的关系

TEAD4 在有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期患者中阳性表达占比高于无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期患者，SHP-2 在有淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化为低分化患者中阳性表达占比高于无淋巴结转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、组织分化为中高分化患者，淋巴结转移者Ang-2 阳性表达明显高于淋巴结未转移者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 CEA、AFP、CYFRA21-1 与NSCLC 患者病理特征的关系［n（%）］Table 2 The relationship between CEA，AFP，CYFRA21-1 and pathological characteristics of NSCLC patients［n（%）］

2.3 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 与OSCC 患者预后关系

121 例患者预后良好87 例，预后不良34 例，预后不良组临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化为低分化、有淋巴结转移者组织中TEAD4、SHP-2、Ang-2阳性表达明显高于预后良好组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 TEAD4、SHP-2 及Ang-2 与OSCC 患者预后关系［n（%）］Table 3 Relationship between TEAD4，SHP-2 and Ang-2 and prognosis of OSCC patients［n（%）］

2.4 影响OSCC 患者预后相关因素分析

待分析因素的意义及赋值见表4，经多元Logistic回归分析可知，临床分期、组织分化、淋巴结转移、TEAD4、SHP-2、Ang-2 是影响OSCC 患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。见表5。

表4 待分析因素的意义及赋值Table 4 Significance and assignment of factors to be analyzed

表5 影响OSCC 患者预后多因素Table 5 Multiple factors affecting the prognosis of OSCC patients

3 讨论

以往研究显示，Hippo 信号通路可参与恶性肿瘤的发生，TEAD4 则是其中重要的转录因子，可与Hippo 通路中的核心成员Yes 相关蛋白（Yes-associatedprotein，YAP）/ 转录共激活因子PDZ 结合基序（transcriptional co-activator with PDZ-binding motif，TAZ）形成转录复合物，进而调控下游基因的表达［8］。而基因的异常表达也常被认为是恶性肿瘤发生、发展中的一个重要因素。有研究显示，在前列腺癌中TEAD4 表达异常，在对患者使用特异性小分子阻断剂抑制TEAD4 表达后，患者的癌细胞增殖也受到明显抑制，癌细胞凋亡明显增加［9］。本研究结果显示，TEAD4 在OSCC 患者癌变组织中表达阳性率明显升高，这表明TEAD4 或许可影响OSCC 发生发展。而TEAD4 表达与患者临床分期及淋巴结转移密切相关，说明TEAD4 可能促进癌细胞增殖、转移，进而增加肿瘤的侵袭能力，与以往研究结果相符［10］。

SHP-2 属于蛋白酪氨酸激酶与蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTPs）中的一员，参与细胞的分化、增殖。以往研究显示，SHP-2 与多种肿瘤的发生、发展存在相关性［11］。有研究显示，在乳腺癌、胃癌、宫颈癌组织中SHP-2 为高表达，且SHP-2 突变与白血病之间密切相关［12］。何芳等［13］研究则发现，SHP-2 具有促进细胞迁移、黏附及运动的作用，侧面说明SHP-2 在恶性肿瘤发展中扮演重要角色。本研究结果显示，SHP-2 在OSCC 癌组织中为高表达，且与患者临床分期、淋巴结转移、组织分化程度均存在密切的联系，说明SHP-2 可能参与OSCC 的增殖与转移，SHP-2 或许可作为淋巴结转移预测的相关指标。

有研究显示，OSCC 患者的恶性进展和其肿瘤血管生成之间存在密切联系，但有关OSCC 患者血管生成的调控机制尚未明确［14］。Ang-2 属于促血管生成素中的一员，是近年来发现与血管生成、成熟的相关因子之一。在正常人组织中，Ang-2 主要表达于女性胎盘、卵巢组织的血管重建中，在机体正常组织中并无表达或为极低表达。在多数恶性肿瘤中，如胃癌、脑胶质瘤、肝癌等患者中Ang-2阳性表达率升高，且其表达异常发生于癌变的早期，与肿瘤侵袭程度、预后均有密切的联系［15-16］。本研究结果显示，Ang-2 在OSCC 癌变组织中表达上调，在正常组织中表达较低，与以往研究结果一致［17］，分析原因可能与肿瘤发展过程中新生血管生成，进而引起Ang-2 的表达增加有关。而Ang-2与患者淋巴结转移情况密切相关，说明随着肿瘤恶性程度增加，Ang-2 表达上调，Ang-2 可能通过参与OSCC 患者的血管生成，进而在肿瘤浸润及转移中发挥着作用。

通过分析患者预后情况可知，TEAD4、SHP-2、Ang-2 在预后不良患者中均为高表达，且三者与淋巴结转移、临床分期、组织分级均属于影响OSCC患者预后的相关因素，与以往研究结果相符［18］，说明TEAD4、SHP-2、Ang-2 表达情况对患者预后情况评估有一定参考价值，临床对存在相关危险因素者需引床重视，及时采取干预措施，对TEAD4、SHP-2、Ang-2 高表达者在手术治疗后可合理辅助其他手段来提高患者预后。

综上所述，TEAD4、SHP-2 及Ang-2 在OSCC癌组织中均异常高表达，与患者病理特征及预后均存在相关性，三者或许可成为OSCC 诊断及预后的相关肿瘤标记物，对临床诊疗方案制定也有一定参考价值。