叶黄素对急性酒精中毒小鼠胃黏膜的保护作用

赵丽晶，乔振鑫，于 乐，熊均涵，杨宗霖，李 铭，宋爱南，曾仁凤

(吉林医药学院：a.基础医学院，b.公共卫生学院，c.临床医学院，吉林 吉林 132013)

急性酒精中毒是由于过量饮酒后导致行为和意识的异常，并可能伴有多种器官损伤，严重者危及生命。目前急性酒精中毒患者逐年增加,能够有效预防急性酒精中毒的保护性药物开始受到越来越多的关注。叶黄素是一种天然无害的类胡萝卜素，能有效的清除氧自由基，具有抗氧化、抗肿瘤等作用[1]，对心血管疾病以及预防老年性光斑变性具有一定疗效,但在预防醉酒和保护胃黏膜方面鲜见报道。本实验通过叶黄素对急性酒精中毒小鼠进行预防性干预，探讨叶黄素的解酒作用及对胃黏膜损伤的预防保护作用，为开发新的解酒产品提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康昆明种小鼠90只,清洁级,25～30 g,雌雄各半,购自吉林大学实验动物中心,动物许可证号:SYXK(吉)2014-0013。

1.2 药品、试剂和仪器

叶黄素(西安草翠芯生物科技有限公司，纯度80.14%，批号：Lu150516)。 56°红星二锅头酒(北京红星股份有限公司)。海王金樽溶液(深圳市海王健康科技发展有限公司，批号：20150525)。乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase，ADH)、丙二醛(malond ialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(super oxidedismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)等试剂盒购自南京建成生物工程研究所。772可见分光光度计(上海菁华科技仪器有限公司)。

1.3 分组和给药

小鼠随机平均分为6组，正常对照组，酒精模型组，阳性对照组(海王金樽20 mg/kg)，叶黄素低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg)。正常对照组和酒精模型组灌胃生理盐水，叶黄素各组和阳性组分别灌胃相应剂量叶黄素和海王金樽。给药30 min后，正常组灌胃蒸馏水，其余各组灌胃白酒0.02 mL/g，均为一次性给药。观察翻正反射消失的小鼠数量，记录给酒后翻正反射消失的时间以及翻正反射恢复的时间。

1.4 指标检测

光学显微镜下观察小鼠胃黏膜组织溃疡情况，观察出血点，计算溃疡指数和溃疡抑制率。溃疡指数采用张守仁法[2]：0级胃黏膜完整；l级点状出血点1～5个；2级点状出血点6～10个；3级点状出血点10个以上；4级条状出血1～5条；5级条状出血6～10条；6级条状出血10条以上。溃疡抑制率:溃疡抑制率=(酒精模型组溃疡指数-给药组溃疡指数)/酒精模型组溃疡指数×100%。

HE染色观察胃黏膜组织的病理结构变化。

生化指标检测：血液静置2 h后离心(3500 r/min，10 min)，取血清，严格按照试剂说明检测血清中ADH的含量；胃组织冰浴下制备5%组织匀浆,离心(3500 r/min，15 min),取上清液，按试剂说明检测胃组织中SOD、MDA、GSH-Px的含量。

1.5 统计学处理

用SPSS22进行统计学分析，结果以平均数±标准差描述，多个样本均数的比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验，以P<0.05差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 小鼠醉酒数及醉酒率

与酒精模型组比较，叶黄素低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠醉酒潜伏时间延长,小鼠醉酒后睡眠时间缩短，尤其叶黄素高剂量组明显(P<0.01)，睡眠时间和用药剂量呈反比，叶黄素中剂量组醒酒效果与海王金樽溶液相仿(P<0.05)，见表1。

表 1 叶黄素对小鼠醒酒时间的影响(n=15)

2.2 病理学观察

正常对照组小鼠胃黏膜表面完整，较光滑无出血点；酒精模型组肉眼可见明显水肿，光镜下观察胃黏膜条状出血、糜烂，可见有大量的中性粒细胞及淋巴细胞浸润，腺体间隙扩大，黏膜下层明显水肿；叶黄素低、中剂量组可见部分胃黏膜上皮细胞脱落和少量炎性细胞；叶黄素高剂量组胃黏膜上皮细胞完整无脱落，无明显出血点(图1)。

2.3 胃黏膜溃疡情况和血清中ADH含量

与正常组比较，酒精模型组ADH含量显著降低(P<0.01)；与酒精模型组比较，叶黄素治疗组和阳性组ADH含量增高(P<0.05或P<0.01)。与酒精模型组比较，治疗组溃疡指数均降低(P<0.05或P<0.01)，叶黄素组溃疡抑制率和药物浓度呈正比，见表2。

表 2 小鼠胃黏膜溃疡程度和血清中ADH含量(n=15)

2.4 胃组织SOD、MDA以及GSH-Px含量

与正常组相比，酒精模型组MDA含量明显增高(P<0.05)，而SOD和 GSH-Px含量显著降低(P<0.01)；与酒精模型组相比，叶黄素中、高剂量组MDA含量降低(P<0.05或P<0.01)，而SOD和GSH-Px含量显著增高(P<0.05或P<0.01)，见表3。

表 3 小鼠胃组织中SOD、MDA以及GSH-Px含量(n=15)

3 讨 论

急性酒精中毒主要表现为神经精神症状。小鼠过量饮酒后初始症状为呼吸、心率加快等兴奋状态，接着行走不稳、共济失调，最后进入昏睡期，常以翻正反射消失作为判断急性酒精中毒有效指标。实验结果显示：与酒精模型组比较，叶黄素低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠醉酒潜伏时间延长,小鼠醉酒后睡眠时间缩短，尤其叶黄素高剂量组明显、睡眠时间和用药剂量呈反比，表明叶黄素可以减少或延缓酒精的吸收。大量饮酒会造成胃黏膜损伤[3]，本实验中酒精模型组肉眼可见胃黏膜组织明显水肿；镜下观察胃黏膜出现条状出血、糜烂；HE染色可见有大量的中性粒细胞及淋巴细胞浸润，腺体间隙扩大，黏膜下层明显水肿。上述病理结果表明小鼠大量饮酒后胃黏膜损伤模型成立。饮酒前给予叶黄素和海王金樽，小鼠胃黏膜溃疡出血点等损伤明显减少，HE染色也显示随着叶黄素剂量的升高，胃黏膜水肿、炎细胞浸润等情况明显减轻，表明叶黄素对酒精过量引起胃黏膜组织损伤有预防保护作用。

乙醇是造成急性酒精中毒胃黏膜损伤的直接因素之一[3]。大量酒精进入机体后,首先由胃黏膜敏感性分泌ADH进行首过代谢,降低乙醇的生物利用度[4-5]。加速体内酒精的代谢，减少体内乙醇浓度也是保护胃黏膜的途径之一。乙醇通过胃肠道吸收，分布在肝脏和胃中ADH，是酒精代谢的关键酶[5-6]。本实验结果叶黄素中、高剂量组ADH较酒精模型组明显升高，提示叶黄素可能改善胃黏膜分泌ADH的功能，抑制ADH氧化，促进酒精代谢，对胃黏膜具有一定保护作用。

胃黏膜在乙醇刺激下产生大量的氧自由基，氧自由基可以造成胃黏膜细胞脂质过氧化从而参与胃黏膜的损伤[7]。大量饮酒后与乙醇代谢有关的氧化酶活性增高，通过氧化代谢反应产生大量活性氧自由基(ROS)，ROS水平增高进一步导致了过氧化脂质(LOP)的大量堆积 ，从而损伤胃黏膜细胞[8]。SOD和GSH-Px是机体内ROS的重要酶类清除剂，大量酒精进入机体使其活性减弱，从而使不饱和脂肪酸被大量氧化成LPO。MDA是脂质过氧化物的代谢产物，其含量可反映机体的脂质过氧化程度，进而反映细胞损伤的严重程度[9]。本实验中，与正常组比较，酒精模型组小鼠胃组织中MDA含量增加，而SOD和GSH-Px活性降低，与文献一致。与酒精模型组比较，叶黄素中、高剂量组胃组织中SOD和GSH-Px活性明显增加，于药物浓度呈正相关，而MDA含量逐渐降低，呈良好的相关性。表明叶黄素可通过减少脂质过氧化反应，提高胃黏膜组织抗氧化能力，清除氧自由基，进而抑制胃黏膜的氧化损伤。

总之，叶黄素能有效保护胃黏膜，降低醉酒率和缩短睡眠时间，提高SOD和GSH-Px过氧化酶的活性，降低脂质过氧化产物MDA的含量，进而抑制氧化应激反应，保护ADH免受氧化反应进而促进乙醇代谢。本研究为酒精中毒造成胃黏膜损伤提供药物理论依据，为治疗酒精中毒新药研发提供参考价值。