不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者血清Nrf2、HO-1水平的表达分析

陈继德 何瑛 王鹏森 李健 冯华国

肝损伤是影响慢性乙型肝炎肝硬化预后的重要因素之一。研究表明，慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝损伤是可逆的，早期分析慢性乙型肝炎肝硬化肝损伤程度，并采取有效的治疗方案对改善患者的预后有积极意义[1]。氧化应激及炎症是诱发各类肝脏疾病的重要机制[2]。作为细胞抵御氧化应激的重要转录因子，核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2 related factor 2, Nrf2)可在活性氧或亲电试剂的刺激下进入细胞核，与抗氧化反应原件相互作用，发挥保护细胞的作用[3]。同时，Nrf2是参与肝脏细胞抗氧化应答反应的核心途径，与肝脏损伤的发生密切相关[4]。此外，作为催化胆红素转化为胆绿素的限速酶，血红素氧合酶1(Heme oxygenase1, HO-1)在缺氧、高热、缺血等多种应激状态下均具有细胞保护作用[5]。且有研究指出，HO-1参与了非酒精性脂肪性肝病的发生及发展[6]。基于血清Nrf2、HO-1的作用机制，推测二者可能与慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝损伤程度有关。因此，本研究观察血清Nrf2、HO-1水平与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度的关系，现将结果报道如下。

资料与方法

一、一般资料

选取2019年1月—2020年6月重庆医科大学附属璧山医院收治的95例慢性乙型肝炎肝硬化患者。纳入标准：①符合慢性乙型肝炎肝硬化的诊断标准[7]；②存在乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染史或乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B surface antigen, HBsAg)阳性时间>6个月。排除标准：①近3个月接受抗病毒药物治疗；②存在心、肾等严重器质性疾病；③合并其他类型病毒性肝炎；④合并恶性肿瘤；⑤妊娠期或哺乳期妇女；⑥合并骨质疏松、原发或继发性骨病、骨外伤。患者家属均自愿签署知情同意书。95例患者中男性52例，女性43例；年龄32～65岁，平均年龄(44.45 ± 5.28)岁；慢性乙型肝炎病程2～9年，平均病程(4.14 ± 1.08)年；有饮酒史28例，合并糖尿病11例，合并高血压14例。本研究方案经医院医学伦理委员会审核通过。

二、方法

(一)肝损伤程度评估及分组方法 入院时，根据Child-Pugh分级[8]标准评估入选者肝功能。Child-Pugh A级为轻度损伤，纳入轻度组；Child-Pugh B级为中度损伤，纳入中度组；Child-Pugh C级为重度损伤，纳入重度组。

(二)基线资料统计 (1)一般资料：年龄、饮酒史(有、无)、性别(男、女)、病程、体质指数(Bodymassindex，BMI)[BMI = 体质量(kg)/身高(m)2]、合并基础疾病(是、否，如高血压、糖尿病)；(2)实验室检查资料：采集患者入院时空腹静脉血5 mL，3000 r/min离心10 min，离心半径为15 cm，去上清，采用北京普朗医疗设备有限公司生产的PUZS-300全自动生化分析仪测定三酯酰甘油(Triglycerides, TG)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)、总胆固醇(Total cholesterin, TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterin, LDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartic aminotransferase, AST)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterin，HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase, ALT)，血清Nrf2、HO-1水平采用酶联免疫吸附法测定(试剂盒购于南京建成生物科技有限公司)；取患者空腹静脉血3 mL，采用实时定量荧光PCR检测仪(美国，PE9700)定量分析HBV DNA载量(试剂盒购于上海科华生物工程股份有限公司)。

三、统计学方法

采用SPSS 25.0软件进行统计分析，计数资料以n(%)表示，采用Bonferroni方法校正多组间率的比较，检验水准α=原α水平/比较次数，即0.05/3 = 0.017；计量资料均经过Shapiro-Wilk正态性检验，以表示符合正态分布，采用单因素方差分析多组间比较，采用SNK-q检验两两间比较；Kendall’s tau-b相关性分析血清Nrf2、HO-1水平与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度的关系；采用双变量多项logistic回归分析血清Nrf2、HO-1水平与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度的关系。P<0.05为差异具有统计学意义。

结 果

一、肝损伤程度评估结果

经评估发现，95例慢性乙型肝炎肝硬化患者中Child-Pugh A级29例，占比30.53%(29/95)，Child-Pugh B级35例，占比36.84%(35/95)，Child-Pugh C级31例，占比32.63%(31/95)。

二、不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者基线资料比较

比较不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者的年龄、饮酒史、性别、合并基础疾病、病程及BMI，组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者基线资料比较

三、不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者实验室指标比较

重度组血清Nrf2、HO-1水平依次低于中度组、轻度组，中度组患者血清Nrf2、HO-1水平低于轻度组，差异有统计学意义(P<0.05)，不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者的其他实验室指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者实验室指标比较(±s)

四、血清指标与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度的关系

经Kendall's tau-b相关性分析发现，慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度与血清Nrf2、HO-1水平呈负相关(r<0,P<0.05)。见表3。

表3 血清Nrf2、HO-1水平与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度的相关性

五、血清Nrf2、HO-1水平与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度的关系的logistic回归分析

将慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度作为因变量(1=轻度, 2=中度, 3=重度)，将入院时血清Nrf2、HO-1水平作为自变量，建立多项logistic回归模型，以轻度肝损伤作为参照，检验血清Nrf2、HO-1水平与慢性乙型肝炎肝硬化患者中、重度肝损伤的关系，结果显示，血清Nrf2、HO-1异常表达可能与慢性乙型肝炎肝硬化肝损伤程度有关(OR<1,P<0.05)。见表4。

表4 血清Nrf2、HO-1水平与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度的关系的logistic回归分析结果

讨 论

研究表明，炎症、氧化应激是慢性乙型肝炎肝硬化发病的重要机制，参与了慢性乙型肝炎肝硬化发生、发展的全过程[9]。Nrf2作为一种有效的抗氧化剂，存在于各种组织器官，可调节一系列解毒防御、抗氧化基因，并能激活多种抗氧化酶，参与肝脏细胞的抗氧化应答反应[10]。作为一种保护性蛋白，HO-1分布在肾、肝、骨髓、脾等血细胞代谢活跃的组织器官中，参与机体各类疾病的发生、发展过程[11]。且有研究指出，Nrf2、HO-1与胆汁淤积性肝病患者肝损伤程度相关，可作为疾病严重程度的评估指标[12]。基于上述Nrf2、HO-1与胆汁淤积性肝病患者肝损伤程度的关系，推测血清Nrf2、HO-1水平可能与慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝损伤程度有关。本研究对比不同肝损伤程度慢性乙型肝炎肝硬化患者的基线资料，经Kendall's tau-b相关性分析发现，血清Nrf2、HO-1异常低表达可能与慢性乙型肝炎肝硬化患者肝损伤程度有关。作为一种抗氧化酶，HO-1不仅能利用游离血红素阻断氧化反应，还可通过酶降解产物，来发挥抗炎、抗氧化的作用，参与慢性乙型肝炎肝硬化的发生与发展过程[13]。正常情况下，Nrf2可与Kelch样环氧丙烷相关蛋白-1(Propylene oxide associated protein-1, kporp-1)在细胞质结合，此时处于抑制状态，当机体为应激状态时，Nrf2与kporp-1解离，并转移至细胞核内，结合抗氧化原件，对下游抗氧化酶HO-1表达进行诱导[14-15]。氧化应激将Nrf2激活后，继而上调HO-1表达，通过Nrf2/HO-1信号通路，发挥肝脏保护作用，而当慢性乙型肝炎肝硬化时，体内的血清Nrf2、HO-1活性降低，可降低肝脏细胞的抗炎、抗凋亡及抗氧化作用，加重患者的肝损伤程度[16-17]。最后，本研究经回归分析发现，血清Nrf2、HO-1低表达可加重慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝损伤程度。

综上所述，慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝损伤程度与血清Nrf2、HO-1异常表达有关，因此对于血清Nrf2、HO-1低表达的患者可采取积极的抗炎、抗氧化治疗措施，以改善患者的预后，为临床制订诊治策略提供参考依据。

利益冲突声明：所有作者均声明不存在利益冲突。