循环肿瘤细胞监测与鼻咽癌适形放疗后复发转移预测的作用

黎彩霞，李焕庭，陈登源

广东省罗定市人民医院 肿瘤放射科，广东 罗定 527200

0 引言

CTCs监测通过采集患者的血液样本，提取其中由实体瘤脱落进入外周循环系统的肿瘤细胞，在通过基因分析、抗体检测等方式来判断患者的肿瘤发展、转归情况，该方式在多种肿瘤疾病（肺癌、乳腺癌、胃癌等）监测研究中均有良好的反馈，相关的报道表示多种实体肿瘤的复发转移与CTCs监测具有密切的相关性，被认为可有效监测原发灶、转移灶之间的活动，无论是对于肿瘤早期检测，还是复发转移预测，CTCs监测对于肿瘤复发的预测性优于常规影像学检查，但当前对于鼻咽癌适形放疗后进行CTCs监测的研究相对较少[1-2]。本次研究旨在了解CTCs监测与鼻咽癌适形放疗后复发转移的预测作用，以帮助患者早发现、早治疗，更好地带瘤生存并降低其经济负担，具体内容如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经本院伦理委员会审核，选取广东省罗定市人民医院2020年6月-2022年4月间收诊的50例III期至Ⅳa期的鼻咽癌患者，其中男35例，女15例；年龄22～79岁，平均（49.02±2.25）岁；III期、IVa期患者分别有28、22例。

入组患者均已按照UICC（2008年）[3]标准进行分期，均执行了根治性适形放疗或诱导化疗+根治性适形放疗。本次研究最后1例患者出组时间2022年4月，期间入组患者在术后，术后3个月、术后6个月、术后12个月、术后24个月行CTCs检测，每次检测均在清晨取患者的肘后静脉血5～10mL，并送至检验室进行相应的CTCs检测。

纳入标准：①经病理确诊的鼻咽癌；②按照UICC（2008年）分期为III期至Ⅳa期且执行了根治性适形放疗或诱导化疗+根治性适形放疗；③预计生存期大于3个月，KPS评分≥70分；④自愿加入本研究，依从性好，配合随访复查。

排除标准：①有严重的危害患者安全或影响患者完成研究的伴随疾病；②既往有其他恶性肿瘤病史且接受过放化疗治疗；③原发灶和颈部转移病灶接受过手术治疗；④鼻咽癌为复发[4]。

1.2 方法

患者均接受执行了根治性适形放疗或诱导化疗+根治性适形放疗，在各节点进行CTCs监测时，取晨间肘中静脉血约5mL，以真空抗凝管（ACD管）放置并迅速送检验室，采用益善生物CanPatrol分型检测技术检测。研究所用的多项分离液、缓冲液、单克隆抗体（抗CD45、抗Epcam）荧光剂，血样采集容器等均由益善生物技术股份有限公司提供。

进行CTCs检测时，抽取血样均需先放置抗凝管，离心处理两次，转速为2.5r/min，7min后将上清与下沉物分离，将下沉物再次离心处理2min，加入红细胞裂解液等待15min，裂解液去除红细胞，磁珠孵育混匀去除白细胞，待完全分离后分离上清与下沉物，之后相继以0.4%浓度Tween20、2%浓度胎牛血清液进行离心分离后取沉淀，分离液（或再次离心）分离富集肿瘤细胞，加入CD45-PE、Epcam-APC，避光孵育半小时后加入缓冲液，取沉淀物进行监测，以相应的试剂盒观察3项单克隆抗体的情况，以Epcam阳性、CD45阴性为CTCs，数量超过＜2为阴性，≥2为阳性。

1.3 观察标准

本次研究，通过CTCs监测，比较：①术后1周、术后1个月、术后3个月CTCs阳性率；②术后3个月，阳性、阴性患者的总缓解率（完全缓解：病灶完全消失、血清肿瘤标志物水平正常。部分缓解：病灶直径缩小＞30%。稳定：无显著变化。总缓解率=完全缓解率+部分缓解率）；③术后6个月、12个月、24个月，CTCs检测阳性患者无新增转移率[5-6]。

1.4 统计学分析

采用统计学软件SPSS 22.0进行数据的统计分析，计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验或Fisher's检验；计量资料以（）表示，组间比较采用独立样本F检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 患者术后3个月内阳性率及CTCs数目比较

通过术后适形放疗，患者的阳性率显著降低，术后1周、术后1个月、术后3个月CTCs阳性率降低，同阶段患者的CTCs数目持续减少，差异均有统计意义（P＜0.05），见表1。

表1 患者术后3 个月内阳性率及CTCs 数目比较

2.2 患者术后3个月总缓解率比较

术后3个月，CTCs检测为阳性有13例，阴性为37例，阳性患者的总缓解率低于阴性患者，差异均有统计意义（P＜0.05），见表2。

表2 患者术后3 个月总缓解率比较 [n（%）]

2.3 患者术后24个月内的无新增转移率比较

术后6个月CTCs阳性患者无新增转移率与阴性患者差异无统计意义（P＞0.05），术后12个月、24个月，CTCs检测阳性患者无新增转移率均低于阴性患者，差异均有统计意义（P＜0.05），见表3。

表3 患者术后24 个月内的无新增转移率比较[n（%）]

3 讨论

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是原发于鼻咽黏膜被覆上皮的恶性肿瘤，是我国常见的恶性肿瘤之一，对于3mm以上的肿瘤，常规影像检查能取得较高的检测率，但对于3mm以下的肿瘤组织，当前的影像检测效果并不理想，血清标志物检测的灵敏度和特异性也相对较差，CTCs监测在肺癌、乳腺癌、胃癌等多种实体肿瘤中均有良好的反馈，相关的报道均表示肿瘤的复发转移与CTCs密切相关，早于常规影像学检查手段预估肿瘤复发风险，CTCs监测是一种效果极佳的肿瘤复发监测方法[7-8]。

鼻咽癌患者在术后进行适形放疗是最常见的治疗方法，研究结果显示，50例患者术后、术后1个月、术后3个月CTCs阳性率降低，且同节点患者的CTCs数目持续减少，分析认为，适形放疗对于原病灶肿瘤具有良好的灭活效果，而CTCs监测能够有效的观察患者肿瘤微小病灶在血液循环中的活动情况，通过CTCs监测结果的变化情况，可发现患者的复发转移倾向，明确微小肿瘤病灶阳性情况，这利于临床医师制定科学合理的化疗方案，而患者在根据检测结果执行针对性的适形放疗后，原病灶肿瘤细胞得到针对性的抑制，进入外周血液循环的肿瘤细胞因此减少，患者的CTCs数目和阳性率因此不断下降[9-11]。

另外原发灶经淋巴系统进入外周循环是远处复发、恶性增殖的重要原因，因此术后适形放疗效果的优劣关系到患者有无新增转移[12]，而CTCs监测能辅助医师开展针对性化疗，彭政[13]、杨健筌[14]等学者指出外周CTCs在鼻咽癌患者的早期诊断、病情发展预测和疗效评估上具有重要参考价值，通过早期连续检测CTCs，能有效抑制原发灶的发展和转移，因此术后6个月CTCs阳性患者无新增转移率与阴性患者差异较小，但术后12个月、24个月，CTCs检测阳性患者无新增转移率均显著低于阴性患者，分析认为这说明CTCs阳性患者的总生存期更短，可见CTCs对患者预后预测作用显著。

在术后3个月，CTCs检测为阳性有13例，阴性为37例，阳性患者的总缓解率显著低于阴性患者，分析认为CTCs的变化与疗效有关，通过更具有针对性的放疗措施，原病灶术后残余肿瘤细胞清除效果良好，可见CTCs的监测结果也可作用鼻咽癌病情转归的有效参考与补充，但本次研究未对术后3个月之后的缓解情况进行统计，这可能对研究结果造成一定的偏畸，还需要增大样本量，延长观察时间，开展进一步的深入研究。

综上所述，鼻咽癌患者在进行适形放疗后，采用CTCs监测能够有效的检测患者的CTCs阳性情况，辅助医师对患者进行针对性的诊治，从而帮助患者早发现、早治疗，进而改善患者的生存质量，延长患者的生存时间，可见联合CTCs监测的随诊复查效果优于单纯传统肿瘤复诊检测项目，具有较高的相关性。