早期胃癌患者外周血CDH-17，RHBDD1和miR-135表达水平与临床病理特征的相关性研究

王燕云，初丽敏，王 婵，胡美红，杨 晓，贺丽珠

（石家庄市第三医院a.消化内科；b.老年病科,石家庄 050000）

胃癌为消化系统常见恶性肿瘤，是全球第4大常见恶性肿瘤，其病死率仅次于肺癌，位居恶性肿瘤相关病死率第二位[1-3]。近年来，胃癌发病率明显增长，且发病人群逐渐趋于年轻化[4-5]，因此，早期及时准确诊断胃癌尤为关键。研究显示，早期胃癌患者肝肠-钙黏连蛋白-17（liver-intestine cadherin-17，CDH-17）有明显变化，其可通过介导细胞外基质降解、重塑参与肿瘤发生、发展[6]。菱 形 结 构 域 蛋 白1（rhombic domain protein 1，RHBDD1）作为新近发现可能参与细胞生长的蛋白，有研究指出，其在消化系统恶性肿瘤中含量明显升高，与恶性肿瘤发病有关[7]。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）作为一种内源性非编码小分子RNA，在细胞增殖、分化及凋亡中发挥重要作用，可能参与胃癌发生及发展[8-9]。基于此，本研究分析外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135诊断早期胃癌的价值及与临床病理特征的关系，为临床提供参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 本研究经医院伦理委员会审核批准，回顾性选取2018年5月～2021年6月石家庄市第三医院105例早期胃癌患者作为观察组，其中男性62例，女性43例，年龄35～78（56.51±10.71）岁；纳入标准：①早期胃癌患者均经胃镜、穿刺组织活检确诊，并为初诊患者；②临床资料详细完整。排除标准：①并发心脑血管疾病者；②伴有血液系统疾病者；③凝血功能异常，长期接受免疫抑制剂或糖皮质激素治疗者；③并发肝肾功能障碍者。另选取同期健康体检者60例作为对照组，其中男性35例，女性25例，年龄33～75（54.12±10.45）岁。本研究经我院医学伦理委员会审核批准。两组年龄、性别等资料相比，差异无统计学意义（均P＞0.05）。

1.2 仪器与试剂 CDH-17，RHBDD1试剂盒(芬兰百得有限公司)；实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-135表达试剂盒(英国Abcam公司)。

1.3 方法 入院次日清晨，采集4 ml空腹肘静脉血，其中2 ml置于普通试管内，3 500 r/min高速离心15 min，离心半径为16.5 cm，取上层清液置于干净冻存管内，保存于-70℃环境下待检，采用酶联免疫吸附法测定CDH-17和RHBDD1水平；另2 ml提取总RNA待检，以实时荧光定量聚合酶链反应测定miR-135表达，操作严格遵循试剂盒说明书进行。

1.4 统计学分析 采用统计学软件SPSS21.0处理数据，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，t检验；多组间比较采用单因素方差分析，两两比较用SNK-Q检验，计数资料采用n（%）表示，多组间比较采用χ2检验；多因素分析采用Logistic多因素回归模型；相关性分析采用Spearman相关性；诊断价值分析采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线得到曲线下面积（areas under the curve，AUC）。P＜0.05为 差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达比较 观察组外周血CDH-17(72.41±20.14pg/ml)，RHBDD1(374.26±115.74ng/ml)，miR-135(3.87±1.26)表达均高于对照组(59.69±14.37pg/ml, 214.37±56.41ng/ml, 2.47±0.81)，差异有统计学意义（t=4.304, 10.032, 7.736, 均P＜0.05）。

2.2 外 周 血CDH-17，RHBDD1，miR-135表 达与早期胃癌临床病理特征的关系 见表1。外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达与早期胃癌患者性别、年龄、病灶位置、病灶直径无关，与临床分期、组织学分级有关（r=0.625，0.631，0.657；-0.633，-0.625，-0.674，均P＜0.05）。

表1 外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达与早期胃癌临床病理特征的关系

2.3 外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达与早期胃癌关系的Logistic回归分析 见表2。以本研究选取研究对象为因变量（健康体检者=0，早期胃癌=1），将外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达作为自变量（均为连续变量，实测值）纳入Logistic回归分析，结果显示外周血CDH-17，RHBDD1和miR-135表达为早期胃癌独立危险因素（均P＜0.05）。

表2 外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达与早期胃癌关系的Logistic回归分析

2.4 外 周 血CDH-17，RHBDD1，miR-135表 达对早期胃癌的诊断价值 见表3，图1。以观察组为阳性样本，对照组为阴性样本，绘制外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达对早期胃癌诊断价值的ROC曲线，结果显示外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达对早期胃癌的诊断价值AUC分别为0.736，0.903，0.828，应用Logistic二元回归拟合，构建各指标联合诊断的AUC，结果显示，各指标联合的AUC为0.947。

表3 外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达对早期胃癌的诊断价值

图1 外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达对早期胃癌的诊断ROC曲线

3 讨论

胃癌作为一种起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，早期无典型临床症状，不易被发现，患者出现明显临床症状时已至进展期，导致预后较差，病死率极高。因此，找寻可早期筛查胃癌的生物学标志物对改善胃癌患者预后尤为关键。

CDH-17作为近年来新发现的钙黏蛋白超家族新成员，其包含一个高度保守的胞外域与跨膜区，具有独立发挥黏附作用能力[12]。正常情况下，CDH-17在人体内仅表达于肝、肠组织中，但在一些病理情况下，如恶性肿瘤发生、发展中，CDH-17可表达于其他组织[13-14]。本研究中CDH-17在早期胃癌中呈现为高表达状态，与以往经典黏蛋白家族成员在消化系统肿瘤中表达缺失与低表达不同。CDH-17参与早期胃癌发展分析机制可能为CDH-17与肿瘤细胞黏附机制中发挥重要作用的E-钙黏蛋白在长细胞上定位及功能明显互补，二者之间存在异型反式作用，CDH-17水平升高，通常会协同E-钙黏蛋白表达下降，最终致使黏附机制障碍，加速肿瘤发展[15-16]。

RHBDD1为Rhomboid家族蛋白之一，其包含特殊丝氨酸蛋白酶结构域，是一类可切割单一跨膜蛋白跨膜结构域的丝氨酸蛋白酶[17]，近年来，国内外研究对其在肿瘤发生及发展中作用进行了积极探讨。相关文献显示，RHBDD1可能通过介导细胞生长参与乳腺癌、结直肠癌等发病[18-19]。本研究结果提示RHBDD1异常高表达与早期胃癌发病有关，临床可检测其水平，及时指导胃癌防治工作。细胞学研究表明，RHBDD1通过激活表皮生长因子受体信号通路，促进肿瘤细胞增殖[20]。本研究中提示RHBDD1参与早期胃癌病情进展，充分证实上述观点。

miRNA是一类广泛存在于真核生物中高度保守的内源性非编码单链RNA，其通过调控靶基因表达参与细胞增殖、分化、侵袭及凋亡等生物学行为[21]。近年来，研究表明，miR-135在多种恶性肿瘤中异常表达，有可能作为恶性肿瘤诊治及预后判断的重要指标[22-23]。本研究中miR-135在早期胃癌患者中异常高表达，推测其可能具有癌基因作用，参与胃癌发生。另有研究表明，miRNA可能作为一种新的癌基因，在胃癌发病机制中发挥至关重要作用[24]。此外，本研究发现随临床分期升高，miR-135表达越高，组织学分级升高，miR-135表达越低，提示miR-135可能参与胃癌发展。本研究提示CDH-17，RHBDD1，miR-135表达可作为胃癌诊断的生物学标志物，但本研究样本量较小，且受地区限制，还需临床多地区取样，做进一步研究证实。

综上所述，早期胃癌患者外周血CDH-17，RHBDD1，miR-135表达明显上调，且与临床分期及组织学分级有关，临床可通过检测其水平，准确诊断早期胃癌，为临床治疗提供一定依据，对改善患者预后具有重要意义。