湘西杜仲叶中六六六、滴滴涕的检测

饶青青，欧阳位麒，王 然，张 慧，章发盛

（湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南吉首 416000）

杜仲叶来源于杜仲科植物杜仲的叶片，有调血压、降血糖、调血脂等功效，在湖南和河南等地区有作为食品原料使用的历史。杜仲是我国特色植物资源，在我国分布广泛，但资源利用率较低[1-3]。将杜仲叶与湘西黄金茶鲜叶混合加工，制成黄金杜仲茶，是湘西地区具有代表性的杜仲初加工产品，其成品既结合湘西黄金茶“高氨基酸、高茶多酚、高水浸出物”的品质特点，又能发挥杜仲产品的保健 作用[4]。

茶叶中的农药残留一直以来都受到国家的重视，从1982年农业部“农药安全使用规定”至今陆续推出一系列针对茶叶农药残留的相关标准规定，然而这些标准及其限量指标与国际茶叶进口国家的标准之间还存在着一定的差距，需对我国茶叶农药残留的检测及标准的更新制定进行进一步的研究与探索[5]。六氟环己烷（Hexachlorocyclohexane，HCH）俗称“六六六”，是一种广谱杀虫剂，被用于果蔬、农作物的病虫害控制，由于在全球范围内被大规模使用，在环境介质中大量残留[6]。双对氯苯基三氯乙烷（Dichlorodiphenyltrichloroethane，DDT）俗称“滴滴涕”，是1874年最早被合成的有机氯农药，在农业生产上的使用历程和六六六相似。六六六、滴滴涕具有亲脂性、疏水性的特点，是一种难以被生物降解的持久性有机污染物[7]。此外，其还能沿食物链的蓄积从环境介质如水、土壤等中富集到高营养级的生物体中，从而危害其健康。有研究发现滴滴涕对鸣禽的脑部区域中含类固醇激素受体的发音系统等有影响[8]。除此之外，滴滴涕在影响人体生育、造成神经毒害等方面也有较多的研究[9]。因此，对湘西杜仲叶中六六六、滴滴涕的检测有利于湘西杜仲黄金茶的生产以及湘西杜仲叶的开发利用。

1 材料与方法

1.1 样品与试剂

样品为湘西不同地区采摘的9批杜仲叶样品。

乙腈、正己烷为色谱纯；甲苯为优级纯；固相萃取柱：Tea clean-up Column，1 g，6 mL；对照品：六六六、滴滴涕混合溶液，浓度均为50 µg·mL-1，农业部环境保护科研检测所。

1.2 仪器与设备

7890B型气相色谱仪（检测器：μECD），安捷伦；色谱柱：DB-17（30 m×0.32 mm×0.25 µm）；AB135-S型电子天平，梅特勒-托利多；AH-30全自动均质器，锐科；5810R型离心机，艾本德。

1.3 实验方法

1.3.1 仪器条件

气相条件。气相色谱设置：初始温度150 ℃， 保 持2 min，以5 ℃·min-1升 温 至280 ℃，保 持 4 min，再以120 ℃·min-1升温至300 ℃，保持2 min； 进样口温度：280 ℃；检测器温度：300 ℃；载气：高纯氦气；流速：1.0 mL·min-1；进样量：1.0 µL；进样方式：不分流进样。

1.3.2 标准溶液配制

对照品溶液制备。取六六六、滴滴涕混标制成含量为40 µg·mL-1的使用液（注：含量计算以各同分异构体含量之和为其含量，即六六六含量为α-六六六、β-六六六、γ-六六六和δ-六六六之和，下文同）。准确量取使用液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、5.0 mL和10.0 mL于100 mL容量瓶中，用正己烷定容并摇匀，制成含量为0.04 µg·mL-1、0.20 µg·mL-1、0.40 µg·mL-1、2.00 µg·mL-1以及4.00 µg·mL-1的系列标准曲线。

1.3.3 样品处理

准确称取样品2 g于50 mL离心管中，加入20 mL 乙 腈，15 000 r·min-1均 质 提 取1 min，5 000 r·min-1离心5 min，待净化。准确取10 mL提取液于用 10 mL乙腈-甲苯（3∶1）预洗过的固相萃取柱，下接鸡心瓶，再用25 mL乙腈-甲苯洗涤小柱，40 ℃水浴中旋转浓缩至约0.5 mL。加入5 mL正己烷进行溶剂交换，重复两次，最后使样液体积约为1 mL，待测。

图1 六六六、滴滴涕对照色谱图

表1 六六六、滴滴涕线性方程、相关系数及检出限

2 结果与分析

2.1 线性关系

将配制好的系列标准溶液按1.3.1方法测定，得到的对照溶液图谱如图1所示，六六六和滴滴涕的各同分异构体的线性关系如表1所示。结果表明，本方法对六六六和滴滴涕的同分异构体有较好的分离效果，其线性关系也达到GB/T 27404—2008要求。经计算六六六检出限为0.032 1 mg·kg-1，滴滴涕检出限为0.072 5 mg·kg-1。

2.2 加标回收率实验

按GB/T 27404—2008中检验方法确认技术要求，进行2倍检出限、5倍检出限和10倍检出限 的3水 平 加 标 回 收 实 验，即 按 照0.16 µg·g-1、 0.33 µg·g-1、0.80 µg·g-1的浓度加入对照溶液，结果见表2。由表2可知，六六六、滴滴涕加标回收率均达到标准要求（60%～120%），RSD也满足标准要 求（＜30%）。

表2 加标回收率实验结果

2.3 样品检测

按1.3.3处理9批次的样品并上机检测。结果表明，9批次样品均未检出六六六、滴滴涕，即六六六＜0.032 1 mg·kg-1，滴滴涕＜0.072 5 mg·kg-1。

3 结论与讨论

现阶段有关茶叶中六六六和滴滴涕的检测方法主要有气相色谱法、气质联用法等[10]。本文选用的气相色谱法是农药残留检测中的常用方法，而电子俘获检测器对六六六、滴滴涕具有较高的灵敏度。

近年来，世界各国对茶叶农药残留的检测项目和限量值要求日趋严格，如日本的肯定列表Positive List System、欧盟标准EC 149/2008中对六六六、滴滴涕限量值均为≤0.2 mg·kg-1，我国标准NY/T 288—2018中滴滴涕限量值要求为≤0.05 mg·kg-1，日益严格的标准也使茶叶的生产及检验都将面对更大的挑战。通过检测，湘西地区的杜仲叶中均未检出六六六和滴滴涕，这对湘西杜仲黄金茶的生产具有参考价值。