重庆市合川区5岁及以下儿童感染性腹泻监测结果研究*

刘莉莉，何腊梅△，刘柏林，段华安，彭雨崟，张 丽，王良凤，秦先伟，秦晓红

(重庆市合川区疾病预防控制中心：1.检验科；2.办公室，重庆 401520)

腹泻是目前全球重要的公共卫生问题[1-2]，是导致儿童营养不良、生长发育障碍的重要疾病。婴幼儿由于自身免疫系统发育尚不完全，来自母体的免疫力维持时间较短，抵抗力较差，是肠道病毒感染的高危人群。每年全球约有17亿例儿童腹泻，约52.5万例5岁以下儿童死于腹泻病[3]。引起腹泻因素很多，包括细菌、病毒、非感染性因素等，随着人们生活水平提高和良好卫生习惯的养成，细菌性腹泻得到了有效控制，而病毒感染则越来越多地成为5岁以下儿童腹泻的重要原因[4]。

病毒性腹泻是一组广泛存在并高发的肠道传染病，其具有传播速度较快、涉及范围广、发病率高、不合理治疗或不及时治疗可导致死亡等特点[3]。2012年以来，诺如病毒已成为我国其他感染性腹泻病暴发的优势病原体，病毒性腹泻尤以诺如病毒和轮状病毒的检出居多，札如病毒、星状病毒和肠道腺病毒也有不同程度检出[5]。2016—2019年合川区感染性腹泻的报告数分别为1 384、1 841、2 176、1 795例，其中5岁及以下感染性腹泻报告病例数分别为776、1 338、1 692、1 377例。病例报告主要集中在合阳城、南津街、钓鱼城等3个地区。近年来，合川区中小学和托幼机构儿童群体性腹泻暴发疫情也时有发生。因此，调查分析合川区5岁及以下儿童感染性腹泻病的常见病原体及流行病学特征，采取有效的防控措施势在必行。本研究主要针对本中心3个办事处所在的3个儿童集中就诊医院，即合川区妇幼保健院、合川区人民医院和合川区宏仁医院进行调查。共采集316例0～5岁组儿童腹泻粪便及肛拭子标本，并针对轮状病毒、诺如病毒、轧如病毒、星状病毒、肠道腺病毒、新型冠状病毒等6种病毒进行检测分析，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年6月1日至2021年5月31日到合川区宏仁医院(合阳城街道)、合川区妇幼保健院(南津街街道)、合川区人民医院(钓鱼城街道)以腹泻症状为主就诊的0～5岁儿童作为研究对象，通过所在地区疾控中心办事处调取患者相关资料。腹泻病例为24 h内排便大于或等于3次，并伴有大便性状的改变(呈稀便、水样便、脓血便或黏液便等)。本研究主要针对病毒引起的腹泻，要求采集的大多为水样便。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂 核酸提取仪：中元全自动核酸提取仪EXM6000；实时荧光聚合酶链式反应(PCR)仪：ABI Quant Studio TM7Flex,伯乐CFX96 DeepWeel；核酸提取试剂：zybio核酸提取试剂盒(96人份/盒，重庆中元汇吉生物技术有限公司，试剂批号5107017，渝食药监械生产备20180001号)。核酸检测试剂：轮状病毒A组、诺如病毒GⅠ/GⅡ型病毒重荧光PCR检测试剂盒(48T/盒，试剂批号20061304/1、20111804/1)，札如病毒、星状病毒、腺病毒三重荧光PCR检测试剂盒(48T/盒，试剂批号20060511/1，20121903/1)均采用深圳生科原生物科技股份有限公司生产的核酸检测试剂盒(粤食药监械生产许20051134号)；新型冠状病毒核酸检测试剂盒(50人份/盒，上海伯杰医疗科技有限公司，国械注准20203400065)。上述试剂均在有效期内使用。

1.2.2标本采集、保存和运送 儿科医生采集0～5岁组腹泻儿童大便5 g或5 mL直接放置于装有3 mL病毒采样液(非灭活型)的病毒采样管中，确实不好留存粪便的，可采集患儿肛拭子，肛拭子上应有可见的粪便，采集后立即放入病毒采样管中。完成患儿的流行病学调查并把标本冻存于-20 ℃或以下的冰箱里，尽快集中送到疾控中心开展检测。

1.2.3检测方法 采用实时荧光定量RT-PCR方法对轮状病毒、诺如病毒Ⅰ型、诺如病毒Ⅱ型、札如病毒、星状病毒、肠道腺病毒和新型冠状病毒核酸进行检测。反应体系、反应条件按照深圳生科原生物股份有限公司核酸检测试剂盒说明书和上海伯杰医疗科技有限公司核酸检测试剂盒说明书。轮状病毒、诺如病毒、札如病毒、星状病毒和腺病毒PCR扩增循环参数设置均为：50 ℃ 30 min，95 ℃ 3 min，再按95 ℃ 10 s，55 ℃ 60 s，循环45次，荧光检测在55 ℃；新型冠状病毒PCR扩增循环参数设置均为：50 ℃ 10 min，95 ℃ 5 min，再按95 ℃ 10 s，55 ℃ 40 s，循环45次,荧光检测在55 ℃。反应体系均为25 μL。病毒荧光通道选择FAM、VIC、ROX。

1.2.4判读方法 按照深圳生科原生物股份有限公司核酸检测试剂盒说明书和上海伯杰医疗科技有限公司核酸检测试剂盒说明书中的结果判读要求进行判读。

1.3统计学处理 采用Excel2010和SPSS17.0统计软件包进行数据整理和统计分析，计数资料以率或构成比表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1病毒核酸检测基本情况 共检测了316份0～5岁腹泻儿童粪便及肛拭子标本，检出了肠道腺病毒、诺如病毒Ⅱ型、轮状病毒、札如病毒、星状病毒共133例，总检出率为42.09%，其中肠道腺病毒检出率为8.54%(27/316)，诺如病毒Ⅱ型检出率为8.23%(26/316)，轮状病毒检出率为13.92%(44/316)，札如病毒检出率为5.70%(18/316)，星状病毒检出率为5.70%(18/316)，见表1。99份标本中只有1种病毒感染，16份标本有混合感染，单病原感染(单感)和混合感染(混感)数量比较，差异有统计学意义(χ2=73.23,P<0.05)。未检出新型冠状病毒。见表2。

表1 病毒核酸检测基本情况

表2 单感和混感情况比较

2.2不同地区病毒核酸检测情况 本研究主要针对合阳城街道、南津街街道、钓鱼城街道以腹泻症状为主就诊的0～5岁儿童。病毒检出率最高的是钓鱼城街道(60.0%)，其次是南津街街道(44.4%)，最后是合阳城街道(26.2%)，不同地区检出病原阳性率比较，差异有统计学意义(χ2=27.55,P<0.05)。见表3。

表3 不同地区病毒核酸检测情况[n(%)]

2.3不同月份不同地区病毒核酸检测情况 合川区不同月份0～5岁组儿童腹泻患者病毒核酸阳性率不同。轮状病毒与诺如病毒流行特点皆为冬春季多见，夏秋季少见。2021年1-5月轮状病毒阳性率高于诺如病毒，2020年7-12月诺如病毒阳性率高于轮状病毒。见表4。

表4 不同月份病毒核酸检测情况(n)

2.4不同性别病毒核酸检测情况 合川区316 例0～5岁儿童腹泻病例中，男童190例，女童126例，男女性别比为1.51∶1。男童各种病毒感染率均略高于女童，但总感染率两者差异均无统计学意义(P>0.05)。

表5 不同性别病毒核酸检测情况[n(%)]

3 讨 论

除霍乱、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻是我国法定传染病丙类传染病之首[6]。本研究主要检测合川区5岁及以下儿童感染性腹泻的病原，其中轮状病毒是优势病原,这和其他地区研究结果一致[7]；其次是诺如病毒，肠道腺病毒、星状病毒和札如病毒也有检出。轮状病毒是引起5岁及以下儿童腹泻的常见病原体，可经粪-口、呼吸道和接触等多种途径传播，主要通过粪口途径传播[8]。诺如病毒是导致腹泻的第二大病因，常在冬季引起一个发病高峰。近年来，国内外研究发现，诺如病毒已成为引发感染性腹泻的主要原因，消化道传播是最重要的传播途径，也有接触传播和气溶胶传播[9]。诺如病毒疫情发生的场所主要集中在中小学校和托幼机构，疾病负担严重[10],本研究整理患儿的流行病学资料分析，检出的诺如病毒感染患儿多集中在同一托幼机构，且为关联病例。因此，加强5岁及以下儿童良好卫生习惯教育，教导正确的洗手方法，监督学校、幼儿园、幼儿集中的娱乐场所做好饮食、饮用水、玩具、玩乐设施和卫生间卫生防治工作,能够有效地防止病毒传播。由于不同病原导致的腹泻症状相似，双重或者多重感染情况下无法区别具体是哪种病原引起的相应临床症状，病毒间的相互组合是否会增加疾病的严重程度尚无定论。在今后的监测中，应重视混合感染的临床及病原学监测[11]。

本研究中，3家医疗机构就诊腹泻儿童病原阳性检出率比较，差异有统计学意义(χ2=27.55,P<0.05)，医疗机构对感染性腹泻儿童的筛选和大便标本采集质量可能是造成统计学差异的原因。诺如病毒、轮状病毒、札如病毒在不同医疗机构间阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)，可能与诺如病毒传播能力较强，目前仍无特效药物和特别有效防控手段有关。

本研究中，轮状病毒和诺如病毒引起的感染性腹泻多发生在冬春季节，夏秋较少，具有明显的季节性，这与有关研究报道结果一致[12-13]。主要是因为该病毒具有耐冷不耐热的特性，冬春季节温度较低，室内开窗通风较少，病毒存活时间较长，会污染餐具、饮用水、玩具等，容易造成儿童聚集的学校和托幼机构发生轮状病毒或诺如病毒聚集性/暴发性疫情，引起社会层面的广泛关注。病毒对所有人群普遍易感，不同性别检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。

综上所述，在0～5岁儿童病毒性腹泻的防控工作中，应当针对不同季节和主要致病病原采取相应的防疫控制措施。加强儿童卫生习惯教育，落实学校晨午检，对发现的首例病例应立刻做停课处理，及时控制好传染源；注重对家长的健康教育和宣传，要求家长主动配合病童停课管理和复课要求。疾控中心应加强对学校规范消毒指导，要求学校做好日常消毒、开窗通风。轮状病毒疫苗能有效预防轮状病毒引起的腹泻，医疗机构和学校应加强宣传推广，提高0～5岁儿童轮状病毒疫苗的接种覆盖率。诺如病毒传播能力很强，需要对重点人群开展肠道传染病知识的宣传教育，提高人群的防病意识及能力。疾控中心也应连续、系统、科学地开展相关病原学监测，掌握相关病原变化趋势，做好疾病风险研判，采取科学合理的防控措施，有效降低0～5岁组儿童病毒性腹泻的发病率。