‘古田红’杜鹃花离体快繁体系建立与优化

杜鹃花（Rhododendron simsii Planch.） 为杜鹃花科（Ericaceae）杜鹃花属（Rhododendron）的木本观赏植物，是世界三大高山花卉和我国十大名花之一。杜鹃花传统育苗方式多采用扦插、嫁接法来进行繁殖，但这些技术因为长期无性繁殖会导致病毒累积，导致品种退化，失去其商品价值。而且这些育苗方式还会受到母株材料、季节性等很多条件的限制，无法实现周年生产，甚至有些品种生根困难，难以扩大规模、进行商品化操作。因此，杜鹃花离体培养方式也成为杜鹃花一种重要的繁殖方式。如今，对杜鹃花离体培养主要是从外植体选择、表面消毒时间、培养基种类、植物生长调节剂、培养条件等方面开展，而且也取得了一定成果[1-3]。但不同基因型的杜鹃花在离体培养时，所用的激素种类和浓度并不一致，因此，该研究以自行选育的‘古田红’杜鹃花新品种为材料，开展离体快繁体系研究，为加速杜鹃花新品种推广及实现规模化生产奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

以‘古田红’杜鹃花带有顶芽和腋芽的幼嫩枝条为材料。

1.2 试验方法

1.2.1 无菌体系建立。将杜鹃花枝条剪成3 cm 左右茎段，先用洗衣粉水浸泡10 min，然后流水冲洗30 min。用体积分数75%乙醇消毒30 s，以0.1% HgCl2为消毒剂，设置不同消毒时间（6、8、10、12、14 min），筛选出最佳消毒时间，重复3 次。

1.2.2 不定芽诱导。以WPM 为基础培养基，通过添加不同浓度 ZT（1.0、2.0、3.0 mg/L）、TDZ（0.5、1.0、1.5 mg/L）与NAA（0.5、1.0、1.5 mg/L）组合进行杜鹃花不定芽诱导，pH调整为5.2 左右，3 周后统计不定芽诱导率，重复3 次。

1.2.3 增殖培养。将诱导出来的不定芽接种到WPM 培养基中，附加 ZT 1.0 mg/L 和不同浓度的 NAA（0、0.1、0.3、0.5 mg/L），培养3 周后观察小苗的生长情况，并统计增殖系数，重复3 次。

1.2.4 生根培养。将经过壮苗培养后的组培苗切割成单苗，接种到添加不同浓度 NAA（0.1、0.5、1.0 mg/L）的培养基中，4 周后观察生根情况，并统计生根培养基上组培苗的生根率、平均生根数，筛选出最佳生根培养基。

1.2.5 驯化移栽。当杜鹃花无菌苗根长达到1.0 cm 左右时进行驯化。先将无菌苗放到温室内，然后旋开瓶盖，7 d后去除瓶盖。将无菌苗取出后清洗掉根部琼脂，将杜鹃花移栽到用800 倍多菌灵消毒的草炭土∶珍珠岩（2∶1）基质中，移栽后做好保温保湿，重复3 次。一个月后统计苗的存活率。

组培苗存活率= 存活组培苗数目/ 移栽组培苗数目×100%。

1.3 数据分析

每种处理重复3 次，除了不同激素组合对杜鹃花试管苗生根的影响采用DPS 软件分析，其他记录数据均采用SPSS 19.0 软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同消毒时间对外植体的影响

使用0.1%HgCl2对杜鹃花茎段进行消毒处理，结果表明，随着消毒时间的延长，杜鹃花外植体的污染率和存活率均呈下降趋势（表1）。在消毒12 min 时，污染率最低，为（8.34±1.21）%，而且存活率比较高，达到了（84.12±1.89）%。因此，最佳消毒时间为12 min。

表1 不同消毒时间对‘古田红’杜鹃花污染率及成活率影响

2.2 不同激素组合对不定芽诱导的影响

由表2 可以看出，不同激素配比对杜鹃花不定芽诱导影响比较大。其中以3.0 mg/L ZT +0.5 mg/L NAA 效果最好，不定芽诱导率可以达到98.3%，但由于激素浓度过高，在后期培养过程中叶片会出现皱缩现象，而1.0 mg/L ZT +0.5 mg/L NAA 虽然诱导率低一些，但不定芽长势比较好。而TDZ 总体对不定芽诱导效果不如ZT。因此，不定芽诱导可以采用3.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA 激素组合，但在后期培养时将激素浓度降低。

表2 不同激素组合对‘古田红’杜鹃花不定芽诱导的影响

2.3 激素组合对增殖培养的影响

将诱导出来的不定芽接种到增殖培养基中，结果表明，低浓度的NAA 有利于杜鹃花增殖（表3）。1.0 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA 激素配比最有利于杜鹃花增殖，增殖系数为4.35，且植株比较健壮。随着NAA 浓度增加，增殖系数有所降低，而且长势比较弱，并出现愈伤组织。

表3 不同激素组合对‘古田红’杜鹃花增殖的影响

2.4 生根培养及驯化移栽

将经过壮苗培养后的组培苗切割成单苗，进行生根培养。随着NAA 浓度增加，根系诱导率也增加，在1.0 mg/L NAA 时生根率最高，为76.51%，数量为5.08 条，比较健壮。说明1.0mg/L NAA 有利于杜鹃花生根。

当杜鹃花无菌苗根长达到1.0 cm 左右时进行驯化移栽。将杜鹃花移栽到用800 倍多菌灵消毒的草炭土∶珍珠岩（2∶1）基质中，移栽后做好保温保湿，其存活率可以高达98.46%。

表4 不同激素组合对‘古田红’杜鹃花生根的影响

3 讨论与结论

基因型是影响植物离体培养的内在因素之一。虽然杜鹃花离体快繁体系已经有了很多研究，但是不同基因型的杜鹃花所使用的培养基配方不一致[4-5]。而且，生长素与细胞分裂素的不同配比影响着器官分化方向，在植物培养阶段所需激素种类及配比也不一致。有研究表明，使用一定浓度NAA 有利于不定芽诱导增殖和分化[6]，因此该研究中使用NAA 作为首选生长素进行研究，与一定浓度ZT 或者TDZ 组合，能够诱导出不定芽并且增殖，尤其是与ZT 组合效果更好，这与前人研究结果相一致[5]。因此，该研究最终建立了‘古田红’杜鹃花离体快繁体系：使用0.1% HgCl2消毒 12 min 消毒效果最好，WPM+3.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+6.5 g/L 琼脂粉有利于不定芽诱导，WPM+1.0 mg/L ZT+ 0.1 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+6.5 g/L 琼脂粉有利于杜鹃花增殖，WPM+1.0 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+6.5 g/L 琼脂粉有利于生根，草炭土∶珍珠岩（2∶1）基质可以作为驯化移栽基质。