活力滋源宝抗疲劳和镇静催眠的药效学研究

胥 亦，刘俊宇，曾元莲，何 超，张绍武，宋 军，秦旭华，刘文涛

(1.成都中医药大学，四川 成都 611137；2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610075；3.四川省中医药科学院，四川 成都 610041)

疲劳、焦躁不安、失眠等是现代人常出现的一种亚健康状态，即人体处于疾病与健康之间的状态，已成为危害人类健康的隐患之一[1-2].虽然一些化学药品和生物制品可以消除疲劳，促进睡眠，但随之出现的一些不良反应也限制其应用.因此研究者们将目光转向既可作为天然食品，又能治病防病的药食同源中药.活力滋源宝由人参、枸杞子、蒲公英、蛹虫草等组成，是一类具有保健价值和药用价值的功能性食品.本研究主要对活力滋源宝进行了小鼠抗疲劳和镇静催眠作用部分相关的药效学研究，为其应用提供依据和参考.

1 材料和方法

1.1 试验药物

活力滋源宝，由成都旌奥生物医药科技有限公司提供，批号为:190301.

1.2 实验动物

昆明种小鼠(SPF级)，雌雄各半，体重18～22 g，由成都达硕实验动物有限公司提供，合格证号:SCXK(川)2015-030.小鼠常规饲养在成都中医药大学实验动物房，自由饮水进食，动物饲养环境为室温20～27℃，相对湿度55%～65%.本研究获得成都中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准号:2018-20).

1.3 实验试剂

戊巴比妥钠(北京化学试剂公司，批号:090919)，乳酸(LD)测试盒(批号:20190506)、尿素氮(BUN)测试盒(批号:20190506)、糖原(LG)测试盒(批号:20190506)，均由南京建成生物工程研究所提供.

1.4 实验仪器

ZZ-6小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)，722S分光光度计，上海精密科学仪器有限公司，取暖玻璃热台板，南昌太阳升实业有限公司.

1.5 实验方法

1.5.1 实验分组及给药

按体重将昆明小鼠随机分为4组，每组10～15只，雌雄各半，分别为空白对照组，活力滋源宝高剂量组、中剂量组及低剂量组.给药组分别按体重给予1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg剂量的活力滋源宝(相当于人用量的20倍、10倍、5倍).空白对照组给予等体积的蒸馏水，每天灌胃1次，连续灌胃给药15 d后，开始检测各项指标.

1.5.2 活力滋源宝对小鼠力竭游泳时间的影响

按上述分组及给药方法连续灌胃15 d，末次给药30 min后，将小鼠放入水槽中进行游泳试验，水深30 cm，水温25℃±1℃，每只小鼠尾部负重为体重的10%，以小鼠自放入水槽内至头部不能浮出水面10 s的时间为指标，记录每只小鼠游泳持续时间.

1.5.3 活力滋源宝对疲劳模型小鼠血乳酸(LD)、尿素氮(BUN)及肝糖原(LG)的影响

按上述分组及给药方法连续灌胃15 d，末次给药30 min后，在水温30℃，水深30 cm的游泳箱中，不负重游泳90 min，休息60 min后，将小鼠摘眼球取血，一部分血液静置于4℃冰箱中约3 h，待血凝固后离心取血清，用血清测LD含量；另一部分血液收集于抗凝离心管中，离心后取血浆，用血浆测BUN含量.取完血后，处死动物，立即取肝脏，以0.9% NaCl溶液浸洗，滤纸吸干，按试剂盒法测定LG含量.1.5.4 活力滋源宝对小鼠自主活动的影响

按上述分组及给药方法连续灌胃15 d，于实验前一天禁食不禁水12 h，末次给药1 h后将小鼠放入自主活动箱中，预先适应2 min后，记录小鼠5 min内活动次数.

1.5.5 活力滋源宝对戊巴比妥钠协同致小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响

按上述分组及给药方法连续灌胃15 d，于实验前一天禁食不禁水12 h，末次给药40 min后，各组小鼠分别腹腔注射戊巴比妥钠溶液55 mg/kg(剂量预实验得出)，腹腔注射之后，用手提起小鼠尾部，将小鼠腹部朝上放在37℃的热台板上，分别记录注射时间，睡眠潜伏期和睡眠时间.从注射完成到小鼠翻正反射消失的时间段为睡眠潜伏期，从翻正反射消失到翻正反射恢复的时间段为睡眠时间.

判断指标:小鼠仰卧1 min以上未翻转，为翻正反射消失；小鼠能够由仰卧位自动翻转过来并且在1 min内不再翻转过去，为翻正反射恢复.

1.5.6 活力滋源宝对小鼠悬尾静止时间的影响

按上述分组及给药方法连续灌胃15 d，末次给药1 h后将小鼠尾部用胶布固定于铁台架边缘，使小鼠头向下悬挂，先适应2 min后，小鼠活动时不记录，出现不动时开动秒表，总计6 min内小鼠不动的时间.

1.5.7 统计学方法

所有实验数据通过PEMS 3.2软件处理，数据均采用均数±标准差(Means±SD)表示.组间比较时采用单因素方差分析.两两比较时，若方差齐则采用LSD法，否则采用Tamhane’T2法.以P＜0.05为差异具有统计学意义.

2 结果

2.1 活力滋源宝对小鼠力竭游泳时间的影响

与空白对照组相比，活力滋源宝1.2 g/kg、0.6 g/kg剂量组均能延长小鼠负重游泳力竭时间，具有显著差异(P＜0.05或P＜0.01)，见表1.

表1 活力滋源宝对小鼠力竭游泳时间的影响(±s，n＝15)Table 1 Effect ofHuoli Ziyuanbao on exhaustive swimming time in mice(±s，n＝15)

表1 活力滋源宝对小鼠力竭游泳时间的影响(±s，n＝15)Table 1 Effect ofHuoli Ziyuanbao on exhaustive swimming time in mice(±s，n＝15)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01.

组别 剂量(g/kg) 力竭游泳时间(s)空白对照组 — 181.13±72.80活力滋源宝组 1.2 299.86±140.49**活力滋源宝组 0.6 256.46±109.99*活力滋源宝组 0.3 177.73±76.93

2.2 活力滋源宝对疲劳模型小鼠血乳酸、尿素氮及肝糖原的影响

与空白对照组比较，活力滋源宝1.2 g/kg、0.6 g/kg剂量组能明显减少小鼠血中乳酸的含量(P＜0.01)，活力滋源宝1.2 g/kg剂量组能明显升高小鼠肝糖原的含量(P＜0.05)；活力滋源宝1.2 g/kg、0.6 g/kg剂量组有一定降低小鼠血中尿素氮含量的趋势，但无统计学意义(P＞0.05).见表2.

表2 活力滋源宝对疲劳模型小鼠血乳酸、尿素氮及肝糖原的影响(±s，n＝10)Table 2 Effect of Huoli Ziyuanbao on blood lactic acid，blood urea nitrogen and liver glycogen in fatigue model mice(±s，n＝10)

表2 活力滋源宝对疲劳模型小鼠血乳酸、尿素氮及肝糖原的影响(±s，n＝10)Table 2 Effect of Huoli Ziyuanbao on blood lactic acid，blood urea nitrogen and liver glycogen in fatigue model mice(±s，n＝10)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01.

组别 剂量(g/kg) LD(mmol/L) BUN(mmol/L) LG(mg/g肝组织)空白对照组 — 2.83±0.81 10.57±2.81 14.24±4.40活力滋源宝组 1.2 1.40±0.50** 9.60±2.31 21.57±6.81*活力滋源宝组 0.6 1.82±0.56** 10.44±2.78 17.53±3.83活力滋源宝组 0.3 2.35±0.46 11.26±2.72 18.15±6.51

2.3 活力滋源宝对小鼠自主活动次数的影响

与空白对照组相比，活力滋源宝1.2 g/kg剂量组能明显减少小鼠自主活动次数(P＜0.05)，见表3.

表3 活力滋源宝对小鼠自主活动次数的影响(±s，n＝15)Table 3 Effect of Huoli Ziyuanbao on the number of spontaneous activities in mice(±s，n＝15)

表3 活力滋源宝对小鼠自主活动次数的影响(±s，n＝15)Table 3 Effect of Huoli Ziyuanbao on the number of spontaneous activities in mice(±s，n＝15)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05.

组别 剂量(g/kg) 自主活动次数空白对照组 0.0 118.20±27.37活力滋源宝组 1.2 91.93±20.01*活力滋源宝组 0.6 97.66±18.92活力滋源宝组 0.3 108.20±35.30

2.4 活力滋源宝对戊巴比妥钠协同致小鼠睡眠潜伏期和睡眠时间的影响

与空白对照组相比，活力滋源宝1.2 g/kg、0.6 g/kg剂量组均能明显缩短戊巴比妥钠协同致小鼠的睡眠潜伏期并明显延长小鼠睡眠时间(P＜0.05或P＜0.01)，见表4.

表4 活力滋源宝对戊巴比妥钠协同致小鼠睡眠潜伏期与睡眠时间的影响(±s，n＝15)Table 4 Effect of Huoli Ziyuanbao on sleep latency and sleep time induced by pentobarbital sodium in mice(±s，n＝15)

表4 活力滋源宝对戊巴比妥钠协同致小鼠睡眠潜伏期与睡眠时间的影响(±s，n＝15)Table 4 Effect of Huoli Ziyuanbao on sleep latency and sleep time induced by pentobarbital sodium in mice(±s，n＝15)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01.

组别 剂量(g/kg) 睡眠潜伏期(min) 睡眠时间(min)空白对照组 0.0 8.95±5.78 43.83±21.44活力滋源宝组 1.2 4.89±1.46** 80.12±39.82**活力滋源宝组 0.6 5.75±1.85* 69.21±27.41*活力滋源宝组 0.3 6.88±3.65 38.79±25.79

2.5 活力滋源宝对小鼠悬尾静止时间的影响

延长小鼠悬尾后静止不动的时间(P＜0.05)，见表5.

表5 活力滋源宝对小鼠悬尾静止时间的影响(±s，n＝15)Table 5 Effect of Huoli Ziyuanbao on tail suspension resting time of mice(±s，n＝15)

表5 活力滋源宝对小鼠悬尾静止时间的影响(±s，n＝15)Table 5 Effect of Huoli Ziyuanbao on tail suspension resting time of mice(±s，n＝15)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05.

组别 剂量(g/kg) 悬尾后静止时间(s)空白对照组 — 83.06±19.35活力滋源宝组 1.2 97.33±17.53*活力滋源宝组 0.6 80.26±13.42活力滋源宝组 0.3 80.60±15.56

与空白对照组比较，活力滋源宝高剂量组能明显

3 讨论

亚健康是现代人生活中较容易出现的一种状态，常常表现为疲乏、焦躁不安、食欲不振、失眠等症状，但临床检查往往又无异常发现，对此现代医学并无特异性治疗方法，这种情况在中医上属于“未病”的范畴，“未病”即未发生或将发生的疾病状态，中医学认为其发生机制与人体的“虚”直接相关，所谓“正气存内，邪不可干，邪之所凑，其气必虚”的医学理念，并强调“上工治未病”[3-5].中医学在长期的医学实践中，发现了大量食药同源的药物，对“未病”之虚进行了一定的干预，收到良好的疗效[6].活力滋源宝正是在中医药理论指导下，采用人参、枸杞、蒲公英、蛹虫草等药食同源类中药，利用现代科学工艺研制成的一种具有抗疲劳、促进睡眠的保健品.用现代医学的观点来看，“未病”之虚与现代的疲劳密切相关，疲劳是影响人们日常生活的主要因素及继发性诱导多种疾病的基础病因[7]，因此具有抗疲劳作用的传统食药同源类中药也具有一定治“未病”的功效[8].据统计，能抗疲劳的药食同源类中药，研究文献与产品数量最多的是人参与枸杞[9].人参在我国现存最早的药学专著《神农本草经》中即有明确记载:“主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目，开心益智”；枸杞，味甘性平，《本草纲目》记载其:“久服，坚筋骨，轻身不老”“补精气诸不足”“明目安神”.现代药理研究表明，枸杞具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳、耐缺氧、增强免疫等药理作用，作为中药及功能食品在全世界范围广泛使用[10-12]；蒲公英，味苦甘寒，具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋的功效，也是被广泛应用于医疗及食品保健等多方面的药食同源中药[13].现代药理研究显示蒲公英多糖能促进机体对乳酸能力的清除，促进肝糖原储备，并能延长小鼠力竭游泳时间，具有明显的抗疲劳作用[14]；蛹虫草是为数不多肺肾双补的中药，虫草素是蛹虫草的主要活性成分，药理研究显示蛹虫草及其虫草素具有镇静催眠及抗惊厥作用[15-16].

本次实验显示，活力滋源宝能明显延长小鼠力竭游泳的时间，明显降低疲劳模型小鼠血中乳酸的含量，明显升高疲劳模型小鼠肝糖原的含量(P＜0.05或P＜0.01)；活力滋源宝能减少小鼠自主活动次数、缩短戊巴比妥钠协同致小鼠睡眠潜伏期并延长睡眠时间.实验结果表明活力滋源宝具有抗疲劳及镇静催眠功能，对改善现代人生活中的亚健康状态可提供一定的干预和辅助治疗作用.