前列腺癌组织中泛素偶联酶E2C、蛋白激酶B表达及其与预后相关性

邓兰，廖堃，付琴，徐苓傈，何其英

前列腺癌是男性泌尿生殖系统最常见恶性肿瘤之一，随着我国人口老龄化趋势日渐加剧，前列腺癌发病率逐年上升，对男性健康及生命安全造成严重威胁［1-2］，寻找有效的前列腺癌药物治疗靶点对于提高病人预后具有重要临床意义。泛素偶联酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C，UBE2C）又名泛素结合酶10，是泛素偶联酶（ubiquitin-conjugating enzyme，E2）家族中第十个被识别的成员，其基因定位于染色体20q12.13，该染色体区与多种癌基因的扩增有关［3-4］。UBE2C主要功能是通过与泛素激活酶（ubiquitin-activating enzyme，E1）、泛素连接酶（ubiquitin ligases，E3）协同作用，促进靶蛋白泛素化，同时还具有调节细胞周期中关键蛋白的降解，调控有丝分裂纺锤体检查点的作用［5］。蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKT）是一种蛋白激酶，有AKT1、AKT2、AKT3三个成员，AKT1定位于人染色体14q32区域，在多种恶性肿瘤中异常活跃，可对肿瘤细胞的生长、增殖产生促进作用，已成为抗肿瘤药物的重要研究靶点。已有研究表明UBE2C、AKT1与前列腺癌有关［6-7］，本研究旨在通过分析UBE2C、AKT1在前列腺癌组织中的表达及与预后的相关性，以期为前列腺癌的病情及预后评估提供临床参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2014年1月至2016年12月四川大学华西医院泌尿外科研究所收集的92例前列腺癌组织（前列腺癌组）、70例良性前列腺增生组织（良性前列腺增生组）进行研究。前列腺癌组根据Gleason评 分 可 分 为：Gleason评 分＜7分 者21例，Gleason评分≥7分者71例；根据TNM分期可分为：Ⅰ、Ⅱ期36例，Ⅲ、Ⅳ期56例；根据有无淋巴结转移分为：无淋巴结转移17例，伴淋巴结转移75例；根据术前前列腺特异抗原（prostate specificantigen，PSA）水平可分为：PSA≤10 μg/L者37例，PSA＞10 μg/L者55例。纳入标准：（1）经病理学检查确诊；（2）行前列腺癌根治术；（3）术前未接受放疗、化疗等其他治疗。排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤者；（2）合并心、肝等脏器严重疾病者；（3）复发性前列腺癌者；（4）临床资料不完整。依据随访结果将前列腺癌组分为两组，预后良好组（68例）、预后不良组（24例）。三组年龄、体质量指数（BMI）相比，均差异无统计学意义（P＞0.05）。所有研究对象或其直系亲属签署知情同意书，本研究所用方法符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 方法

1.2.1 Gleason评分 采用Gleason分级系统对前列腺癌进行组织学分级，将前列腺癌组织分为主要分级区及次要分级区，两区相加即为Gleason评分。每区Gleason分级均为1～5级，1级为分化最好，临床少见，肿瘤结节界限清楚，呈致密排列，无浸润；2级为分化较好，腺体排列较为疏松，存在微小浸润；3级为分化中等，临床最为常见，腺体大小不均，形态各异，存在较多浸润；4级为分化较差，腺体融合、呈筛状，或无腺体结构；5级为未分化，无腺体结构，癌细胞为实体片状或条索状，邻近组织存在广泛浸润［8］。

1.2.2 组织中UBE2C、AKT1表达检测 组织标本均为石蜡包埋，4 μm厚度连续切片，采用免疫组织化学法检测不同组织中UBE2C、AKT1表达，试剂盒均购于武汉博士德生物工程有限公司。由两位有经验的病理科医生采用双盲法进行阅片，UBE2C、AKT1主要定位于胞质中，镜下出现黄色或棕色颗粒的细胞即为阳性细胞，每张切片于高倍视野下随机选取10个视野，每个视野内计数100个肿瘤细胞，根据细胞阳性率及染色程度的乘积计分。细胞阳性率计分准则：阳性率＜5%计为0分，5%≤阳性率＜25%计为1分，25%≤阳性率＜50%计为2分，50%≤阳性率＜75%计为3分，阳性率≥75%计为4分。细胞染色程度计分标准：未染色计为0分，淡黄色计为1分，黄色计为2分，棕褐色计为3分。总分＜3分为阴性，总分≥3分为阳性，其中3分≤总分＜6分为低表达，总分≥6分为高表达。

1.2.3 随访 以术后第1天开始计算随访日期，采用电话、门诊或住院方式进行，为期36个月，术后第1年每3个月随访1次，之后每6个月1次，以前列腺癌病人出现转移、复发或死亡为终点事件，未出现终点事件者为预后良好，出现终点事件者为预后不良。

1.3 统计学方法采用SPSS 17.0统计学软件分析数据。计数资料以例（%）表示，采用χ2检验或Fisher确切概率法；采用Cox回归模型分析前列腺癌病人预后影响因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织UBE2C、AKT1阳性表达率比较与良性前列腺增生组相比，前列腺癌组UBE2C、AKT1阳性表达率均较高（P＜0.05），见表1。

表1 前列腺癌92例与良性前列腺增生70例UBE2C、AKT1阳性表达率比较/例（%）

2.2 前列腺癌组UBE2C、AKT1表达与病人临床病理特征关系前列腺癌组UBE2C表达与年龄、TNM分期、术前PSA水平均无关（P＞0.05），与Gleason评分、淋巴结转移均有关（P＜0.05），AKT1表达与年龄、淋巴结转移无关（P＞0.05），与Gleason评分、TNM分期、术前PSA水平均有关，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 前列腺癌92例UBE2C、AKT1表达与病人临床病理特征关系/例（%）

2.3 UBE2C、AKT1表达与前列腺癌病人预后关系分析与预后良好组相比，预后不良组UBE2C、AKT1阳性表达率均较高（P＜0.05），见表3。

表3 前列腺癌92例的UBE2C、AKT1表达与预后关系分析/例（%）

2.4 影响前列腺癌病人预后状况的危险因素分析将临床认为与前列腺癌病人预后状况有关的因素及UBE2C、AKT1指标纳入COX回归分析。以前列腺癌病人预后状况作为因变量，以年龄、Gleason评分、TNM分期、淋巴结转移、术前PSA水平、UBE2C表达、AKT1表达为自变量进行COX回归分析，将年龄≤50岁、Gleason评分＜7分、Ⅰ/Ⅱ期TNM分期、无淋巴结转移、术前PSA水平≤10 μg/L、UBE2C低表达、AKT1低表达均赋值为0，相应地将年龄＞50岁、Gleason评分≥7分、Ⅲ/Ⅳ期TNM分期、伴淋巴结转移、术前PSA水平＞10 μg/L、UBE2C高表达、AKT1高表达均赋值为1。COX单因素分析结果显示，年龄均差异无统计学意义（P＞0.05），Gleason评分、TNM分期、淋巴结转移、术前PSA水平、UBE2C、AKT1均差异有统计学意义（P＜0.05）；COX多因素分析结果显示，Gleason评分≥7分、Ⅲ/Ⅳ期、伴淋巴 结 转移、术前PSA水平＞10 μg/L、UBE2C高表达、AKT1高表达均是影响前列腺癌病人预后状况的独立危险因素（P＜0.05），见表4，5。

表4 影响前列腺癌92例预后状况的单因素分析结果

3 讨论

泛素化是细胞内靶蛋白降解的重要机制，泛素-蛋白酶体通路包含E1、E2、E3，UBE2C是E2家族中研究广泛的重要成员，与肺癌、乳腺癌、结直肠癌等肿瘤关系密切［9-10］。正常生理状态下，UBE2C为低表达，在多数正常组织中几乎难以检测到，其过表达能够促进肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭，抑制UBE2C表达，肿瘤细胞增殖明显减缓，凋亡加快［11-12］。研究发现，UBE2C能够促进肺癌细胞的增殖、迁移，可促进细胞有丝分裂进程，降解细胞周期相关蛋白，进而调节细胞周期进程。另有研究发现，沉默神经胶质瘤细胞中UBE2C表达，可使PI3K-AKT-mTOR信号通路受到明显抑制，进而诱导细胞自噬，促使细胞生存能力降低，UBE2C可能成为神经胶质瘤靶向治疗的靶点［13-14］。UBE2C与前列腺癌的关系已引起研究者的关注，研究发现，敲减前列腺癌干细胞样细胞中UBE2C的表达，能够显著抑制干细胞样细胞中干性相关基因KLF4、SOX2、Oct4、Myc等表达，可能成为抑制前列腺癌干细胞样细胞的治疗靶点。本研究发现，与良性前列腺增生组相比，前列腺癌组UBE2C阳性表达率较高，提示UBE2C与前列腺癌的发生有关。进一步分析显示，前列腺癌组UBE2C表达与年龄、TNM分期、术前PSA水平均无关，与Gleason评分、淋巴结转移均有关，提示UBE2C可能由于评估前列腺癌病人病情严重程度。随访结果显示，预后不良组与预后良好组相比，UBE2C阳性表达率较高，提示UBE2C与前列腺癌病人预后状况密切相关。UBE2C参与前列腺癌发生及病情演变的原因可能是，前列腺癌中高表达的UBE2C可能通过调控泛素依赖蛋白代谢，破坏细胞有丝分裂周期蛋白，使细胞未能顺利完成有丝分裂而迅速进入下一周期，加快肿瘤细胞增殖速度，发挥促癌基因作用。

表5 影响前列腺癌92例预后状况的多因素分析结果

PI3K/AKT信号通路是信号由细胞外向细胞内传递的主要途径之一，其异常活化可能是细胞增殖加快促进肿瘤发生、发展，已被证实与乳腺癌［15］、胶质母细胞瘤［16］等多种肿瘤密切相关。研究发现，上调前列腺细胞中miR-151a-3p的表达可降低PI3KAKT-mTOR信号通路蛋白表达，进而使前列腺癌细胞增殖、迁移受到抑制，可能为前列腺癌的靶向治疗提供临床参考依据［17］。新近研究发现，AKT1在乳腺癌、前列腺癌细胞的增殖及迁移中可能发挥不同于其他肿瘤的作用，激活AKT1可促进乳腺癌、前列腺癌细胞的增殖，但肿瘤迁移能力受到抑制，而抑制AKT1表达可使乳腺癌、前列腺癌的生长减缓，但迁移能力显著增强，这给临床用药带来了问题，广谱的AKT抑制剂可能在抑制肿瘤细胞增殖的同时促进其转移［18-19］。本研究发现，前列腺癌组较良性前列腺增生组AKT1阳性表达率高，提示AKT1可能参与前列腺癌的发生。前列腺癌病人AKT1表达与年龄、淋巴结转移无关，与Gleason评分、TNM分期、术前PSA水平均有关，提示AKT1可能用于评估前列腺癌病人病情发展。随访结果显示，与预后良好组相比，预后不良组AKT1阳性表达率较高，提示AKT1可能与前列腺癌病人预后状况有关。COX回归模型分析结果显示，Gleason评分≥7分、Ⅲ/Ⅳ期、伴淋巴结转移、术前PSA水平＞10 μg/L、UBE2C高表达、AKT1高表达均是影响前列腺癌病人预后状况的独立危险因素，提示可对合并危险因素的前列腺癌病人进行重点关注，并给予积极干预，以提高病人预后状况。

综上所述，UBE2C、AKT1与前列腺癌病人的病情发展及预后密切相关，可能为评估病情及预后提供临床参考依据，但本研究也存在不足之处，本研究样本量小，且随访时间短，在以后的工作中将以此为重点进行深入研究。