高效液相色谱法同时测定食品中5种添加剂

唐 奕

（邵阳市食品药品检验所，湖南邵阳 422000）

食品企业在产品中添加甜味剂（安赛蜜、糖精钠）和防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸），以改善食品的口感、延长保质期[1]。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）对适用范围和限量要求都作出了明确规定[2]。目前这5种食品添加剂使用多个方法标准进行检测，同时测定的报道甚少，造成检验效率低，实验成本高[3]。本试验在GB 5009.28—2016[4]、GB 5009.121—2016[5]、GB/T 5009.140—2003[6]的基础上，优化试验条件，同时测定以上5种食品添加剂，以科学高效保障食品质量安全。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

Agilent 1260高效液相色谱仪（二极管阵列检测器、配自动进样器）；mini UV超纯水机。

安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸，国家标准物质，1000 μg/mL，北京海岸鸿蒙标准物质技术有限公司；甲醇，色谱纯；乙酸铵、亚铁氰化 钾、乙酸锌、硫酸锌和氢氧化钠，分析纯。

试验样品为碳酸饮料、含乳饮料、辣椒酱，市售。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇∶0.02 mol/L乙酸铵溶液（7∶93）；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。

1.2.2 标准溶液配制

安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸混合标准中间溶液（250 μg/mL）：分别准确吸取 12.5 mL安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸标准储备溶液（均为1000 μg/mL）于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。

安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸混合标准系列工作溶液：分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸混合标准中间溶液1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL和5.00 mL于10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配制成质量浓度分别为25 μg/mL、50 μg/mL、75 μg/mL、100 μg/mL和125 μg/mL的混合标准系列工作溶液。

1.2.3 流动相比例

试验选用甲醇∶0.02 mol/L乙酸铵溶液作为流动相，分别采用5∶95、7∶93、10∶90这3种不同的比例进行混合标准溶液的测定。

1.2.4 样品预处理

称取约2 g碳酸饮料于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，超声20 min，加水定容至刻度，过0.22 μm滤膜，待测[3]。

称取约2 g含乳饮料、辣椒酱于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，超声20 min，冷却至室温，加沉淀剂以沉淀蛋白质，混匀，加水定容至刻度，于8000 r/min离心，取适量上清液过0.22 μm 滤膜，待测。本次试验选用两种沉淀剂进行比较测定：沉淀剂1为亚铁氰化钾溶液（106 g/L）+乙酸锌溶液（220 g/L）各2 mL；沉淀剂2为硫酸锌（120 g/L）+ 氢氧化钠（20g/L）各2 mL。

2 结果与分析

2.1 流动相比例的确定

流动相比例的变化直接影响分离效果、出峰时间和顺序，结果显示甲醇∶乙酸铵溶液比例为5∶95时30 min全部分离，分离效果好，具体情况见图1；比例为7∶93时25 min全部分离，分离效果好，具体情况见图2；比例为10∶90时20 min全部分离，分离效果欠佳，出峰顺序略有改变，糖精钠在山梨酸前面出峰，两个峰略有重叠，当样品基质复杂时，容易出现杂质与目标物质分离不开，影响测定结果，具体情况见图3。综合考虑，本试验选择甲醇与乙酸铵的比例7∶93进行检测。

图1 甲醇∶乙酸铵=5∶95时色谱图

图2 甲醇∶乙酸铵=7∶93时色谱图

图3 甲醇∶乙酸铵=10∶90时色谱图

2.2 混合标准曲线的线性关系

按1.2.1条件进行混合标准系列工作溶液的测定，以保留时间和峰面积对浓度分别进行线性回归，5种添加剂在25～125 μg/mL范围内呈现良好的线性关系，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙 酸相关系数分别为0.9999、1.0000、1.0000、0.9999和0.9999。

2.3 加标回收率的测定结果

按本方法进行样品制备，分别在试样中加入5.0 mL 安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸 （50 μg/mL）混合标液（理论加标量为0.25 mg），根据样品类别分别预处理后按1.2.1条件进行测定，做2个平行样。其中，含乳饮料和辣椒酱采用2种沉淀剂进行前处理，然后测定。同时做样品空白。

表1～表3结果显示，5种添加剂的平均回收率为82.6%～104.4%，相对标准偏差为1.3%～4.6%。表2、表3结果显示，2种沉淀剂回收率、精密度均达到理想效果。

表1 回收率测定结果及精密度（碳酸饮料）

表2 回收率测定结果及精密度（含乳饮料）

表3 回收率测定结果及精密度（辣椒酱）

3 结论

本文建立了同时测定食品中5种添加剂的高效液相色谱法，该方法简单快速，分离效果好，回收率高，精密度好，提高了检测效率，降低了检验成本。选用的2种沉淀剂（亚铁氰化钾溶液+乙酸锌溶液、硫酸锌+氢氧化钠）回收效果好，均适用于样品中蛋白质的沉淀处理。