BCL 11A在乳腺癌中的表达及其临床病理学意义

蒋逸婷 郑巧灵 杨映红 冯昌银 陈瑚 林琳

乳腺癌是全世界女性最为普遍的恶性肿瘤之一，最近几年时间以来患病比例逐步增加并且表现年轻化的发展趋势[1]。依据乳腺癌遗传分子基因生物表达谱，就能够划分为几大类重要的乳腺癌亚型，最具备特点性的被叫做管腔A型、管腔B型、HER2过表达型和三阴性乳腺癌。即使伴随着医疗综合应用水平的持续提升，乳腺癌的治疗获得了非常大的发展进度，但是由于其异质性强，预后及生存差异很大。鉴于此，临床上要更加关注于乳腺癌的发生和进展机制，了解乳腺癌病变的发生发展情况，研究肿瘤的发展过程和影响因素，通过分析生物学行为，为治疗方案的制定寻找并确定全新的靶点，这也可以为乳腺癌的早期诊断、治疗和预后提供丰富并且坚实可靠的基本概念原理。B慢性淋巴生物细胞白血病/淋巴瘤11A遗传物质基因是BCL家族的组员，位于人类2P 16.1染色体，在恶性实体肿瘤中存在异常表达，与多种肿瘤的发生有关[2-3]。本次深入研究分析经过检测BCL 11A遗传物质基因在乳腺癌病例中的基因传达实际状况，全面研究和探索讨论BCL 11A遗传分子基因生物表达和乳腺癌产生发展相互之间已有的内部相互联系，为乳腺癌的产生机理供应一些可能的理论参考依据，为乳腺癌的靶向治疗供应新发展思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

病例纳入标准：（1）2013年1月—2020年12月于福建省医科大学附属协和医院手术治疗的乳腺癌患者；（2）研究中归类于的所有患者均经病理学检测，且均已经证实为乳腺癌；（3）术前所有患者均未接受任何治疗；（4）研究中的所有患者均有完整的临床及随访资料；（5）本次研究无论是病例纳入还是研究方法均通过医院伦理委员会批准，符合医学研究的伦理要求。全面去除参考标准：（1）复发性乳腺癌；（2）术前接受了治疗的患者。收集乳腺癌的组织122例，其对应的癌旁组织中随机抽取29例。患者均为女性；年龄29～83岁，中位年龄48岁。

1.2 实验方法

（1）实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）。实验材料：BCL 11A引物、GAPDH 引物都是购买于上海生工生物有限公司，RT-PCR逆转录试剂盒、Real time qPCR试剂盒均购自美国Promega公司，BCL 11A鼠抗人单克隆Ig抗体购自美国Abcam公司。

随机选取所收集病例中的44例乳腺癌组织以及16例癌旁乳腺组织。查阅相关文献获得的引物序列[4]，由Promega公司GoTaq®提供qPCR Master Mix化学试剂盒，在检测过程中严格按照试剂盒上的要求进行操作，对乳腺癌组织及癌旁乳腺组织做实时荧光定量PCR反应操作。最后可知3个复孔Ct数值相差均低于1个周期性循环，溶解处理曲线都表现出锐利对称的单峰。

（2）免疫组织化学染色。收集病例中的乳腺癌的组织122例，癌旁乳腺组织29例所有展开免疫组织化学染色，操作步骤按说明书进行。

1.3 观察指标

实时荧光定量聚合酶链反应中参照国外参考数据文献，内参遗传分子基因选择管家遗传分子基因GAPDH，ΔCt= CtGAPDH平均数值-CtBCL11A平均数值，ΔΔCt=ΔCt实验组-ΔCt对照组。

阴性对照是PBS替代一抗，阳性对比分析是预实验筛出的相互对应阳性生物组织，内对照是切片里的癌旁导管上皮。BCL 11A分子有机蛋白阳性生成物定位在乳腺癌细胞浆和细胞核，表现平均弥漫的棕黄色或者棕褐色的基因表达；癌旁生物组织中BCL 11A分子有机蛋白呈均匀分布的细胞膜棕黄色或者棕褐色的基因表达[5]，HER-2免疫生物组织化学染色结果判断参考《乳腺癌HER2检测指南（2019版）》[6]。

1.4 统计学处理

分析数据的软件是SPSS 25.0，非正态分布所得计量资料的表示方法是[M（P25，P75）]，计数资料表示为n（%），用χ2检验，多个标准样品比较用Kruskal-WallisH秩和检测，P＜0.05是差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BCL 11A mRNA在乳腺癌病例及癌旁中的遗传表达

BCL 11A mRNA在4成分子分种类型的乳腺癌病例生物个体组织和癌旁中均有生物特征遗传表达，参考表1和表2数据。

表1 BCL 11A mRNA在44例乳腺癌及16例正常乳腺组织中的相对表达量P值

表2 三阴性乳腺癌与其他4组组织的组间比较

2.2 BCL 11A mRNA与蛋白表达的关系

对44例乳腺癌16例癌旁生物组织展开免疫组织化学染色检测，最终分析结果可知，参考表3数据，BCL 11A mRNA表达高者，其BCL 11A蛋白表达阳性超过阴性者，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表3 44例乳腺癌和16例癌旁组织BCL 11A mRNA与蛋白表达的关系

2.3 BCL 11A蛋白在乳腺癌组织中的表达

BCL 11A分子蛋白在不同分子分型的乳腺癌里具有不同水平的生物表达，参考表4数据，在这其中结构三阴性乳腺癌中BCL 11A分子蛋白的基因表达（41/67）显著超过管腔A型（3/17）、管腔B型（3/18）和Her-2过表达（4/20）型乳腺癌，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表4 BCL 11A蛋白在122例乳腺癌组织中的表达

2.4 BCL 11A表达与临床及病理学指标的关系

BCL 11A蛋白在生物组织学Ⅲ级组织中的基因表达要显著超过Ⅰ级和Ⅱ级，其差异有统计学意义（χ2=5.876、12.541，P＜0.05）。有淋巴结转移的表达水平更高，ER阴性组、PR阴性组、Her-2阴性组的基因表达水平均明显超过阳性组，差异有统计学意义（P＜0.05）。而年纪和肿瘤大小和BCL 11A分子有机蛋白的基因表达水平并没有明显的关联性。参考表6数据。

表6 122例乳腺癌组织中BCL 11A 免疫组化表达与临床及病理学指标的关系（例）

3 讨论

BCL 11A遗传物质基因处于人类2P 16.1遗传染色体，最开始从鼠类的白血病遗传物质基因中脱离出来[7-8]，主要调控胎儿型血红蛋白向成人血红蛋白转换的过程，在淋巴造血系统肿瘤的发生发展中起着关键作用[9]。近年研究[10]发现BCL11A在恶性实体肿瘤的发生发展中起着重要的作用，是一种转录因子辅助因子，可促进肿瘤的发生和发展，并与患者的不良预后相关[11-12]。

BCL 11A对乳腺干生物细胞及祖生物细胞的分化和成长发育发挥着关键的影响作用。在青春发展期，乳腺终端乳芽的帽生物细胞里具有BCL 11A的基因表达[13]。在成年乳腺成长发育阶段，怀孕最开始阶段其生物表达会明显增高[14-15]。

乳腺癌参考依据其遗传分子基因生物表达谱的不同能够划分为几大类主要亚型，在这其中，最具备特点性的被叫做管腔A型、管腔B型、Her-2过表达型和三阴性型。上述亚型在遗传分子基因生物表达方式、临床特点、治疗反应和预后上都会有不同。而三阴性乳腺癌，其具备特点性的生物组织学转变，包含生物组织学等级较高、肿瘤界限较清、实性的组成构造、推挤性的边缘和（或者）里心纤维组织化等。在这期间，三阴性乳腺癌的ER、PR、HER2都是表现出了阴性。

表5 BCL 11A蛋白在122例乳腺癌生物组织中的基因表达组间对比

本次应用的生物标本，是福尔马林固定石蜡包埋（formalin fixed paraffin encapsulation，FFPE）生物标本，RT-qPCR检测结果和参考数据文献公开发布一致[16-17]。实验最终分析结果可知，BCL 11A mRNA在三阴性乳腺癌生物组织中的基因表达显著超过管腔A型、管腔B型和Her-2过表达型乳腺癌以及癌旁生物组织，说明其可能在推动结构三阴性乳腺癌的产生过程里参加了在这其中的某一个控制环节。Walid T. Khaled等[18]，探究分析了敲除BCL 11A遗传物质基因的小鼠乳腺癌病例模种类型，发现BCL 11A遗传物质基因的敲除对生物细胞活力具有直接性影响。

经过逐渐的实验研究，Walid T.Khaled等[18]指出三阴性乳腺癌病例中，BCL 11A生物表达水平较高的机理可能是复制数目的畸变作用，经过对乳腺癌病例数据信息展开研究，3大约三分之一的三阴性乳腺癌都会有BCL 11A复制数目的增长，和剩余患者对比，其生存比例非常差，并且其复发和转化比例也相比较高[19]。

本次深入研究分析确定了乳腺癌里BCL 11A遗传分子基因和蛋白水平的基因传达之后，还与此同时研究分析了BCL 11A蛋白和乳腺癌的临床病理学参考指标的相互影响关系，结果提醒BCL 11A和乳腺癌的分化作用程度、侵袭转化能力紧密相互联系。三阴性乳腺癌为非常具有侵袭力的恶性肿瘤，预后差、生存比例低并且缺少展开高效鉴别的生物标记物[20]。BCL 11A会产生转化。BCL11A能够明显向上自动调整β-catenin，从而将Wnt/β-catenin信号通路激活，从而促进肿瘤的发生和发展，引起乳腺癌的侵袭与转移，在肿瘤形成中发挥重要的作用[21-22]。

综上所述，在三阴性乳腺癌病例中，转录影响因子BCL 11A的遗传分子基因遗传表达水平非常高，作为一个十分关键的调节控制影响因子，BCL 11A可能逐渐发展成为结构三阴性乳腺癌靶向治疗的全新的遗传分子基因，遏制BCL 11A遗传分子基因有可能逐渐发展成为新治疗方向，为未来乳腺癌免疫治疗标准制定提供了借鉴内容，对完善乳腺癌患者的预后有深远的影响作用。