■阳 刚 陈璟怡 张 伟 舒 刚 冯 静 杨仕群*
(1.宜宾职业技术学院,四川宜宾 644000;2.四川农业大学动物医学院,四川成都 610030;3.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所,西藏拉萨 850009)
龙胆草(Gentiana scabraBunge)为龙胆科龙胆属粗糙龙胆、条叶龙胆、三花龙胆、坚龙胆等植物干燥的根和茎。始载《神农本草经》,列为中品,《药鉴》、梁代陶弘景《名医别录》也都有记载[1]。龙胆草醇提取物主要活性成分为龙胆苦苷等环烯醚萜、裂环环烯醚萜的苷类、龙胆多糖及总黄酮等。已证实龙胆草醇提取物具有保肝、利胆、抗肿瘤、抗炎镇痛、抗病毒、健胃、利尿等作用[2]。近年来许多研究者对龙胆草的化学成分和药理作用进行了研究,其抗菌及抑菌能力已被广泛认可[3]。龙胆草醇提取物多用于体外抗氧化及抑菌活性研究,健胃、利尿等作用尚未有突出表现,在畜禽养殖中应用龙胆草醇提取物的报道也很少见。因此,试验通过研究饲料中添加龙胆草醇提取物对肉种鸡后期生产性能、蛋品质、免疫功能和繁殖性能的影响,旨在为龙胆草醇提取物在肉种鸡生产中应用提供参考依据。
龙胆草饮片购自温江荣州大药房;免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所有限公司。
YP202N 电子天平(上海青海仪器有限公司)、DNM-9602G酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)、TG16-WS离心机(湘仪仪器厂)、RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、EA-01蛋品质自动分析仪(瑞士SONOVA集团)、聚泰8448枚大型孵化机(故城县故城聚泰孵化设备厂)。
单次称取50 kg 龙胆草饮片,剪碎后打成粉末放入提取罐,加入80%乙醇。冷浸72 h 后将提取液倒出,重复浸泡3次。将提取液合并后用减压蒸发器将溶剂回收,得到龙胆草醇提取物5 kg。
试验设计采用完全随机设计,采用单因子对照试验,共42 d,其中预试期7 d,正试期35 d。选用360只50周龄健康黑羽乌骨鸡肉种鸡(由泸州丰岩牧野农业有限公司提供),随机等分为4组,每组6个重复,每个重复15 只。具体分组情况及给药情况见表1。肉种鸡饲喂的基础日粮配方及营养水平见表2。
表1 试验动物分组与给药情况
表2 基础日粮组成及营养水平
1.5.1 生产性能测定
在相同管理条件下,以重复为单位,记录每天产蛋总数、总蛋重、次损蛋数,每隔1 周测定饲粮消耗量,计算平均蛋重、产蛋率、平均日采食量、次损蛋率和料蛋比。
1.5.2 蛋品质测定
于试验第21 天和第42 天,每个重复随机取4 枚蛋进行蛋品质测定。用游标卡尺测量蛋形指数、蛋壳厚度,用蛋品质自动分析仪测定蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度和哈夫单位。
1.5.3 血清免疫指标测定
于试验第42 天,每个重复随机选取4 只肉种鸡,翅静脉采血5 mL,置于离心管中静置2 h,使用离心机3 000 r/min 高速离心10 min,取上清液置于-20 ℃冰箱备用,制备的血清使用试剂盒测定血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量(具体操作严格按试剂盒说明书执行)。
1.5.4 繁殖性能
饲养试验42 d后,对肉种鸡的繁殖力和孵化性能进行评估。采集公鸡精液对各组种鸡进行人工授精。人工授精后5~7 d 收集各组鸡蛋,转移到孵化场的孵化器中,评估受精率、孵化率、健雏率和胚胎死亡率。
试验数据采用SPSS 27.0进行单因素方差分析和LSD多重比较,P<0.05为差异显著,计算结果均以“平均值±标准差”表示。
表3 龙胆草醇提取物对肉种鸡后期生产性能的影响
由表3可知,与对照组相比,各试验组平均蛋重、平均日采食量和次损蛋率差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,低剂量组产蛋率显著提升了4.06%(P<0.05);中剂量组产蛋率显著提升了5.73%(P<0.05),料蛋比显著下降了5.20%(P<0.05);高剂量组产蛋率显著提升了8.08%(P<0.05),料蛋比显著下降了6.00%(P<0.05)。
由表4 可知,与对照组相比,低、中、高剂量组蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度及哈夫单位差异不显著(P>0.05)。低剂量组蛋黄颜色较对照组显著提升了27.68%(P<0.05);中剂量组蛋黄颜色较对照组显著提升了34.10%(P<0.05);高剂量组蛋黄颜色较对照组显著提升了37.92%(P<0.05)。
表4 龙胆草醇提取物对肉种鸡后期蛋品质的影响
表5 龙胆草醇提取物对肉种鸡后期血清免疫球蛋白含量的影响(μg/mL)
由表5可知,与对照组相比,低剂量组IgA含量显著提高了8.29%(P<0.05);中剂量组IgA、IgG、IgM 含量分别显著提高了9.11%、22.85%、38.26%(P<0.05);高剂量组IgA、IgG、IgM 含量分别显著提高了9.20%、22.27%、46.53%(P<0.05)。
由表6 可知,与对照组相比,低剂量组受精率、孵化率、健雏率分别提高了3.71%、1.94%、2.16%(P>0.05),胚 胎 死 亡 率 显 著 降 低 了40.91%(P<0.05)。中剂量组受精率、孵化率、健雏率分别显著提高了4.08%、2.83%、2.59%(P<0.05),胚胎死亡率显著降低了44.90%(P<0.05)。高剂量组受精率、孵化率、健雏率分别显著提高了5.05%、4.09%、2.83%(P<0.05),胚胎死亡率显著降低了55.43%(P<0.05)。
表6 龙胆草醇提取物对肉种鸡后期繁殖性能的影响(%)
龙胆苦苷是龙胆草的主要活性成分之一,已在用作健胃剂、治疗胃肠道疾病方面有悠久历史[4]。龙胆苦苷具有刺激胃液和胃酸分泌的作用[5],还具有提高胃排空活动、促进小肠推进活动、促进胃液分泌、提高胃蛋白酶活性及增加胃蛋白酶排出量的作用[6],可以促进小鼠和大鼠中被阿托品抑制的胃肠动力,并有研究证明其促动力作用的机制与调节血浆中生长抑素、胃泌素水平以及增加胃窦、十二指肠、回肠和空肠血浆胃动素受体的表达,降低十二指肠血管活性肠肽受体2 的表达有关[7]。同时,龙胆泻肝颗粒十二指肠给药可明显增加大鼠的胆汁分泌量,对大鼠具有显著的利胆作用,促进消化吸收[8]。
本试验中,肉种鸡低、中、高3个剂量组平均蛋重较对照组都有一定增加(P>0.05),且以高剂量组平均蛋重最高,各剂量组与对照组比较,产蛋率显著提高和料蛋比(除低剂量组外)显著降低(P<0.05),说明饲料中添加龙胆草醇提取物可以有效促进肉种鸡胃肠道对营养的吸收作用。
鸡蛋品质最重要的是蛋形指数、蛋壳强度、哈夫单位等。其中,蛋黄的颜色能给消费者增加好感,以前是采取人工添加色素的方法。而蛋黄的颜色取决于蛋黄中类胡萝卜素含量的多少,鸡的机体本身不能合成该物质,只能从食物中获取,食物中的色素被机体吸收后,在卵黄和鸡体表沉积,色素含量越多,蛋黄色泽越深[9]。本试验中,肉种鸡低、中、高剂量组蛋黄颜色较对照组均显著增强(P<0.05)。说明饲料中添加龙胆草醇提取物可以有效帮助肉种鸡从饲料中获取更多的类胡萝卜素,增强蛋品质。同时,蛋壳强度也有随添加量的增加而有所增加(P>0.05)。
龙胆多糖、龙胆总黄酮都是龙胆草醇提取物的有效成分,可作为潜在的天然免疫调节剂[10],具有增强机体免疫功能、抗炎、抗过敏和抵抗病原微生物感染的作用。孟博等[11]研究表明龙胆多糖在一定的剂量范围内能够增强禽类的免疫功能, 可以用作禽类的免疫增强剂。王金宏[12]研究发现龙胆多糖可不同程度地升高正常小鼠胸腺指数和脾指数,显著提高正常小鼠的廓清指数,提高单核巨噬细胞系统的吞噬功能,同时也能显著升高小鼠血清的半数溶血值,表明龙胆多糖可增强小鼠的非特异性免疫功能和特异性体液免疫功能。Satnam 等[13]的试验表明龙胆提取物在小鼠免疫试验模型中通过细胞免疫和体液免疫对小鼠产生免疫刺激作用。本试验中,中、高剂量组肉种鸡IgA、IgG、IgM 含量显著提升,表明饲料中添加龙胆草醇提取物对肉种鸡后期免疫功能具有增强作用,与前人的研究一致。
汪曙晖等[14]研究报道,天然抗氧化剂(如硒、维生素A 和维生素E)及植物提取物可以在家禽繁殖功能中发挥重要作用,因为它们可以维持精子和胚胎组织的抗氧化功能。龙胆草醇提取物具有优异的抗氧化性能,总黄酮含量高的提取物具有更强的抗氧化能力[15],试验证明,龙胆草粗提物可以防止高剂量酮康唑(一种具有生殖毒性的抗真菌药物)对大鼠睾丸的生殖毒性和氧化损伤[16]。本试验中,与对照组比较,中、高剂量组的肉种鸡受精率、孵化率、健雏率均显著升高(P<0.05);低、中、高剂量组胚胎死亡率显著降低(P<0.05)。表明饲料中添加龙胆草醇提取物对肉种鸡后期繁殖性能具有增强作用。
龙胆草醇提取物可以显著降低肉种鸡料蛋比,改善蛋黄颜色,提升血清IgA、IgG、IgM 含量,提高受精率、孵化率、健雏率,降低胚胎死亡率,其作用机制需要进一步研究。