超声造影定量参数联合血清miR-211检验对甲状腺结节鉴别诊断的价值*

王畅, 王宏伟, 马钊, 熊辉

南阳市第一人民医院 1超声医学科， 2甲状腺乳腺外科(河南南阳 473000)

甲状腺结节是一种临床常见病，近年来检出率呈逐年增长趋势，有调查显示[1]，普通人群中4%～7%可能会触诊甲状腺结节，影像学检查发现甲状腺结节发病率更是高达30%～67%。该病肿块位于甲状腺内，且伴随吞咽在甲状腺内随之上下移动，多因多种病因而引发，常见于女性[2]。尽管大部分甲状腺结节属于良性，但仍有20%左右的概率是恶性肿瘤[3]。因此，甲状腺结节诊治的关键是鉴别良恶性，鉴别诊断方法的准确性及高效性极为重要[4]。常规超声作为鉴别甲状腺结节良恶性的有效手段，可通过观察结节的回声、边缘、形态等方面进行评估，但许多患者在接受检查时常受本身主观及仪器因素的影响，而导致诊断结果存在误差[5]。近年来，超声造影(contrast-enhanced ultrasound，CEUS)在鉴别甲状腺结节良恶性方面发挥越来越重要的作用，其定量分析可避免由受检者本身主观原因及仪器条件带来的误差[6]。miRNA是一种含19～23个碱基的非编码的小分子RNA，它能够从转录后水平调节基因表达，如降解mRNA、抑制蛋白翻译等[7]。有不少研究发现，miR-211能调控多种肿瘤细胞的迁移能力，在不同的细胞类型中，miR-211通过调控不同的靶基因，来发挥相应的作用[8-9]。miR-211在甲状腺结节中的研究较少，因此，本研究对CEUS检查与血清miR-211水平在甲状腺结节中的鉴别诊断价值进行了探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年3月至2021年3月在本院进行检查的260例甲状腺结节患者为研究对象，男88例，女172例，平均年龄为(51.78±8.13)岁。纳入标准：(1)首次发病并确诊，未经治疗；(2)所有受试者均通过病理检查，以病理结果为诊断金标准；(3)患者及家属均知情同意；(4)均接受CEUS检查。排除标准：(1)合并亚临床甲状腺功能减退及临床甲状腺功能减退者；(2)合并其他内分泌及自身免疫性疾病患者；(3)身体状况较差的患者。本研究经医院伦理委员会批准通过(编号：2020-LW-09)。

1.2 研究方法

1.2.1 常规超声与CEUS检查 常规超声检查：患者平卧，颈后部适度垫枕，充分暴露颈前部甲状腺区域；使用常规二维超声获得结节所在部位、大小、形态、数量、边界及内部回声等信息，并留取图像。CEUS检查：采用PHILIPS iU22超声诊断仪，L9-3探头及频率5～10 MHz进行CEUS检查。造影剂选用SonoVue(意大利Bracco公司)，使用时取25 mg溶解于5 mL生理盐水，即为造影剂溶液，推注造影剂溶液(每次用量为1.5 mL)至肘部浅静脉，同时按下计时键，持续采集至少120 s的动态图像，并存储于硬盘中。

图像分析：采用TOMTEC公司的SonoLiver CAP软件勾画正常甲状腺组织及结节边缘、中心显像最强区的感兴趣区，绘制时间强度曲线并获取CEUS定量参数，包括达峰时间(TTP)、平均渡越时间(MTT)、上升时间(RT)及曲线下面积(AUCCEUS)。

1.2.2 血清标本采集 所有患者均于入院第2天清晨空腹状态下抽血，每例5 mL，3 000 r/min离心10 min后，将血清吸至洁净的离心管中，再离心10 min，完全除去血细胞成分后置于-80℃低温冰箱保存。

1.2.3 qRT-PCR法检测血清miR-211水平 按照RNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)说明书提取血清中总RNA，使用逆转录试剂盒(德国Qiagen公司)逆转录合成cDNA。使用特异性引物和SYBR Prellix Ex TaqTM实时PCR试剂盒(德国Qiagen公司)进行PCR扩增，反应条件为：94℃预变性5 min，94℃ 30 s变性、55℃ 30 s退火、72℃ 90 s延伸，共40个循环。以U6作为miR-211表达的内参，根据公式2-ΔΔCt计算miR-211的表达水平。引物序列见表1。

2 结果

2.1 病理和影像结果 由病理结果得到，有44例患者检测到甲状腺结节恶性，为恶性组；有216例患者仅检测到甲状腺结节良性，为良性组。甲状腺良恶性结节超声图见图1、2。

注：男性，57岁，左侧甲状腺结节。A：常规超声检查显示结节大小约7 mm，一点低回声，边缘不规则；B：CEUS检查显示无强化，形态不规则

注：女性，41岁，右侧甲状腺结节。A：常规超声检查显示结节大小约8.6 mm，明显低回声，边缘不规则，有点状回声灶；B：CEUS检查显示低增强、边界不清、形态不规则和异质性增强，为甲状腺乳头状癌

2.2 两组间CEUS定量参数比较 两组CEUS定量参数TTP、RT比较，差异无统计学意义(P>0.05)；恶性组患者CEUS定量参数MTT、AUCCEUS均明显少于良性组(P<0.05)。见表2及图3、4。

表2 甲状腺良恶性结节CEUS定量参数比较

注：女性，46岁，左侧甲状腺结节，MTT为50.88 s，AUCCEUS为1 723.59 %s

注：女性，53岁，右侧甲状腺结节，MTT为31.05 s，AUCCEUS为941.63 %s

2.3 两组间血清miR-211水平比较 恶性组患者血清miR-211水平明显高于良性组(P<0.05)。见表3。

表3 血清miR-211水平比较

2.4 CEUS定量参数、miR-211单独及二者联合检测对甲状腺结节的鉴别诊断 ROC预测CEUS定量参数(MTT、AUCCEUS)、血清miR-211水平对甲状腺结节的鉴别诊断价值，结果显示，CEUS定量参数MTT对甲状腺结节鉴别诊断的AUCROC为0.786，敏感度为70.5%，特异度为79.6%，95%CI为0.701～0.871；CEUS定量参数AUCCEUS对甲状腺结节鉴别诊断的AUCROC为0.840，敏感度为79.5%，特异度为80.6%，95%CI为0.772～0.908；血清miR-211水平对甲状腺结节鉴别诊断的AUCROC为0.751，敏感度为88.9%，特异度为59.1%，95%CI为0.659～0.843；CEUS定量参数(MTT、AUCCEUS)与miR-211联合鉴别诊断甲状腺结节的AUCROC为0.928，敏感度为77.8%，特异度为95.4%，95%CI为0.886～0.970。见表4、图5。

表4 CEUS定量参数与血清miR-211水平对甲状腺结节的鉴别诊断价值

图5 CEUS定量参数与血清miR-211水平鉴别诊断甲状腺结节的ROC曲线

3 讨论

甲状腺结节是由遗传、环境等多因素导致的甲状腺内出现一个或多个异常的团块结构，是临床最常见的甲状腺疾病[10]。甲状腺结节可单发、可多发，多发结节的发病率较高。且大多数患者无自觉症状，因此，甲状腺结节的触诊漏诊率较高，多由健康体检超声检查发现[11]。有调查显示[12]，近年来，随着社会环境、生活习惯及饮食结构的变化，甲状腺结节的患病率逐年上升，我国甲状腺结节平均检出率明显升高。双功超声扫查普遍应用于临床工作中甲状腺结节的早期筛查与良恶性结节的鉴别诊断[13]。但常规超声图像中良性结节与恶性结节存在一定程度的相似性，对于良恶性结节的鉴别存在一定局限性[14]。因此，寻找新的鉴别诊断指标十分关键。

近年来，随着造影剂SonoVue的发展并在CEUS检查中广泛应用，临床医生更容易观察到甲状腺结节内血管分布及血流灌注情况，可作为常规超声的辅助诊断[15]。CEUS操作方便、无辐射，可通过对比增强显像，实时动态观察甲状腺周围微循环情况，较常规超声能更直观的反映肿瘤血管的走行和分布，同时CEUS定量参数能客观评估甲状腺结节的良恶性[16]。施燕芸等[17]研究结果表明，观察CEUS定量参数AUCCEUS有利于区别甲状腺良恶性结节，CEUS可弥补常规超声的不足为甲状腺良恶性结节的诊断提供更多有利信息。本研究结果显示，恶性组患者CEUS定量参数MTT、AUCCEUS均明显低于良性组，与施燕芸等[17]研究相似，提示CEUS定量参数MTT、AUCCEUS与甲状腺结节的良恶性有一定关系。进一步采用CEUS定量参数MTT、AUCCEUS的数据进行ROC分析，结果显示，CEUS定量参数MTT、AUCCEUS对甲状腺结节鉴别诊断的AUCROC分别为0.786、0.840，敏感度分别为70.5%、79.5%，特异度为分别为79.6%、80.6%，提示检测CEUS定量参数MTT、AUCCEUS能够在一定程度上为甲状腺结节进行鉴别诊断提供依据。

miR-211是miRNA家族中位于人类染色体Xp11.3位置的成员，miR-211分子结构较短，稳定性较高，能够识别转移位点的恶性肿瘤组织的来源[18]。大量研究均发现，miR-211在许多实体恶性肿瘤中存在异常表达，如在乳腺癌、胃癌、原发性肝细胞肝癌及卵巢癌等恶性肿瘤组织中为高表达，即miR-211发挥促癌基因的功能[19-21]。但也有研究表明，miR-211在宫颈癌及脑胶质瘤等恶性肿瘤中呈低表达，即发挥抑癌基因的功能[22-23]。研究表明miR-211在不同组织及疾病中发挥不同作用，而其在甲状腺结节中的研究较少。因此，本研究对miR-211在甲状腺结节中的表达及其鉴别诊断价值进行了探究，结果显示，恶性组甲状腺结节患者血清中miR-211水平显著高于良性组患者血清中表达，猜测血清miR-211水平可能能部分反映甲状腺结节的良恶性。另ROC结果显示，血清miR-211水平对甲状腺结节鉴别诊断的AUCROC为0.751，敏感度为88.9%，特异度为59.1%；miR-211与CEUS定量参数MTT、AUCCEUS联合鉴别诊断甲状腺结节的AUCROC为0.928，敏感度为77.8%，特异度为95.4%。提示血清miR-211水平能够作为甲状腺结节良恶性鉴别诊断的生物学指标，且CEUS定量参数MTT、AUCCEUS与miR-211水平联合诊断的AUCROC和特异度相对较高，对甲状腺结节良恶性的鉴别具有良好的诊断价值，更有利于为甲状腺结节的鉴别诊断提供依据。

综上所述，CEUS定量参数MTT在恶性组明显缩短，AUCCEUS在恶性组明显减少，miR-211在恶性组显著高表达，CEUS定量参数MTT、AUCCEUS联合miR-211对甲状腺结节的良恶性鉴别具有更好的诊断价值。

利益相关声明：本研究不存在有关的利益冲突。

作者贡献说明：王畅负责提出研究选题、设计方案、获取经费、技术或材料支持，实施研究过程，采集整理数据，起草论文；王宏伟给予指导性支持；马钊负责配合整理数据、完善分析数据、整理文献；熊辉负责修改论文。