天然多糖组合物缓解干皮症的功效及机理研究

干皮症是一种皮肤科常见病，由于皮肤免疫屏障功能的损坏，皮肤保湿能力下降而引起的病变。以皮肤干燥为特点的皮肤病如老年干燥症、特异性皮炎和季节性干燥症等症状,系统性疾病如肾功能衰竭

、胆汁淤积也会引起严重的干皮症，其早期主要表现为皮肤干燥、瘙痒、出现裂纹等，且伴随不同程度的瘙痒，如不及时治疗会进一步发展为湿疹

。目前，皮肤干燥症瘙痒的发病机制尚未完全明确，建立适宜的动物模型，有助于研究其发病机制。丙酮—乙醚—水（Acetone—Ether—Water，AEW）模拟的干皮症模型，其机制为去除角质层中的脂质成分如神经酰胺、胆固醇和游离脂肪酸,破坏皮肤的屏障功能

，引起皮肤干燥发炎。目前临床上对于干皮症等症状主要应用糖皮质激素类外用药物进行治疗，但是长期对患者应用激素类外用药物会导致其皮肤出现色素沉着、皮肤萎缩以及毛细血管扩张等不良反应

。

左小龙觉得黄莹要登场了，马上告辞刘必芒，下楼到了围观的人群里。一切虚假的英雄气概在马子面前都得现实一点，尤其是没有泡到的马子。

大量研究表明，多糖具有抗炎、调节免疫反应、抗氧化、抗衰老等多种生物活性。多糖通过影响细胞的分裂和分化，调节细胞的生长和衰老，增强淋巴细胞活性，促进抗体生成等，尤其是对人体免疫功能的影响

，可作为免疫增强剂使用。南沙参（Radix Adenophorae）、枸杞（Lycium Barbarum L.）、玫 瑰（Rosa Rugosa）、云 芝（Coriolus Versicolor）以及黄芩（ Scutellaria Baicalensis Georgi）均始载于《神农本草经》，用药历史悠久，为中医临床和中成药中最为常用的中药。南沙参当中含有的多糖具有低分子量将会呈现出更好的抗氧化活性，并且对血清抗体的水平产生有显著的提高作用

。表明南沙参多糖成分对小鼠免疫功能有一定的调节作用；枸杞多糖在脂多糖（LPS）诱导的炎症反应中，表现出一定的抑制免疫反应的作用，同样表明枸杞多糖在免疫炎症反应中发挥重要的调节功能

；云芝多糖能提高机体免疫功能增强机体抗感染能力；玫瑰多糖具有的抗氧化功效在化妆品领域也被广泛运用

。多糖是黄芩的重要组成部分，但是目前针对黄芩多糖的研究相对较少，还处于初步阶段。但是黄芩当中含有黄酮等物质基础，具有良好的抗炎、抗氧化、免疫调节的作用

。

本研究基于多糖的生物学活性，将南沙参多糖、枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖、黄芩多糖进行筛选及配方组合，复配成五种多糖组合物，通过AEW模拟的干皮症小鼠模型研究该组合物抗干燥、巩固皮肤屏障的作用机理。

01 材料与方法

1.1 主要材料、试剂、仪器与试验动物

超高压均质机 JN-02HC，广州聚能纳米有限公司；电热恒温水浴锅DK-S22，上海精宏试验设备有限公司；离心机Z326K，德国贺默公司；数控超声波清洗器KQ3200DE，昆山市超声仪器有限公司。

九水合硫化钠（≥99.9%），阿法埃莎；生理盐水（0.9%），广州美仑生物科技有限公司；丙酮（≥99.5%），无水乙醇，广州化学试剂厂 ；多聚甲醛（4%），阿拉丁；乙醚（500mL），霍尼韦尔；蒸馏水，实验室自制。

1.2 天然多糖的制备、筛选及多糖组合物的复配

参考王淑萍等的实验方法

取晒干之后的南沙参，粉碎后取20g与200mL体积分数为95%的乙醇溶液混合，密闭静置过夜，过夜后过滤加入150mL纯化水，置于90℃恒温水浴锅恒温加热3h，用300目滤袋过滤得悬浊液，静置2h后将悬浊液用双层中速定性离心纸过滤，得到植物多糖水溶液，烘干得到植物多糖提取物。枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖、黄芩多糖的提取方法与南沙参多糖提取方法相同，均为水提醇沉法提取。

提取一定量植物多糖水溶液至100mL容量瓶，用纯化水定容至刻度线，移取2mL该溶液至试管，再各加5 %苯酚溶液1.0mL，摇匀，然后加入5.0mL浓硫酸使其充分混匀，置于沸水浴中加热15min，取出后在冰浴中冷却至室温。取100μL溶液于96孔板中，在酶标仪中490 nm处对样品测定吸光值。将吸光度与多糖标准曲线对比，得出该溶液多糖浓度。

DRGs (Diagnosis Related Groups，DRGs)，即“按疾病诊断相关分组”，属于按病种付费方式的一种，它是依据年龄、疾病诊断、合并症、并发症、治疗方式、病症严重程度及转归等因素，将患者分入若干诊断组进行管理的体系。每个诊断组内的医疗服务价格相同，根据患者所属组别一次性对医院进行资金补偿。DRGs付费方式是当今世界上公认的比较先进的付费方式之一。这种付费方式不仅鼓励医疗机构加强医疗质量管理，提高诊疗水平，同时也促使参保人员一同节约费用，可以有效控制医疗保险费用的不合理增长。

对于夫妻双方同为相同致病基因携带者的家庭，在夫妻双方充分知情并同意情况下进行产前诊断，经超声介导行绒毛穿刺术或羊膜腔穿刺术取得胎儿样本，进行产前基因检测。

船舶靠离泊航行过程中，会受到多种因素的影响，导致航行安全受到威胁，在船舶靠离泊航行过程中，为保障航行安全，应当首先对安全事故成因加以明确，强化船舶港口及泊位优化建设，并充分发挥拖轮的有效协助作用

多糖组合物包括复配：枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖组合形成复配1；黄芩多糖、南沙参多糖、云芝多糖组合形成复配2；南沙参多糖、枸杞多糖、玫瑰多糖组合形成复配3；黄芩多糖、云芝多糖、玫瑰多糖组合形成复配4；黄芩多糖、枸杞多糖、南沙参多糖组合形成复配5。以上五种复配的多糖质量浓度均为0.5%（w/v）。

1.3 AEW干燥动物模型、分组及给药方法

参考Miyamoto T等的实验方法[2] BALB/c雄性小鼠80只，5周龄，体重20～25g，购自广东省医学试验动物中心（动物批号：SCXK(粤)2016-0041）。小鼠标准环境饲养，室温维持在（24±0.2）℃，保持昼夜12 h节律，自由饮水、摄食。适应性饲养 1 周后进行实验。70只小鼠随机分为空白组、模型组、复配1、2、3、4、5组（共7组，每组10只）。实验前一周剔除小鼠背部毛发（面积约2cmX2cm），直至皮肤完全显露。每天固定于上午 9 时和下午 5 时涂抹 AE 和水溶液，制备小鼠干皮症模型。模型组：用浸泡 AE 溶液 （丙酮和乙醚等体积混合） 的棉片在剃毛处涂抹15s，再用浸泡蒸馏水的棉片于同一部位涂抹 30s，连续 7d。处理之后 90min，将5种复配组分别涂抹于小鼠背部200μL/只，连续处理7d。空白组小鼠皮肤涂抹蒸馏水，时间频率与模型组相同，第 7 天处死小鼠，取裸露的背部皮肤组织保存在-80℃冰箱，用于后续实验。

1.4 PASI评分

观察各组小鼠每天的背部皮损变化情况，依据 PASI 评分标准给予小鼠皮损处红斑(erythema)、鳞屑(scales)和浸润增厚程度( thickness)0～4 的积分: 0，无; 1，轻度; 2，中度; 3，重度;4，极重度。将三者积分相加得到总积分(0～12) ，对各组小鼠积分取平均值后绘制趋势线。

1.5 H&E染色

将耳部及背部皮肤组织用4%多聚甲醛固定，常规脱水后，石蜡包埋。将修整好的蜡块放置在石蜡切片机上切成厚度为4 μm的切片。切片漂浮于摊片机40 ℃温水上将组织展平，用载玻片将组织捞起，并放进60 ℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。切片于显微镜下观察并随机选取视野进行拍照并测量其厚度。

1.6 甲苯胺蓝染色测定皮肤肥大细胞密度

通过对小鼠背部皮肤HE染色，测量其背部皮肤厚度，结果如图2所示。与空白组比较，模型组小鼠背部表皮厚度增厚；与模型组比较，各多糖复配组的小鼠背部表皮厚度均显著下降。

1.7 实时荧光定量PCR检测

实验结果采用单因素方差分析，采用GraphPad软件作图。使用Image J软件处理甲苯胺蓝染色图片，所有数值均用“均数±标准误差”。各组间差异比较用单因素方差分析（One-Way ANOVA），进行组间两两多重比较。

1.8 统计学处理

检测皮肤组织中 IL-6 mRNA、FLG mRNA、MCP-1 mRNA、cAMP mRNA的表达。使用总 RNA 提取试剂盒从小鼠皮肤组织中提取 mRNA，测定 RNA 含量、纯度符合要求。使用反转录试剂盒合成cDNA。以GADPH作为内参基因，根据2-ΔΔCt 算法进行各组 mRNA 表达量检测。引物由广州赛维尔生物科技有限公司合成，总RNA提取试剂盒购自赛维尔，货号：G3013。引物序列见表1。

02 结果

2.1 多多糖提取及含量测定结果

5种植物提取的多糖如表2所示，其中枸杞多糖固重达到8.77g，多糖含量达到43.85%；黄芩多糖固重达到7.10g，多糖含量达到35.50%。

2.2 AEW模型小鼠背部皮肤PASI评分

各多糖组合物复配对AEW模型小鼠背部皮肤干燥状况抑制情况如图1(A)所示。与空白组比较，模型组小试背部皮肤出现干燥、脱皮等症状；与模型组比较，各多糖复配组干燥、脱皮等症状明显好转；其PASI评分如图1(B)所示。各多糖复配组的第17天PASI评分均明显低于模型组。

我讪讪地冷笑，心想，我哪里买得起房，我拿什么买呀。但我没说话。虽然我没说话，但我脸上的气色显然把我的心理活动暴露出来了。

创业教育的根本目的在于培养受教育者的创业意识、正确认识创业在社会中的作用与自我雇用的好处、提供创办与经营企业所需的知识和技能、提高就业能力。创业教育和市场营销专业教育是辩证统一的，教师首先对创业教育的这一本质有正确深刻的认识，树立全新的创业教育理念，不断提高自身的综合素养，在教学内容设计、教学方法选择、教学手段利用等过程中注重专业知识与实践相结合，以塑造应用型人才的综合素质。

2.3 AEW模型小鼠背部皮肤厚度测量及统计

参照许静等

方法测定皮肤肥大细胞活化水平。用于实验的石蜡切片的皮肤组织用曲别针反贴固定在硬质塑料卡上，防止组织固定时卷曲。经10%福尔马林固定后，进行石蜡包埋和常规切片，甲苯胺蓝染色法对小鼠皮肤组织石蜡切片进行染色，观察各组小鼠患部皮肤组织中肥大细胞数量变化。使用ImageJ 1.48软件在放大倍率200X下进行肥大细胞计数。

2.4 各天然多糖组合物复配对小鼠背部炎症皮肤组织中肥大细胞密度抑制情况

与空白组比较，模型组肥大细胞密度显著升高；与模型组比较，各多糖复配组肥大细胞密度均显著降低，见图3。

社会学上认为同辈群体在青少年的社会化过程中发挥着非常重要的作用，在与同辈群体的频繁互动中，青少年极容易习得其他成员的价值观和行为方式。同辈群体的亚文化以及非正式的制约力也会对青少年形成非常大的压力，让青少年服从同辈群体的行为规范。如果身边有一群吸毒的朋友，那么吸毒就会成为行为规范，如果不吸毒就会和他们无话可说，被他们排斥。这种情况下，很多青少年都会选择吸毒。因此，青少年一定要慎重地结交朋友，遇到吸毒的朋友一定要远离。

2.5 CAMP、FLG、MCP-1、IL-6表达量

实时荧光定量pcr结果表明，与空白组比较，模型组小鼠皮肤组织中FLG在mRNA中的表达量均有显著下降。与模型组相比，给予多糖复配2的小鼠皮肤组织中CAMP mRNA的表达量显著升高，多糖复配4组的小鼠皮肤组织中FLG mRNA的表达量明显升高，如图4所示。

与空白组比较，模型组小鼠皮肤组织中MCP-1 mRNA及IL-6 mRNA的表达量均有显著升高。与模型组相比，多糖复配1、3、4组的小鼠皮肤组织中MCP-1 mRNA的表达量明显降低，多糖复配4组的小鼠皮肤组织中IL-6 mRNA的表达量明显降低，如图4所示。

（3）做好文书档案管理的基础性工作。文书档案管理工作失误的影响力不容忽视，做好文书档案管理工作必须先从档案的基础性工作入手，保证现有档案准确无误，同时要对原有档案进行核查，防止失误，发现错误时应及时采取补救措施以使损失降到最低。

03 讨论

小鼠干皮症伴发的慢性炎症在外周依赖于JAKSTAT信号通路

，IL-6等依赖于JAK-STAT信号通路的细胞因子最终可以导致涉及JAK-STAT信号通路下游的Th2炎症因子增多，打破机体Th1/Th2平衡

。AEW干皮症小鼠、特应性皮炎等患者均表现出IL-6炎症因子的表达升高。细胞内cAMP水平的稳态主要依赖于腺苷酸环化酶(AC)的合成和cAMP-磷酸二酯酶(PDEs)的水解, 增加c AMP水平可以抑制和调节炎症

。在免疫系统中，c AMP 被公认为是先天性和适应性免疫细胞功能的有效调节剂。研究表明，cAMP参与了多种重要炎症信号通路的调控，如 MAPKs、NF-κB、JAK-STAT等通路。而依赖于NF-κB 通路的MCP-1因子在单核细胞和巨噬细胞的迁移过程中起着较为关键的作用，可以促进细胞因子释放导致炎症反应加剧

。依赖于MAPKs通路的FLG具有调节角质层的屏障功能的作用，通过转谷氨酰胺酶-1的交叉连接作用参与角化包膜的形成并调节表皮的水分平衡

。

本研究通过成功模拟干皮症伴随的慢性炎症模型。观察统计表明，通过给予多糖复配的小鼠皮肤状况显著好转，明显抑制了小鼠背部皮肤干燥发炎的状况。在机理方面，给予多糖组合物的小鼠IL-6mRNA的表达量明显降低，说明南沙参多糖、枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖以及黄芩多糖组合物抑制了IL-6的表达，调节了机体Th1/Th2平衡；并且通过提升cAMP在脊髓中的表达，同时调节MAPKs、NF-κB通路中MCP-1及FLG的表达，最终降低了肥大细胞的活化，修复了受损细胞，调节了皮肤屏障功能，缓解了干皮症伴随的慢性炎症。

综上，多糖组合物（南沙参多糖、枸杞多糖、玫瑰多糖、云芝多糖以及黄芩多糖）能够有效地缓解干皮症伴随的慢性炎症，缓解皮肤损伤，调节皮肤免疫功能。但cAMP调节MAPKs、NF-κB、JAK-STAT等通路的具体作用机制还需要深入的研究。

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