金银花化学成分及抗菌消炎活性研究

肖蕾，包正雪，郁阳，黄金莲，吴静，蔡百祥*（.无限极（中国）有限公司，广州 506；.云南大学生物资源保护与利用国家重点实验室，昆明 6500；.中国科学院昆明植物研究所 植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆明 6500）

金银花来源于忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花，是一味常用的治疗多种疾病的中药。《中国药典》2020年版一部中描述其具有清热解毒、疏散风热的功效[1]。目前，关于金银花的化学成分报道主要集中在环烯醚萜苷类、三萜皂苷类和有机酚酸类等，现代药理学研究表明金银花中的化学成分具有多种生物活性，包括抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化，增强机体免疫功能等[2-4]。为了进一步阐明中药金银花抗菌消炎的药效物质基础，本文对金银花70%乙醇提取物进行化学成分研究，共分离并鉴定了22个化合物，分别为断氧马钱子苷（1）、secologanol（2）、金吉苷（3）、8-表金吉苷（4）、獐牙菜苷（5）、7-酮马钱素（6）、断氧马钱子苷半缩醛内酯（7）、表断氧马钱子苷半缩醛内酯（8）、threoninosecologanin（9）、5S-羧基异胡豆苷（10）、坎卡酯苷（11）、1，2-O-二咖啡酰基-3-羟基-环戊醇（12）、4，5-O-二咖啡酰基奎宁酸（13）、咖啡酸（14）、绿原酸（15）、紫丁香苷（16）、芦丁（17）、supinaionodie B（18）、cordysinin B（19）、鸟嘌呤核苷（20）、腺嘌呤核苷（21）、烟酰胺（22），其中化合物11、12、18、22为首次从金银花药材中分离得到。通过抗菌消炎活性实验发现，化合物2、5、11、19对厌氧菌变异链球菌显示出一定的抑制作用，化合物4、6、8、15对金黄色葡萄球菌显示出一定的抑制作用。

1 材料

Bruker AV-400型、DRX-500型和AVANCEⅢ-600型核磁共振谱仪（Bruker公司）；Shimadzu UPLC-IT-TOF质 谱 仪（Shimadzu公 司）；Buchi中压制备色谱（RP-C18，15 mm×230 mm或26 mm×460 mm）；Waters1525型高效液相制备色谱仪（Waters公司）。柱层析硅胶200～300目（青岛海洋化工厂）；薄层硅胶板（GF254，青岛海洋化学试剂厂）；ODS（40～60 μm，美国Sepax公司）；Waters xbridge C18色谱柱（19 mm×250 mm，Waters公司）；硫酸-乙醇溶液显色（实验室自制）；其他试剂均为分析纯（国药集团上海化学试剂公司）。小鼠单核巨噬细胞RAW264.7（中科院上海细胞库），DMEM培养基、胎牛血清（BI公司）；Griess 试剂、脂多糖（LPS）、甲基盐酸精氨酸（L-NMMA）（Sigma公司）；环氧化酶（COX）试剂盒（Cayman，美国）；大肠埃希氏菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌金黄亚种ATCC29213、肠沙门氏菌肠亚种ATCC14028、铜绿假单胞菌ATCC27853（中国普通微生物菌种保藏管理中心）；白假丝酵母菌ATCC10231（美国Microbiologics公司）；牙龈卟啉单胞菌（Pg）、具核梭杆菌具核亚种（Fn）、变异链球菌（Sm）（广州速研生物有限公司）；Spark 10M多功能酶标仪（瑞士TECAN公司）。

阿司匹林、帕瑞昔布、氨苄西林（上海源叶生物科技有限公司），青霉素G钠（Biosharp公司），金银花药材[无限极（中国）有限公司，经中国科学院昆明植物研究所蔡祥海研究员鉴定为忍冬科忍冬属金银花Lonicerae japonicae flos的干燥花蕾]。鉴定标本存于中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部资源持续利用国家重点实验室。

2 提取与分离方法

金银花药材2 kg粉碎，以10倍量体积的70%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，用适量的蒸馏水混悬，再用乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取部分（约100 g）和水层（约2 kg）。水层采用大孔吸附树脂以不同浓度的乙醇-水溶液进行洗脱（0%～95%乙醇），洗脱得到纯水，20%、40%、60%、80%、95%乙醇水洗脱部位。利用HPLC来检测不同浓度乙醇的洗脱部位，20%乙醇洗脱部位在乙腈水系统条件下的色谱峰较多，因此对20%乙醇洗脱部位进行化学分离，20%乙醇洗脱部位采用硅胶色谱柱分离，以三氯甲烷-甲醇（50∶1～0∶1，V/V）为流动相梯度洗脱，得到6个流分部位Fr.1～Fr.6。Fr.1（约2 g）经ODS中压制备色谱（10%～45%甲醇-水溶液）洗脱分离并经过制备液相纯化（10%～15%乙腈-0.01%甲酸水，流速 10 mL·min－1）得到化合物1（2.4 mg）、2（5.8 mg）、20（10 mg）、21（8 mg）。Fr.2（约3 g）经反复中压制备色谱（10%～40%甲醇-水溶液）洗脱分离并经过制备液相纯化（10%～20%乙腈-0.01%甲酸水，流速 10 mL·min－1）得到化合物1（16 mg）、3（22 mg）、4（9 mg）、5（12 mg）、6（10 mg）、7（33 mg）。Fr.3（约5 g）经中压制备色谱（5%～40%甲醇-水溶液）洗脱分离得到亚组分Fr.3-1至Fr.3-6，Fr.3-2再经过制备液相纯化（10%～20%乙腈-0.01%甲酸水，流速 10 mL·min－1）得到化合物8（16 mg），9（23 mg），10（12 mg），22（5 mg）。Fr.4（约5 g）经过中压制备色谱（5%～40%甲醇-水溶液）洗脱并经制备液相纯化（8%～19%乙腈-0.01%甲酸水，流速 10 mL·min－1）得到化合物11（20 mg），12（13 mg），15（22 mg），16（10 mg）。Fr.5（约8 g）经过中压制备色谱（5%～45%甲醇-水溶液）洗脱得到亚组分Fr.5-1至Fr.5-6，洗脱组分Fr.5-2经制备液相纯化（9%～22%乙腈-0.01%甲酸水，流速 10 mL·min－1）得到化合物13（33 mg），14（20 mg）。Fr.6（约4 g）经中压制备色谱（10%～55%甲醇-水溶液）以及凝胶柱色谱（甲醇洗脱）再经制备液相纯化（10%～25%乙腈-0.01%甲酸水，流速 10 mL·min－1）得到化合物17（5 mg），18（12 mg），19（8 mg）。

3 结构解析

化合物1：淡黄色油状物；分子式为C17H24O11；ESI＋-MSm/z：427 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.44（1H，brs，H-3），5.63（1H，m，H-8），5.47（1H，d，J＝3.7 Hz，H-1），5.25（1H，d，J＝17.0 Hz，H-10a），5.21（1H，d，J＝10.3 Hz，H-10b），4.64（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），3.87（1H，dd，J＝11.7，1.4 Hz，H-6'b），3.66（3H，s，11-OCH3），3.65（1H，d，J＝12.2，5.6 Hz，H-10b），3.33（1H，overlapped，H-3'），3.32（1H，overlapped，H-5'），3.29（1H，overlapped，H-5），3.26（1H，t，J＝8.4 Hz，H-4'），3.19（1H，dd，J＝16.5，4.5 Hz，H-2'），2.91（1H，dd，J＝16.5，4.6 Hz，H-6a），2.81（1H，m，H-9），2.91（1H，dd，J＝16.5，9.1 Hz，H-6b）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：177.3（C-7），168.9（C-11），153.3（C-3），134.6（C-8），120.4（C-10），110.4（C-4），99.8（C-1'），97.7（C-1），78.4（C-5'），77.9（C-3'），74.6（C-2'），71.5（C-4'），62.7（C-6'），51.7（11-OCH3），45.3（C-9），35.8（C-6），28.7（C-5）。化合物1的氢谱和碳谱数据与文献[5]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为断氧马钱子苷。

化合物2：淡黄色油状物；分子式为C17H26O10；ESI＋-MSm/z：413 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.44（1H，s，H-3），5.63（1H，m，H-8），5.47（1H，d，J＝3.6 Hz，H-1），5.25（1H，d，J＝10.0 Hz，H-10a），5.30（1H，d，J＝17.5 Hz，H-10b），4.69（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），3.89（1H，d，J＝11.6 Hz，H-6'b），3.70（3H，s，11-OCH3），3.61（1H，overlapped，H-6'a），3.55（2H，s，H-7），3.38（1H，overlapped，H-3'），3.31（1H，m，H-5'），3.20（1H，t，J＝8.2 Hz，H-4'），2.91（1H，dd，J＝4.5，16.2 Hz，H-2'），2.81（1H，m，H-5），2.21（2H，dd，J＝9.3，16.2 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：169.4（C-11），153.5（C-3），135.8（C-8），119.3（C-10），111.6（C-4），100.0（C-1'），97.7（C-1），78.4（C-5'），77.9（C-3'），74.6（C-2'），71.5（C-4'），62.7（C-6'），61.1（C-7），51.7（11-OCH3），45.3（C-9），33.6（C-6），30.7（C-5）。化合物2的氢谱和碳谱数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定该化合物为secologanol。

化合物3：淡黄色油状物；分子式为C17H24O11；ESI＋-MSm/z：427 [M＋Na]＋；1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.45（1H，s，H-3），5.66（1H，d，J＝6.0 Hz，H-1），4.76（1H，dd，J＝4.3，6.8 Hz，H-8），4.68（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），3.88（1H，dd，J＝1.5，11.8 Hz，H-6'a），3.71（3H，s，11-OCH3），3.64（1H，dd，J＝5.6，12.0 Hz，H-6'b），3.35（1H，t，J＝8.6 Hz，H-3'），3.26（1H，d，J＝9.6 Hz，H-5'），3.23（1H，overlapped，H-5），3.18（1H，d，J＝9.0 Hz，H-4'），3.00（1H，dd，J＝9.0，8.0 Hz，H-2'），2.84（1H，dd，J＝7.5，17.0 Hz，H-6a），2.62（1H，dd，J＝17.0，6.0 Hz，H-6b），2.42（1H，dd，J＝6.0，4.5 Hz，H-9），1.51（3H，d，J＝6.8 Hz，H-10）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：174.3（C-7），168.1（C-11），154.3（C-3），111.3（C-4），100.0（C-1'），94.2（C-1），78.4（C-5'），77.9（C-3'），76.6（C-8），74.7（C-2'），71.6（C-4'），62.8（C-6'），51.8（OCH3），39.8（C-9），34.2（C-6），27.9（C-5），18.3（C-10）。化合物3的氢谱和碳谱数据与文献[7]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为金吉苷。

化合物4：黄色油状物；分子式为C17H24O11；ESI＋-MSm/z：427 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.58（1H，s，H-3），5.49（1H，d，J＝7.7 Hz，H-1），4.70（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1'），4.49（1H，m，H-8），3.91（1H，d，J＝1.5，11.9 Hz，H-6'b），3.72（3H，s，11-OCH3），3.62（1H，d，J＝6.7，11.9 Hz，H-6'a），3.40～3.30（3H，overlapped，H-3'～5'），3.07（1H，m，H-5），2.86（1H，dd，J＝4.5，16.4 Hz，H-6a），2.50（1H，dd，J＝11.4，16.4 Hz，H-6b），2.13（1H，m，H-9），1.50（3H，d，J＝6.3 Hz，H-10）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：174.7（C-7），168.3（C-11），154.4（C-3），109.5（C-4），100.6（C-1'），96.2（C-1），78.5（C-5'），77.8（C-3'），75.7（C-2'），74.6（C-8），71.6（C-4'），62.8（C-6'），52.0（11-OCH3），41.8（C-9），34.6（C-6），28.2（C-5），21.7（C-10）。化合物4的氢谱和碳谱数据与文献[8]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为8-表金吉苷。

化合物5：淡黄色油状物；分子式为C16H22O9；ESI＋-MSm/z：408 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.59（1H，d，J＝2.1 Hz，H-3），5.56（1H，overlapped，H-8），5.53（1H，overlapped，H-1），5.33（1H，m，H-10a），5.27（1H，m，H-10b），4.68（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），4.45（1H，m，H-7b），4.36（1H，m，H-7a），3.89（1H，dd，J＝1.4，11.8 Hz，H-6'a），3.66（1H，dd，J＝5.5，11.8 Hz，H-6'b），3.39（1H，m，H-5），3.35（1H，overlapped，H-3'），3.31（1H，m，H-5'），3.22（1H，overlapped，H-4'），3.18（1H，overlapped，H-2'），2.70（1H，dd，J＝5.6，8.6 Hz，H-9），1.80（1H，m，H-6b），1.70（1H，m，H-6a）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：168.5（C-11），153.9（C-3），133.3（C-8），120.8（C-10），106.0（C-4），99.6（C-1'），97.9（C-1），78.3（C-3'），77.8（C-5'），74.6（C-2'），71.4（C-4'），69.7（C-7），62.6（C-6'），43.7（C-9），28.4（C-5），25.9（C-6）。化合物5的氢谱和碳谱数据与文献[9]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为獐牙菜苷。

化合物6：白色粉末状物质；分子式为C17H24O10；ESI＋-MSm/z：411 [M＋Na]＋；1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.48（1H，s，H-3），5.63（1H，d，J＝3.0 Hz，H-1），4.67（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1'），3.90（1H，dd，J＝1.7，11.8 Hz，H-6'a），3.69（3H，s，11-OCH3），3.65（1H，dd，J＝6.0，11.8 Hz，H-6'b），3.27～3.09（3H，m，H-3'～5'），3.27～3.09（1H，m，H-5），2.63（1H，dd，J＝8.2，19.1 Hz，H-6b），2.51（1H，dd，J＝1.7，19.1 Hz，H-6a），2.35（1H，m，H-9），2.11（1H，m，H-8），1.06（3H，d，J＝6.8 Hz，10-CH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：220.7（C-7），168.8（C-11），153.2（C-3），111.0（C-4），100.1（C-1'），95.2（C-1），78.4（C-5'），77.9（C-3'），74.6（C-2'），71.5（C-4'），62.7（C-6'），51.8（11-OCH3），46.5（C-9），44.6（C-8），43.4（C-6），28.2（C-5），13.6（C-10）。化合物6的氢谱和碳谱数据与文献[10]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为7-酮马钱素。

化合物7：淡黄色油状物；分子式为C17H24O10；ESI＋-MSm/z：411 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OH）δ：7.58（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3），5.55（1H，d，J＝1.2 Hz，H-1），5.47（1H，m，H-8），5.31（1H，s，H-7），5.29（1H，m，H-10a），5.26（1H，m，H-10b），4.66（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），3.54（1H，s，7-OCH3），3.16（1H，m，H-5），2.67（1H，m，H-9），1.97（1H，m，H-6a），1.44（1H，m，H-6b）；13C-NMR（125 MHz，CD3OH）δ：167.7（C-11），154.1（C-3），133.0（C-8），121.1（C-10），105.4（C-7），105.1（C-4），99.6（C-1'），97.8（C-1），78.3（C-5'），77.8（C-3'），74.6（C-2'），71.5（C-4'），62.6（C-6'），57.1（OMe-7），43.7（C-9），31.6（C-6），25.2（C-5）。化合物7的氢谱和碳谱数据与文献[11]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为断氧马钱子苷半缩醛内酯。

化合物8：淡黄色油状物；分子式为C17H24O10；ESI＋-MSm/z：411 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OH）δ：7.62（1H，d，J＝2.0 Hz，H-3），5.55（1H，d，J＝1.8 Hz，H-1），5.48（1H，m，H-8），5.31（1H，s，H-7），5.29（1H，m，H-10a），5.25（1H，m，H-10b），4.68（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），3.51（3H，s，OMe-7），3.18（1H，m，H-5），2.63（1H，m，H-9），1.85（1H，dd，J＝6.0，13.2 Hz，H-6a），1.69（1H，td，J＝3.0，13.8 Hz，H-6b）；13C-NMR（125 MHz，CD3OH）δ：167.5（C-11），154.5（C-3），133.3（C-8），121.0（C-10），105.3（C-4），103.3（C-7），100.2（C-1'），98.4（C-1），78.3（C-5'），77.8（C-3'），74.6（C-2'），71.4（C-4'），62.6（C-6'），56.9（OMe-7），43.5（C-9），30.2（C-6），22.8（C-5）。化合物8的氢谱和碳谱数据与文献[12]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为表断氧马钱子苷半缩醛内酯。

化合物9：淡黄色油状物；分子式为C20H27NO11；ESI＋-MSm/z：480 [M＋Na]＋，1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.39（1H，d，J＝2.1 Hz，H-3），5.51（1H，overlapped，H-1），5.52（1H，overlapped，H-8），5.31（1H，dd，J＝17.0，1.5 Hz，H-10a），5.25（1H，dd，J＝10.2，1.5 Hz，H-10b），5.09（1H，dd，J＝9.6，3.7 Hz，H-7），4.66（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1'），4.13（1H，m，H-3''），4.04（1H，d，J＝7.8 Hz，H-2''），3.88（1H，dd，J＝11.7，1.7 Hz，H-6'a），3.66（1H，dd，J＝11.7，5.6 Hz，H-6'b），3.36（1H，overlapped，H-5'），3.34（1H，overlapped，H-4'），3.27（1H，overlapped，H-2'），3.18（1H，dd，J＝8.9，7.9 Hz，H-3'），3.12（1H，m，H-5），2.70（1H，m，H-6b），2.17（1H，overlapped，H-9），2.15（1H，s，H-4''），1.48（3H，d，J＝5.9 Hz，3''-CH3），1.31（1H，m，H-6a）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：173.3（C-1''），164.3（C-11），149.2（C-3），133.6（C-8），120.8（C-10），108.1（C-4），99.7（C-1'），97.4（C-1），88.6（C-7），78.5（C-3''），78.3（C-3'），77.8（C-5'），74.7（C-2'），71.5（C-4'），64.9（C-2''），62.6（C-6'），44.6（C-9），31.8（C-6），25.3（C-5），19.2（C-4''）。化合物9的氢谱和碳谱数据与文献[13]中的波谱数据基本一致，故鉴定化合物9为threoninosecologanin。

化合物10：淡黄色粉末状物质；分子式为C28H34N2O11；ESI＋-MSm/z：597 [M＋Na]＋，1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.82（1H，s，H-17），7.45（1H，d，J＝7.8 Hz，H-9），7.29（1H，d，J＝8.0 Hz，H-12），7.12（1H，t，J＝7.3 Hz，H-11），7.04（1H，t，J＝7.5 Hz，H-10），5.91（1H，d，J＝9.0 Hz，H-19），5.81（1H，m，H-21），5.37（1H，d，J＝17.3 Hz，H-18b），5.25（1H，d，J＝10.5 Hz，H-18a），4.81（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1'），4.66（1H，d，J＝11.7 Hz，H-3），4.01（1H，m，H-6'b），3.93（1H，dd，J＝4.8，11.9 Hz，H-6'a），3.79（3H，s，-OCH3），3.67（1H，dd，J＝7.1，11.6 Hz，H-5），3.43～3.22（4H，m，H-2'～5'），3.08（1H，m，H-6），3.05（1H，m，H-15），2.76（2H，m，H-6a，H-20），2.22（1H，m，H-14a），2.43（1H，m，H-14b）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：173.4（C-23），171.8（C-22），157.2（C-17），138.5（C-13），135.2（C-19），130.3（C-2），127.5（C-8），123.4（C-11），120.6（C-10），119.7（C-18），119.1（C-9），112.2（C-12），108.6（C-16），108.3（C-7），100.4（C-1'），97.3（C-21），78.8（C-5'），77.9（C-3'），74.6（C-2'），71.7（C-4'），63.1（C-6'），53.0（C-5），52.8（-OCH3），49.5（C-3），45.3（C-20），34.6（C-14），32.7（C-15），24.0（C-6）。化 合 物10的氢谱和碳谱数据与文献[14]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为5S-羧基异胡豆苷。

化合物11：淡黄色粉末状物质；分子式为C22H36O11；ESI＋-MSm/z：499 [M＋Na]＋，975 [2M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.84（1H，t，J＝7.4 Hz，H-3），5.10（1H，dd，J＝8.0，9.6 Hz，H-2''），4.42（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1''），4.28（1H，d，J＝9.2 Hz，H-6'b），4.12（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1'），3.91（1H，dd，J＝1.6，12.7 Hz，H-5''b），3.84（1H，brs，H-4''），3.74（1H，dd，J＝3.4，9.8 Hz，H-3''），3.61（2H，overlapped，H-8），3.37（1H，overlapped，H-5'），2.21（1H，m，H-4a），3.34（1H，overlapped，H-6'a），3.30（1H，overlapped，H-3'），3.11（1H，dd，J＝8.0，9.0 Hz，H-2'），3.01（1H，t，J＝9.0 Hz，H-4'），2.35（1H，m，H-4b），2.20（1H，m，H-5''a），1.85（3H，s，H-9），1.54（2H，m，H-5），1.58（1H，m，H-6），1.47（2H，m，H-7），0.99（3H，d，J＝6.4 Hz，H-10）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：169.1（C-1），144.4（C-3），128.6（C-2），103.4（C-1''），103.4（C-1'），78.0（C-3'），76.8（C-5'），75.1（C-2'），73.8（C-2''），72.7（C-3''），72.3（C-4'），70.9（C-6'），70.5（C-4''），70.1（C-8），67.8（C-5''），36.2（C-5），35.9（C-7），30.9（C-6），26.1（C-4），22.7（C-10），12.7（C-9）。化合物11的氢谱和碳谱数据与文献[15]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为坎卡酯苷。

化合物12：白色粉末状物质；分子式为C23H22O9；ESI＋-MSm/z：465 [M＋Na]＋，1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.60（d，1H，J＝16.0 Hz，H-7'），7.50（d，1H，J＝16.0 Hz，H-7''），7.01（d，1H，J＝2.0 Hz，H-2'），6.98（d，1H，J＝2.0 Hz，H-2'，2''），6.90（dd，2H，J＝2.0，8.0 Hz，H-6'，6''），6.75（d，1H，J＝8.0 Hz，H-5'），6.72（d，1H，J＝8.0 Hz，H-5''），6.27（d，1H，J＝16.0 Hz，H-8'），6.18（d，1H，J＝16.0 Hz，H-8''），5.62（m，1H，H-1），5.10（dd，1H，J＝2.4，9.2 Hz，H-2），4.37（m，1H，H-3），2.30（m，2H，H-4），2.20（m，1H，H-5a），2.12（m，1H，H-5b）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：168.5（C-9'），168.2（C-9''），149.6（C-4'，4''），147.6（C-7''），147.5（C-7'），146.7（C-3''），146.7（C-3'），127.6（C-1''），127.6（C-1'），123.1（C-6''），123.1（C-6'），116.4（C-5'，5''），115.1（C-8'，8''），114.7（C-2''），114.7（C-2'），75.94（C-2），69.5（C-1），69.0（C-3），39.5（C-5），38.4（C-4）。化合物12的氢谱和碳谱数据与文献[16]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为1，2-O-二咖啡酰基-3-羟基-环戊醇。

化合物13：淡黄色粉末状物质；分子式为C25H24O12；ESI＋-MSm/z：517 [M＋H]＋；1H-NMR（CD3OD，400 MHz）：7.59（1H，d，J＝15.9 Hz，H-7'，H-7''），7.51（1H，d，J＝15.9 Hz，H-7'，H-7''），7.02（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2'，H-2''），7.00（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2'，H-2''），6.92（1H，dd，J＝8.1，1.8 Hz，H-6'，H-6''），6.90（1H，dd，J＝8.1，1.8 Hz，H-6'，H-6''），6.75（1H，d，J＝8.1 Hz，H-5'，H-5''），6.74（1H，d，J＝8.1 Hz，H-5'，H-5''），6.28（1H，d，J＝15.9 Hz，H-8'，H-8''），6.19（1H，d，J＝15.9 Hz，H-8'，H-8''），5.62（1H，brs，H-5），5.11（1H，brs，H-4），4.37（1H，brs，H-3），2.40（2H，H-6），1.99（2H，m，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）：168.7（C-9'，9''），168.6（C-9'，9''），149.6（C-4'，4''），147.6（C-7'，7''），147.4（C-7'，7''），146.7（C-3'，3''），146.7（C-3'，3''），127.8（C-1'，1''），127.6（C-1'，1''），123.3（C-6'，6''），117.5（C-8'，8''），116.4（C-5'，5''），115.1（C-2'，2''），115.0（C-2'，2''），114.7（C-8'，8''），76.5（C-1），75.7（C-2），70.2（C-3），69.2（C-5），40.2（C-6），38.5（C-14）。化合物13的氢谱和碳谱数据与文献[17]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为4，5-O-二咖啡酰基奎宁酸。

化合物14：淡黄色粉末状物质；分子式为C9H8O4；ESI＋-MSm/z：203 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.54（1H，d，J＝16.0 Hz，H-7），7.04（1H，d，J＝1.7 Hz，H-2），6.92（1H，dd，J＝1.7，8.2 Hz，H-5），6.78（1H，d，J＝8.2 Hz，H-6），6.22（1H，d，J＝16.0 Hz，H-8）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：171.0（C-9），149.4（C-4），147.0（C-7），146.7（C-3），127.7（C-1），122.8（C-6），116.4（C-8），115.5（C-5），115.0（C-2）。化合物14的氢谱和碳谱数据与文献[18]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为咖啡酸。

化合物15：白色粉末状物质；分子式为C16H18O9；ESI＋-MSm/z：355 [M＋H]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.55（1H，d，J＝16.0 Hz，H-7'），7.04（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2'），6.95（1H，dd，J＝8.4，2.0 Hz，H-6'），6.77（1H，d，J＝8.4 Hz，H-5'），6.25（1H，d，J＝16.0 Hz，H-8'），5.32（1H，m，H-3），4.15（1H，m，H-5），3.72（1H，dd，J＝8.4，3.2 Hz，H-4），2.25～2.01（4H，m，H-2，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：176.9（COOH），168.6（C-9'），149.5（C-4'），147.0（C-7'），146.8（C-3'），127.7（C-1'），122.9（C-6'），116.4（C-5'，8'），115.2（C-2'），76.1（C-1），73.4（C-4），71.9（C-5），71.2（C-3），38.7（C-2），38.2（C-6）。化合物15的氢谱和碳谱数据与文献[19]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为绿原酸。

化合物16：白色粉末状物；分子式为C17H24O9；ESI＋-MSm/z：395 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.74（2H，s，H-3，5），6.54（1H，d，J＝16.1 Hz，H-7），6.37（1H，dt，J＝5.5，15.8 Hz，H-8），4.86（1H，s，H-1'），4.22（2H，d，J＝5.0 Hz，H-9），3.85（6H，s，-OCH3），3.78（1H，dd，J＝2.1，11.9 Hz，H-6'a），3.66（1H，dd，J＝11.8，5.2 Hz，H-6'b），3.48（1H，m，H-2'），3.42（2H，m，H-3'，4'），3.21（1H，m，H-5'）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：154.3（C-3，5），135.8（C-4），135.2（C-7），131.2（C-1），130.0（C-8），105.4（C-2，6），105.3（C-1'），78.3（C-5'），77.8（C-3'），75.7（C-2'），71.3（C-4'），63.5（C-9），62.5（C-6'），57.0（-OCH3）。化合物16的氢谱和碳谱数据与文献[20]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为紫丁香苷。

化合物17：淡黄色粉末状物质；分子式为C28H32O16；ESI＋-MSm/z：647 [M＋Na]＋；1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：7.66（1H，overlapped，H-2'），7.63（1H，overlapped，H-6'），6.87（1H，d，J＝7.4 Hz，H-5'），6.41（1H，s，H-8），6.21（1H，s，H-6），5.11（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1''），4.52（1H，s，H-1'''），3.34～3.80（8H，m，H-2''，3''，4''，5''，2'''，3'''，4'''，5'''），1.12（3H，d，J＝5.9 Hz，H-6'''）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：179.4（C-4），166.0（C-7），162.9（C-5），159.3（C-2），158.5（C-9），149.8（C-4'），145.8（C-3'），135.6（C-3），123.5（C-6'），123.1（C-1'），117.6（C-5'），116.0（C-2'），105.6（C-10），104.7（C-1''），102.4（C-1'''），99.9（C-6），94.8（C-8），78.1（C-3''），77.2（C-5''），75.7（C-2''），73.9（C-4''），72.2（C-5'''），72.0（C-3'''），71.3（C-4'''），69.7（C-6''），68.5（C-2'''），17.8（C-6'''）。化合物17的氢谱和碳谱数据与文献[21]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为芦丁。

化合物18：淡黄色油状物；分子式为C19H30O8；ESI＋-MSm/z：387 [M＋H]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：5.82（1H，s，H-4），4.25（1H，d，J＝7.7 Hz，H-1'），3.87（1H，d，J＝11.7 Hz，H-6'b）3.80（1H，d，J＝9.5 Hz，H-6'a），3.67～3.26（3H，m，H-11），3.44（1H，d，J＝9.5 Hz，H-5'），3.33（1H，m，H-3'），3.19（1H，t，J＝8.1 Hz，H-2'），2.71（2H，m，H-8），2.54（2H，d，J＝17.8 Hz，H-2），2.52（1H，brs，H-2a），2.24（1H，t，J＝5.1 Hz，H-6），2.14（3H，s，H-10）2.04（3H，s，H-13），2.00～1.65（2H，m，H-7），1.07（2H，s，H-12）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：211.6（C-9），201.2（C-3），169.1（C-5），125.9（C-4），104.4（C-1'），78.1（C-5'），78.0（C-3'），75.9（C-11），75.6（C-2'），71.7（C-4'），63.2（C-6'），46.2（C-6），43.1（C-2），42.9（C-8），40.9（C-1），30.0（C-10），24.7（C-13），24.4（C-7），24.2（C-12）。化合物18的氢谱和碳谱数据与文献[22]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为supinaionodie B。

化合物19：白色粉末状物质；分子式为C11H15N5O4；ESI＋-MSm/z：304 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.33（1H，s，H-2），8.18（1H，s，H-8），6.06（1H，d，J＝6.0 Hz，H-1'），4.49（1H，m，H-2'），4.43（1H，m，H-3'），4.16（1H，m，H-4'），3.88（1H，dd，J＝2.1，12.5 Hz，H-5'a），3.75（1H，dd，J＝2.4，12.5 Hz，H-5'b）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：157.5（C-6），153.6（C-2），149.9（C-4），141.8（C-8），120.9（C-5），89.2（C-1'），88.4（C-4'），84.6（C-2'），70.8（C-3'），63.2（C-5'），58.7（2'-OCH3）。化合物19的氢谱和碳谱数据与文献[23]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为cordysinin B。

化合物20：白色粉末状物质；分子式为C10H13N5O5；ESI＋-MSm/z：306 [M＋Na]＋；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.64（1H，s，3-NH），7.94（1H，s，H-8），6.49（2H，s，2-NH2），5.69（1H，d，J＝6.0 Hz，1'-OH），5.39（1H，d，J＝6.0 Hz，2'-OH），5.07（1H，d，J＝4.7 Hz，H-1'），5.01（1H，t，J＝5.5 Hz，3'-OH），4.39（1H，m，H-2'），4.08（1H，m，H-3'），3.87（1H，dd，J＝3.7，7.3 Hz，H-4'），3.52～3.61（2H，m，H-5'）；13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：156.7（C-6），153.5（C-2），151.3（C-4），135.5（C-8），116.9（C-5），86.3（C-1'），85.1（C-4'），73.6（C-3'），70.3（C-2'），61.3（C-5'）。化合物20的氢谱和碳谱数据与文献[24]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为鸟嘌呤核苷。

化合物21：白色粉末状物质；分子式为C10H13N5O4；ESI＋-MSm/z：268 [M＋H]＋；1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：8.35（1H，s，H-8），8.14（1H，s，H-2），7.35（2H，s，NH2），5.87（1H，d，J＝6.2 Hz，H-1'），5.45（1H，d，J＝6.1 Hz，2'-OH），5.42（1H，d，J＝6.2 Hz，3'-OH），5.19（1H，d，J＝4.6 Hz，3'-OH），4.62（1H，m，H-2'），4.15（1H，m，H-3'），3.97（1H，d，J＝2.68 Hz，H-4'），3.53～3.70（2H，m，H-5'）；13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：156.1（C-6），152.4（C-2），149.0（C-4），139.9（C-8），119.3（C-5），87.9（C-1'），85.9（C-4'），73.4（C-2'），70.6（C-3'），61.7（C-5'）。化合物21的氢谱和碳谱数据与文献[24]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为腺嘌呤核苷。

化合物22：白色粉末状物质；1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：9.02（1H，brs，H-2），8.68（1H，d，J＝4.2 Hz，H-6），8.28（1H，d，J＝7.9 Hz，H-4），7.54（1H，dd，J＝4.9，7.8 Hz，H-5）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：169.8（C-1），152.8（C-2），149.4（C-6），137.3（C-4），131.4（C-3），125.1（C-5）。化合物22的氢谱和碳谱数据与文献[25]中的波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为烟酰胺。

4 化合物的活性研究

4.1 化合物对一氧化氮（NO）生成抑制活性研究

将RAW264.7细胞接种至96孔板中，用1 μg·mL－1LPS进行诱导刺激，同时加入待测化合物（50 μmol·L－1）处理，L-NMMA为阳性对照。细胞过夜培养后取培养基在570 nm处测定吸光值，检测NO生成。结果表明所有化合物均未表现出明显的NO生成抑制活性。

4.2 化合物对环氧化酶1和2的抑制活性研究

对分离得到的化合物采用环氧化酶抑制剂筛选试剂盒进行环氧化酶1和2的抑制活性筛选，以阿司匹林和帕瑞昔布为阳性对照。结果表明所有化合物均未表现出明显的环氧化酶1和2抑制活性。

4.3 化合物的抗菌活性研究

参照CLSI标准检测分离得到的化合物对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肠沙门氏菌、铜绿假单胞菌的抑制作用，以青霉素G钠为阳性对照。实验结果表明化合物4、6、8、15对金黄色葡萄球菌表现出一定的抑制作用，结果见表1。

表1 化合物对金黄色葡萄球菌的抑制率Tab 1 Inhibition rate of the isolated compound on Staphylococcus aureus

采用微量稀释法对分离得到的化合物进行口腔厌氧菌[牙龈卟啉单胞菌（Pg）、具核梭杆菌具核亚种（Fn）、变异链球菌（Sm）]抑制活性筛选，以氨苄西林为阳性对照。结果表明化合物4、5、8、18、19对牙龈卟啉单胞菌（Pg）、具核梭杆菌具核亚种（Fn）表现出微弱的抑制作用，化合物2、5、11、19分别在半数抑菌浓度（MIC50）为200、200、100、200 µg·mL－1时对变异链球菌（Sm）显示出与阳性对照相当（氨苄西林 200µg·mL－1）的抑制作用。

5 结论

本文运用色谱、光谱法等方法对金银花乙醇提取物进行了较为系统的化学成分分离。共分离鉴定了22个单体化合物，主要包括环烯醚萜苷类（1～11），核苷类（19～21），生物碱类（22），黄酮类（17），苯丙素类（16），倍半萜类（18）以及酚酸类（12～15）成分；其中化合物11、12、18、22首次在金银花中分离得到。活性研究结果表明，本文从金银花中分离的化学成分化合物2、5、11、19在MIC50为200、200、100、200µg·mL－1时对变异链球菌（Sm）显示出与阳性对照相当（氨苄西林 200 µg·mL－1）的抑制作用，这也表明金银花清热解毒的传统功效和其抗菌活性有一定的关联。本次研究进一步丰富了金银花的化学物质组成和生物活性信息，可为金银花的开发利用提供参考。