β-七叶皂苷钠辅助溶栓治疗对急性脑梗死病人血清miR-155与miR-181c表达的影响

秦树巧，黑丹丹

急性脑梗死是一种常见的高致死率、高致残率的脑血管疾病，发病机制为脑组织相关动脉血流骤然减少或停止，导致脑组织缺氧缺血损伤，脑组织坏死[1]。急性脑梗死通常是由脑部供血动脉出现血栓和动脉粥样硬化，造成管腔狭窄闭塞、局部脑供血不足[2]，主要临床表现为起病突然、头晕、恶心、呕吐、半身不遂、耳鸣、眩晕、吞咽困难、双侧或上下肢体比重异常、语言表达不清等[3]。目前临床治疗急性脑梗死主要采用超早期溶栓，常用的药物主要是纤溶酶原激活剂(recombinant tissue plasminogen activator，rt-PA)、尿激酶等[4]。正确及时的治疗方案可降低急性脑梗死病人致残率和致死率，加快康复并提高预后。rt-PA半衰期短，需长时间大剂量给药，降低病人给药耐受性可能带来副作用，同时尿激酶不具有蛋白结合特异性，对纤维蛋白和全身循环纤溶酶原均有激活作用，大剂量使用可能带来全身性抗凝和溶栓等出血并发症，因此，不论是rt-PA还是尿激酶，单独使用疗效不理想[5]。β-七叶皂苷钠能有效保护一氧化氮等引起的脑水肿，具有抗渗出、抗炎、抗肿胀及改善血液循环、增加静脉张力、恢复毛细血管通透性、纠正脑功能、促进淋巴回流，消退肿胀的作用。有研究显示，β-七叶皂苷钠对脑水肿、其他原因所致肿胀具有显著的疗效[6]。微小RNA(miRNA)是一种广泛存在于各类生物中的高度保守的内源性非编码RNA。miRNA与mRNA结合可阻断蛋白编码基因的表达，参与各种生理过程，如炎症反应、分化、代谢、免疫、凋亡等，其中外周血miRNA可反映脑组织miRNA水平，因此，miRNA可作为急性脑梗死的新型诊断标志物[7-8]。本研究观察β-七叶皂苷钠辅助溶栓治疗对急性脑梗死病人血清miR-155与miR-181c表达的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年4月—2019年4月在我院收治的106例急性脑梗死病人，按随机数字表法分为对照组和观察组。观察组53例，男28例，女25例；年龄60～75(66.34±5.73)岁；病程3～19(12.14±2.10)d。对照组53例，男27例，女26例；年龄60～76(66.52±5.74)岁；病程4～20(12.35±2.50)d。两组一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 首次发病；经头颅CT或MRI检查诊断为脑梗死[9]；意识清楚，神经功能缺损未继续进展，生命体征稳定；签署知情同意书。

1.2.2 排除标准 短暂性脑缺血发作、脑栓塞、腔隙性脑梗死、颅内出血病史；严重感染及合并严重心、肝、肾疾病、颅脑外伤和肿瘤；伴有运动功能障碍；出现严重并发症和不良事件、病情迅速恶化，应及时中止研究；2周内进行过外科手术和服用抗凝药物；伴有神经系统疾病或癫痫；妊娠或哺乳期女性等。

1.3 治疗方法 两组均给予常规治疗，包括营养支持、扩张脑血管、活血化瘀、抗血小板等。对照组在常规治疗基础上联合尿激酶(丽珠制药厂生产)静脉注射，1×104～2×104U/kg，15%的药物总量在5 min内静脉注射完成，余下药物以0.12×104～0.20×104U/kg尿激酶等渗盐水静脉注射1 h。观察组在对照组基础上给予β-七叶皂苷钠(山东绿叶制药公司生产)，β-七叶皂苷钠0.04 mg/mL等渗盐水静脉注射，每次20 mg，每日2次。两组均治疗2周。

1.4 观察指标

1.4.1 神经功能缺损情况 参照美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分[10]进行评定。

1.4.2 血清miR-155、miR-181c表达 于治疗前后抽取肘静脉血5 mL，保存于EDTA抗凝管中，静置于4 ℃低温1 h后，以3 000 r/min离心15 min，取上清液，-80 ℃冷藏保存待检。操作步骤参照文献[8]：取上层血清加入血清裂解液裂解细胞，提取血清总RNA(RNA试剂盒，由赛默飞世尔中国公司提供)，并测定总RNA浓度(采用紫外分光光度法)，样品A260 A280≥1.80视为合格；总RNA逆转录：逆转录的单链模板cDNA(逆转录试剂盒由赛默飞世尔中国公司提供)；聚合酶链式反应：使用试剂盒进行操作，条件为95 ℃ 5 min，95 ℃ 40 s，60 ℃ 20 s，72 ℃ 15 s，连续循环40次，采用2-△△Ct分别计算血清miR-155、miR-181c相对表达量。

1.4.3 不良反应 治疗2周后，观察两组不良反应发生情况，包括脑出血、皮下出血、消化道出血。

2 结 果

2.1 两组治疗前后NIHSS评分比较 治疗前，两组NIHSS评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗2周后，两组NIHSS评分较治疗前均降低，且观察组低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 两组NIHSS评分比较(±s) 单位：分

2.2 两组治疗前后血清miR-155、miR-181c比较 治疗前，两组血清miR-155、miR-181c比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗2周后，两组血清miR-155、miR-181c含量较治疗前均降低，且观察组低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

2.3 两组不良反应发生率比较 治疗2周后，对照组发生脑出血4例，皮下出血2例，消化道出血2例；观察组发生脑出血1例，皮下出血1例，消化道出血1例。两组不良反应发生率比较，差异有统计学意义(P=0.028)。详见表3。

表3 两组不良反应发生率比较 单位：例(%)

3 讨 论

急性脑梗死多由于血管狭窄或被栓子等阻塞，导致脑组织局部供血氧不足，从而引发多细胞因子相互作用，发生脑组织坏死等不良结果，导致病人肢体不随大脑支配、意识障碍甚至昏迷[11]。有研究显示，脑梗死发生率呈逐年升高趋势，具有高致残率、高致死率的特点，成为我国老年人残疾、死亡的主要原因之一[12]。临床治疗急性脑梗死多采用短期溶栓、长期降压、营养血管的方式。血栓溶解疗法是指应用外源性激活物激活体内溶解系统以溶解血管内血栓，疏通血管，从而抢救因血管阻塞受累的组织，保护脑缺血组织，缩小梗死面积，减少缺损脑功能，缓解病情。80%以上的急性脑梗死发生时脑动脉被血栓堵塞，溶解血栓能可逆性恢复脑组织血氧供给，因此溶栓是重要的治疗方法之一；尿激酶是一种价格相对较低，且安全性较好的溶栓药物，为病人普遍接受，尿激酶单独使用存在不良反应[13-14]。

七叶皂苷钠是由植物中提取出来的，属于一种三萜皂苷，β-七叶皂苷钠是其活性成分，具有抗渗出、抗炎、抗肿胀等药理作用，可改善血液循环，增加静脉张力，恢复毛细血管通透性，纠正脑功能，并促进淋巴回流，消退肿胀，因其具有临床疗效好、不良反应少的特点，临床上广泛用于各种肿胀及神经系统疾病的治疗。β-七叶皂苷钠可减轻毛细血管通透性，稳定细胞膜，对抗炎性介质如磷酸组胺和缓激肽等，清除自由基，从而治疗脑血管疾病[15]。脑梗死发生时，由于脑组织损伤刺激炎性因子释放增加，易引起脑缺血后再灌注损伤和神经功能细胞缺损[16]。

miRNA属于一类高度保守的单链RNA，可促进神经系统发育，在机体各组织中均高度表达，参与细胞分化、细胞免疫等生理过程，并发挥重要的作用[17]。有研究显示，外周血中某些miRNA含量可反映脑组织miRNA水平，miR-155与miR-181c是与脑梗死密切相关的miRNA亚型[18]。本研究采用β-七叶皂苷钠辅助尿激酶溶栓治疗急性脑梗死，观察其对病人血清miR-155与miR-181c表达的影响。结果显示，治疗2周后，两组NIHSS评分较治疗前均降低(P<0.05)，且观察组低于对照组(P<0.05)，提示β-七叶皂苷钠辅助尿激酶溶栓能有效改善急性脑梗死病人神经功能缺损情况，可能是由于β-七叶皂苷钠通过稳定细胞膜，清除自由基，减轻毛细血管通透性，从而改善血液循环，纠正脑功能，减轻神经功能缺损情况。同时结果显示，治疗2周后，对照组发生血清miR-155、miR-181c含量较治疗前均降低(P<0.05)，且观察组低于对照组(P<0.05)，提示β-七叶皂苷钠辅助尿激酶溶栓治疗急性脑梗死，可降低病人血清miR-155、miR-181c含量，原因可能是炎性因子表达降低影响血清因子miR-155、miR-181c表达。王兴萍[19]研究显示，miR-155参与动脉斑块破裂和脑血栓形成，因此急性脑梗死病人外周血miR-155表达高于健康人。miR-181c与线粒体功能和神经元损伤密切相关，高水平miR-181c导致线粒体功能紊乱，影响线粒体为神经元提供能量，因而损伤神经元[8]。本研究观察组miR-181c水平低于对照组，可能是由于神经功能改善负反馈调节miR-181c表达。治疗2周后，对照组发生脑出血4例，皮下出血2例，消化道出血2例；观察组发生脑出血1例，皮下出血1例，消化道出血1例。两组不良反应发生率比较，差异有统计学意义(P=0.028)。提示β-七叶皂苷钠辅助尿激酶溶栓治疗急性脑梗死能降低不良反应发生，本研究将两药联合使用起到了增效减毒的效果。

综上所述，采用β-七叶皂苷钠辅助尿激酶溶栓治疗急性脑梗死可改善病人神经功能缺损情况，降低miR-155、miR-181c含量，缓解炎症反应，减少不良反应发生。