贵州安顺规模蛋鸡场禽白血病(J亚群)血清学流行率调查

刘亚娟，伍昌华，孟惠惠，李 涛

(1.贵州省安顺市动物疫病预防控制中心，贵州 安顺 561000 ； 2.贵州省动物疫病预防控制中心 , 贵州 贵阳 550000)

禽白血病(Avian leukosis，AL)是一种由禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)引起的以禽类造血组织中某些细胞成分过度增生为主的肿瘤性疾病。根据病毒囊膜蛋白和gp85蛋白抗原性差异，ALV被划分为A～K共11个亚群，自然感染鸡群的包括A、B、C、D、E、J和K这7个亚群[1-3]。A、B、J亚群在临床上感染的病例较常见，其中J亚群的致病性和传染性最强，在我国感染也最为严重，临床症状常表现为产蛋率下降，死亡淘汰率高，出现肿瘤，鸡爪、皮肤出血，体重下降，龙骨弯曲等[4]。迄今为止禽白血病没有有效的疫苗和治疗药物，控制的主要措施为通过早期特异性诊断筛查并严格淘汰阳性鸡，净化种群。

2016年，杨树青等[5]从贵州省8个地区分别采集鸡蛋样品进行ALV流行株亚型鉴定，在安顺市采集的30份绿壳蛋鸡中，8份ALV阳性均为J亚型(阳性率26.67%)，相比其他地区感染率较高，说明安顺市鸡群存在丁亚型禽白血病病毒(ALV-J)感染。有研究显示，商品代鸡群ALV抗体阳性率、抗原阳性率均比祖代和父母代高，说明商品代蛋鸡感染ALV-J概率更大，且同一鸡群能水平传播使感染情况加重[6]。

贵州省安顺市蛋鸡场全部为商品代蛋鸡场，为了解蛋鸡场J亚群禽白血病(AL-J)的感染情况，估计其群流行率和个体流行率，分析感染风险因素，本次流调以全市的商品代规模蛋鸡场为目标群，采用血清学检测和现场调查问卷，以期为安顺市禽白血病防控提供基础数据和防控建议。

1 材料与方法

1.1 调研类型与对象 本调查采用横断面研究的方法；目标群为安顺市所有规模蛋鸡场(规模蛋鸡场定义为存栏量≥2 000羽的蛋鸡场)；研究单元为规模蛋鸡场(估计群流行率)和蛋鸡(估计个体流行率)。

1.2 抽样策略 安顺市存栏量≥2 000羽的规模蛋鸡场共有42个，其中存栏量≥5 000羽的有35个，存栏量≥10 000羽的有23个。因群体数量较小，故将42个规模蛋鸡场全部纳入源群。各区(县)规模蛋鸡场总存栏量分布情况见表1。

表1 各区(县)不同规模蛋鸡场分布情况

各蛋鸡场内采取系统随机抽样。若场内养殖模式不是“全进全出”，采取分层抽样，抽样时按比例分配不同日龄蛋鸡的抽样数量，主要考虑以下日龄蛋鸡：育成期10～19周龄，产蛋初期20～30周龄，产蛋高峰期31～44周龄，淘汰前45～50周龄。根据估计流行率的计算公式：N=(1.96)2×p(1-p)/e2[7]，计算出各场点需要随机抽取的蛋鸡数为60羽。参数设置：置信水平(CI)设为95%，可接受绝对误差(e)设为10%，预期流行率(p)设为20%。

1.3 采样和检测诊断方法 将采集的蛋鸡全血送至安顺市动物疫病预防控制中心，分离血清后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测J亚群禽白血病抗体，试剂盒购自美国KERNEL公司，敏感性为99.0%，特异性为99.7%。

1.4 阳性个体和阳性场定义 阳性个体：经ELISA方法检测，血清中ALV-J抗体为阳性的蛋鸡。

阳性场：至少检测到n个及以上ALV-J抗体阳性血清样品的商品代蛋鸡场。

n为判定阳性场的cut-off值，由个体流行率(p)结合试验敏感性(Se)、试验特异性(Sp)和每场抽样数量(n′)进行确定。

1.5 问卷设计 调查问卷内容包括蛋鸡场基本信息(存栏量、引种地、引进品种等)和饲养管理及生物安全防护情况(免疫、用药、消毒、无害化处理等)两部分，其中饲养管理及生物安全防护情况针对安顺市规模蛋鸡场鸡群感染AL-J的可能风险因素设计了12个问题，具体内容：(1)每周是否消毒3次及以上；(2)同一栋鸡舍是否为“全进全出”饲养模式；(3)养殖区和生活区是否分开；(4)场区内是否分净道和污道；(5)蛋鸡生病后是否用药；(6)是否超剂量免疫；(7)是否自购除政府要求强免疫苗外的疫苗；(8)是否更换不同圈舍免疫时所用的针头；(9)场区内是否有防鼠和防蚊虫设施；(10)人员进出前是否更换衣服和鞋帽；(11)车辆进场前是否消毒；(12)病死鸡是否无害化处理。

1.6 数据分析方法

1.6.1 个体流行率估计 个体表观流行率(AP)为抽样检测到的阳性蛋鸡数占所有抽样研究蛋鸡数的比值。选择直接标化法计算出安顺市商品代规模蛋鸡场鸡群的个体表观流行率(AP′)，计算公式：AP′=Σ(TsjIj)，其中Tsj是不同蛋鸡场的存栏量在全市42个蛋鸡场总存栏量的占比，Ij是不同蛋鸡场的流行率。个体真实流行率(TP)需结合检测Se和Sp计算，计算公式：TP=(AP′+Sp-1)/(Se+Sp-1)[7-8]。其中Se为ELISA诊断试剂盒的试验敏感性(99.0%)，Sp为试验特异性(99.7%)。

标化后的个体表观流行率95%置信区间：CI=AP′±Z×Sp，Sp=[Σ(1-fh)/(nh-1)×Wh2×ph×(1-ph)]0.5，其中Sp是总体抽样误差，ph是第h层样本中流行率，Wh是第h层权重，nh是第h层样本量，fh是第h层抽样比例，每个规模蛋鸡场作为一层[9]；个体真实流行率的95%置信区间(95%CI)根据公式：TP=(AP′+Sp-1)/(Se+Sp-1)，并结合标化后个体表观流行率95%CI的值计算得出。

1.6.2 群流行率估计 群体表观流行率(HAP)为检测到的阳性蛋鸡场占所有规模蛋鸡场的比值。群体真实流行率(HTP)需结合群敏感性(HSe)和群特异性(HSp)计算，计算公式：HTP=(HAP+HSp-1)/(HSe+HSp-1)[10]。

1.6.3 风险因素分析 将血清学检测结果和调查问卷收集的数据录入到Excel 2016进行整理，通过SPSS统计软件进行单变量分析(卡方检验)。

2 结果

2.1 血清学流行率估计

2.1.1 禽白血病(J亚群)个体流行率 采集的2 520份蛋鸡血清样本中共检出了182份AL-J阳性，分别来自24个规模蛋鸡场。在实际采样过程中，其中1个场采集了56份样品，2个场采集了61份样品，1个场采集了62份样品，其余38个场均采集了60份样品。根据公式计算得到，标化后的个体表观流行率(AP′)为10.7%(95%CI：7.6%～13.8%)，真实流行率(TP)为10.5%(95%CI：7.4%～13.7%)。其中检测存栏量10 000羽以下的场蛋鸡血清样品1 143份，检出阳性39份，流行率为3.4%；检测存栏量10 000羽及以上的场蛋鸡血清样品1 377份，检出阳性143份，流行率为10.4%；存栏量10 000羽以下和10 000羽及以上的蛋鸡场间个体流行率差异显著(P<0.05)。

2.1.2 群敏感性(Hse)和群特异性(Hsp) 按流行率(p)为10.5%，Se为99.0%，Sp为99.7%，每场抽样数量为60，计算出不同cut-off值下的群敏感性和群特异性(表2)，最终确定cut-off值为2，Hse为99.1%，Hsp为98.6%。

表2 不同cut-off值下的群敏感性和群特异性

阳性场定义：至少检测到2个及2个以上ALV-J抗体阳性血清样品的商品代蛋鸡场。

2.1.3 禽白血病(J亚群)群流行率 本次流调共检测了42个场，其中24个为阳性场，群体表观流行率(HAP)和真实流行率(HTP)均为57.1%。24个阳性场中11个位于西秀区，3个位于平坝区，1个位于普定县，4个位于镇宁县，2个位于关岭县，3个位于开发区。其中存栏量10 000羽以下的场19个，阳性场8个，阳性率为42.1%；存栏量10 000羽及以上的场23个，阳性场16个，阳性率为69.6%，两者间群体流行率差异不显著(P>0.05)。

2.2 年龄分布 通过对4个不同年龄段(育成期、产蛋初期、产蛋高峰期、淘汰前)的蛋鸡J亚群禽白血病抗体检测结果进行卡方(χ2)检验，发现Fisher确切概率法检验概率值P<0.05，说明不同年龄段的蛋鸡抗体检测结果存在差异。分别计算不同日龄蛋鸡抗体阳性率的比值比(OR)，发现育成期是产蛋初期的11.0倍(95%CI：1.1～106.4)，产蛋高峰期是产蛋初期的6.9倍(95%CI：1.2～40.4)，淘汰前是产蛋初期的9.6倍(95%CI：1.7～54.7)。推测可能由于母体感染，育成期蛋鸡母源抗体水平较高，随后逐步下降；由于水平传播的可能，蛋鸡抗体阳性数随着日龄的增加而增多。

2.3 风险因素分析 根据调查问卷结果，对12个假定风险因素进行单因素分析，结果显示“是否自购除政府要求强免疫苗外的疫苗”具有统计学意义(P<0.05)，OR=3.750(95%CI：1.011～13.908，P=0.044)，自购的疫苗主要为鸡传染性法氏囊、鸡传染性支气管炎、减蛋综合征等，其余11个变量均不具有统计学意义(P>0.1)(表3)。经Mantel-Haenszel分层分析发现，在“是否超剂量免疫”分层条件下，“是否自购除政府要求强免疫苗外的疫苗”调整后的OR=3.643(95%CI：0.976～13.603，P=0.054)，将调整前后的OR值进行比较，差值小于0.5，因此不将“是否超剂量免疫”列为混杂因素，不对“是否自购除政府要求强免疫苗外的疫苗”风险因素判定造成影响。

表3 J亚群禽白血病单因素风险因素分析

3 讨论

本调查风险因素分析结果显示，“是否自购除政府要求强免疫苗外的疫苗”为蛋鸡场感染禽白血病的一个风险因素，OR=3.750(95%CI：1.011～13.908)，推测由于鸡的疫苗大多是用鸡胚或相应的细胞培养制备的，禽白血病病毒可以通过种蛋垂直传播，可能污染活疫苗，且部分养殖场自购疫苗的渠道不明，加大了购买到污染疫苗的风险，因此疫苗外源病毒的检测是防控禽白血病的一个关键。

本次调查的42个规模蛋鸡场中，有一半以上蛋鸡场存在J亚群禽白血病感染，且多家阳性场有相同的引种来源，作为垂直遗传病，引进携带禽白血病病毒的雏鸡仍是商品代蛋鸡场感染禽白血病主要的风险因素。虽然J亚群禽白血病主要通过种蛋持续或间歇性排毒，垂直传播给下一代，造成子代鸡群的免疫耐受，但根据本次流调中年龄分布数据，产蛋高峰期、淘汰前蛋鸡的抗体阳性水平逐步上升，不排除存在水平传播的可能。

建议安顺市的商品代蛋鸡场在今后要加强引种管理和场内生物安全管理，提高蛋鸡免疫力，避免因禽白血病感染对蛋鸡生产性能造成的影响，减少经济损失。

本次调查采用的方法是横断面研究，仅代表一个时间段内的研究调查结果，同时蛋鸡的饲养时间相比大型牲畜较短，建立起的关联性不一定是因果联系；由于实际情况限制且可接受绝对误差(10%)设置较大，本次调查的蛋鸡场数量(42个)和场内抽样数量(60羽)有限，样本量较少，存在随机误差和选择偏倚，加之调查问卷存在设计缺陷，因此风险因素分析的结论具有一定的局限性。