黑果腺肋花楸的组织培养快繁技术研究

张伟

（淄博市林业保护发展中心，山东淄博 255000）

黑果腺肋花楸别称“不老莓”，是一种从国外引入的蔷薇科、腺肋花楸属灌木浆果果树，富含花青素、维生素、锌、镁等各种不可人工合成素，具有园林欣赏、药用、食用等价值。黑果腺肋花楸种子收集、处理困难，耗时长，扦插成活率低，成本高，目前常采用组织培养繁殖方式进行培育，以在短期内解决苗木紧缺的问题。就黑果腺肋花楸的组织培养快繁技术展开分析，以期为黑果腺肋花楸的规模化生产提供参考。

1 黑果腺肋花楸的概述

1.1 化学成分和药理作用

黑果腺肋花楸果实呈紫黑色，果肉暗红，味甘色美，富含高浓度的黄酮类化合物，抗氧化活性强，主要抗氧化成分为矢车菊素3-O-β-D-半乳糖苷。这类成分抗氧化性高于蔓越莓和蓝莓。除黄酮类化合物外，还包括香草酸、龙胆酸、阿魏酸、奎宁酸、对香豆酸等有机酸[1]；种子油富含甾醇类化学物（0.12%），主要有β-谷甾醇、油菜甾醇等。此外，果实中还含有果胶、叶酸、维生素C 等各类营养物质，因此，黑果腺肋花楸在降血糖、抗癌、抗炎等方面具有显著作用。

1.2 生长特性

在年降水量500～600mm 的区域，黑果腺肋花楸树高1.5～2.5m。在年降水量超过600mm 的区域，树高3m。栽种前2a，主要积累有机物，不开花，不结果；第3a开始，萌生侧枝（一级枝），随后二级枝生出三级、四级枝，第4a 进入结果期。无论春季萌动或停止发育，黑果腺肋花楸都早于同科树种，5 月下旬是枝条生长旺期，新梢生长缓慢，8 月上旬新梢停止生长[2]。基于生长特性分析，黑果腺肋花楸的侧芽、顶芽都可结果。一般在栽种2 年后，部分植株结果，果实于5 月发育，2 个月成果，3个月成熟。黑果腺肋花楸抗寒性、抗旱性都较强，在温度低于-40℃、年降水量超过500mm 的地区均可正常生长。

1.3 应用和栽培现状

1.3.1 应用现状。园林苗木是黑果腺肋花楸的主要用途，其花、枝、果等均具有观赏价值。花为白花，花期花朵锦簇，成花能力强，时间长达3 周；夏季叶片碧绿，有光泽，秋季变为红色，色彩艳丽；果实颜色同样随着季节而变化，夏季为绿色，初晚秋为红色、紫色。同时，树型优美，株型集中，自然成球。在东亚和欧美地区，黑果腺肋花楸广泛用于园林绿化中，可丛植、庭院种植，也可混植于花间。另外，还用于森林公园、城市绿化等方面，比如栽种于公路、街道两侧形成花篱。

1.3.2 栽培现状。黑果腺肋花楸产自美国东北部，在欧洲已有近百年的引种历史，朝鲜、加拿大等国家均有引种栽植。1946-1947 年，黑果腺肋花楸在前苏联普及，在日后的10 年快速推广，种植面积高达9000hm2。我国引入黑果腺肋花楸已有30 余年，1989 年辽宁省首次从朝鲜引入该品种，开启了我国对黑果腺肋花楸的研究。1998 年，从俄罗斯引入品种；2001 年，辽宁省研究所（干旱地区造林）承担“948”项目，从美国引入15 个优良品种，其中包括8 个黑果腺肋花楸。2005 年，项目验收通过，为国内黑果腺肋花楸的开发利用打下基础[3]。随后几年，山西省、鞍山市、黑河市等先后展开黑果腺肋花楸引种栽培研究，截至2014 年，河南、吉林、山东、河北等12个省均在种植黑果腺肋花楸，栽培面积达133.3～166.7hm2。

2 黑果腺肋花楸的组织培养快繁技术研究

2.1 试验材料

试验材料来源于当地研究院的黑果腺肋花楸，已培育2～3 年，剪取幼嫩枝条作为外植体。

2.2 试验方法

2.2.1 外植体消毒。去掉外植体叶片，清水冲洗2h；剪掉茎段，切割成3～5cm 的材料；用洁而灭溶液浸泡，3min后流水冲洗30min。无菌条件下酒精浸泡30s，然后用升泵（0.1%）和加入吐温的溶液浸泡7min，无菌水冲洗5次，切成1.0～2.0cm 的单芽备用。

2.2.2 培养基筛选。（1）诱导培养基，取MS 为培养基，添加不同浓度的激素配制诱导培养基。其中，6-BA 浓度分别为 0.3mg/L、0.3mg/L、0.6mg/L、0.6mg/L、0.9mg/L、0.9mg/L，NAA 浓度分别为0.1mg/L、0.2mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L，培养温度（25±2）℃，每天光照15h，光照强度2000Lx；（2）增殖培养基，在无菌条件下，将培苗切成1cm 茎段放于培养基中，6-BA 浓度分别 为 0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L，NAA浓度分别为 0.1mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L、0.5mg/L，培养温度（25±2）℃，每天光照15h，光照强度2000Lx；（3）生根培养基，取1/2MS 为培养基，添加不同浓度的激素配制生根培养基，添加IBA（0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L）、生根粉ABT（2mg/L、4mg/L、6mg/L）和NAA（0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L），30d 后观察生根情况，统计各项指标[4]。上述培养基均添加琼脂粉、蔗糖，分别为6g/L、30g/L，pH 值5.8。

2.2.3 生根苗驯化移栽。当培苗长至5cm，苗根长出1.5cm 后，将生根瓶苗放在自然光下练苗2d，打开封口膜，湿度≥60%，温度15～26℃，向瓶内喷水，以叶片湿润为宜。2d 后取出生根苗，用自来水冲洗根部，防止移栽后出现烂根，移栽至由高锰酸钾消毒的育苗穴盘中，内放蛭石和草炭灰，喷洒增腾抑制剂（10%），浇水、庇荫，光照1500Lx，30d 后移至室外养护，逐步撤掉遮阳网，记录成长情况。驯化移栽基质配比见表1。

表1 培苗驯化移栽基质筛选试验设计

3 结果与分析

3.1 黑果腺肋花楸的诱导培养

3.1.1 不同花楸部位芽的诱导分化。由表2 可知，黑果腺肋花楸不同部位在培养基（诱导）中接种15d 后，芽萌发，茎尖生长快速，20d 后芽长至2～3cm，幼嫩茎段、茎尖诱导率均超于90%，而半木质化茎段诱导率仅为50%。

表2 不同取材部位的芽诱导情况

3.1.2 诱导培养结果。由表3 可知，不同激素配比对萌芽率、芽生长情况的影响比较大，其中1、2 号的萌芽率最高，但萌芽后长势不好，苗不粗壮，影响增殖培养；5、6号腋芽生成愈伤组织，生长状况不好，可能和激素过量有关[5]；3、4 号芽生长良好，其中4 号萌芽率最高。可见，最佳诱导培养基为MS+6-BA 0.6mg/L+NAA0.20mg/L+蔗糖35.0g/L+琼脂8.0g/L。

表3 不同激素浓度对腋芽诱导的影响

3.2 黑果腺肋花楸的增殖培养

3.2.1 不同6-BA 浓度对增殖的影响。由表4 可知，在NAA 浓度相同时，6-BA 浓度处于0.1～2.0mg/L 范围内，随着6-BA 浓度的增加，培苗增殖系数呈现先升高后降低的趋势。当6-BA 浓度为1.0mg/L 时，处于最大值。同时，植株干重、鲜重、株高均在1.0mg/L 浓度时达最大值，植株长势良好，叶片伸展。当6-BA 浓度增至1.5mg/L、2.0mg/L 时，增殖系数降低，植株出现严重的玻璃化现象。总的来讲，黑果腺肋花楸增殖生长最合适的6-BA 浓度为1.0mg/L。

表4 不同6-BA 浓度对黑果腺肋花楸增殖的影响

3.2.2 不同NAA 浓度对增殖的影响。由表5 可知，当6-BA 浓度为1.0mg/L 时，随着NAA 浓度升高，增殖系数先下降、后升高，在NAA 浓度达0.5mg/L 时，增殖系数处于最大值。同时，植株干重、鲜重、株高也高于其他浓度[6]。当NAA 浓度为0.4mg/L 时，植株近根部出现愈伤组织，长势差，增殖系数下降。总结来讲，黑果腺肋花楸增殖生长最合适的NAA 浓度为0.5mg/L。

表5 不同NAA 浓度对黑果腺肋花楸增殖的影响

3.3 黑果腺肋花楸的生根培养

由表6～7 可知，培养基浓度对黑果腺肋花楸生根具有一定的影响。随着浓度的增加，平均根长、根数和生根率呈增长趋势。分析结果显示，培养基1/2MS+ABT6.0mg/L 的根系最发达，生根率达100.00%。

表6 NAA 和IBA 配比对黑果腺肋花楸生根的影响

表7 ABT 浓度对黑果腺肋花楸生根的影响

3.4 黑果腺肋花楸培苗驯化

由表8 可知，将培苗移栽至育苗穴盘中驯化30d后，1、2、3 基质配比存活率均在80%以上，其中2、3 基质配比存活率高于90%，植株长势好，根系发达。综合各项指标，黑果腺肋花楸适宜的培苗基质为蛭石：草炭土=2∶3。

表8 黑果腺肋花楸培苗驯化移栽基质筛选设计

4 结语

综上所述，黑果腺肋花楸树型美观，果实可食用、药用，应用前景广阔。利用组培方式繁育不受环境、季节等方面的限制，可缩短植株的生长年限，提高繁殖系数。通过试验设计，得出以下结论：（1）将幼嫩茎段、茎尖作为外植体，放于酒精和吐温下消毒，接种于诱导培养基MS+6-BA 0.6mg/L+NAA 0.20mg/L+蔗糖35.0g/L+琼脂8.0g/L 中，诱导率均大于90.00%；（2）最佳增殖培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L，苗木长势良好，基部产生丛生芽；（3）最佳生根培养基为1/2 MS+ABT 6.0mg/L，生根率100.00%，根系发达；（4）生根苗驯化后移栽到装有蛭石、草炭土（2∶3）的育苗穴盘内，成活率高达98.20%。