非小细胞肺癌中ALK、KRAS蛋白表达及其临床意义

桑 梓 刘晓会 黄晓宇 耿明飞

肺癌是常见的恶性肿瘤，在全球发病率与死亡率均居于首位，且呈快速增长趋势[1]。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是常见的肺癌类型，占所有肺癌的80%～85%，具有预后差、早期诊断难等特点[2-3]。NSCLC大多数在发现时已为晚期，主要采用常规化疗治疗，但化疗易导致NSCLC患者免疫功能低下以及不良反应发生[4-5]。间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)是一种跨膜受体酪氨酸激酶，属于胰岛素受体超家族。ALK融合突变也是治疗 NSCLC 新的分子靶点，但是部分患者会出现耐药性，不适合分子靶向治疗[6]。鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)在许多不同病理类型的肺癌中的表达明显增高[7]。KRAS的基因突变多见于有吸烟史的腺癌及鳞癌患者[8]。本文通过对ALK和KRAS在非小细胞肺癌组织中的表达及与临床预后的关系分析，为非小细胞肺癌病情的进一步研究提供数据参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年5月至2019年5月本院收治的非小细胞肺癌患者60例，年龄31～74岁，平均(58.76±8.74)岁。纳入标准：①根据《2018年美国国家综合癌症网(NCCN)非小细胞肺癌临床指南》[9]，经组织病理学或细胞学确诊为局部晚期非小细胞癌；②患者签署自愿受试同意书以及知情同意书。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②合并其他器官严重性病变；③临床资料未收集完整。

1.2 资料收集

记录患者的临床资料，包括年龄、性别、吸烟史、TNM分期等，其中肿瘤临床分期(TNM)根据国际抗癌联盟(Union for International Cancer Control，UICC)/美国癌症联合会(American Joint Committee on Cancer，AJCC)第8版肺癌TNM分期标准[10]进行分期。

1.3 ALK和KRAS检测

所有患者手术切除病灶并按常规固定制作石蜡标本，切成厚约4 μm薄片，采取SP法来进行免疫组化学染色(试剂盒购自美国Santa Cruz公司)，所有步骤均参考说明书进行操作。染色判读[11]：若ALK和KRAS胞核或胞质出现棕黄色颗粒即为阳性细胞。结果均由两位病理科医师在双盲条件下独立判断，其中(-) 和( + )为阴性，( ++)为弱阳性，( +++)为强阳性，弱阳性和强阳性均为阳性。

1.4 随访

对入组对象在治疗结束后开始，每3个月随访一次，随访时间为2年，最后随访日期是2021年5月12日。随访方式包括电话随访、短信随访及回院复查等，观察疾病预后情况。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 ALK和KRAS表达与NSCLC患者的临床资料的关系

ALK、KRAS在NSCLC组织中的阳性表达分别为9例(15.0%)、23例(38.3%)。不同TNM分期患者ALK和KRAS阳性表达差异有统计学意义(P<0.05)，而不同性别、年龄、吸烟状态和肿瘤直径患者ALK和KRAS表达差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 ALK和KRAS表达与NSCLC患者的临床资料的关系/例

2.2 影响非小细胞癌患者预后的单因素分析

所有患者随访2年，生存22例，死亡38例。对预后生存影响因素进行分析，结果表明，肿瘤直径、TNM 分期、ALK和KRAS表达情况是影响非小细胞癌患者预后的相关因素(P<0.05)，见表2。

表2 影响NSCLC患者预后的单因素分析/例

2.3 影响NSCLC患者预后的多因素Logistic分析

多因素Logistic回归分析显示，TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、肿瘤直径>3 cm、ALK和KRAS表达阳性为影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)，见表 3。

表3 影响NSCLC患者预后的多因素Logistic分析

3 讨论

根据2018年WHO统计数据显示，全球新发肺癌病例超过200万人，因肺癌导致的死亡人数超过170万[12]。根据国家癌症中心的统计数据，2013年肺癌新发病例数约为73.28万例，死亡例数约为53.07万例[13]。在我国肺癌的发病率位列所有恶性肿瘤第一位，且近年来患病人数呈现上升和年轻化的趋势[14]，因其预后差等原因，患者5年内的生存率极低，仅为7%～14%[15]。超过85%诊断为非小细胞肺癌的患者的5年生存率低至15.9%[16]。NSCLC的主要治疗方法包括手术、放疗、化疗、靶向治疗等[17]。尽管这些常规疗法取得了一定的成功，但NSCLC患者的预后并没有明显改善，患者术后易出现复发转移，以至于疗效不佳，预后不良[18]。

人类ALK基因位于2p23染色体区段，编码1620个氨基酸的多肽，经过翻译后修饰产生200～220 kDa的成熟ALK蛋白[19]。ALK成熟蛋白是一种经典的受体酪氨酸激酶，包括1个由1030个氨基酸组成的细胞外配体结合域(aa)、1个跨膜域(28 aa)和1个细胞内酪氨酸激酶域(561 aa)[20-21]。多数ALK突变位于激酶结构域内，具有致癌作用。KRAS是人类RAS基因家族的一员，编码1个小的GTPase膜结合蛋白，RAS蛋白充当细胞开关，由细胞外刺激打开，导致RAS的活性GTP结合形式的瞬时形成，从而激活调节基本细胞过程的不同信号通路[22-23]。RAS家族3个成员在细胞中的突变广泛发生在多种人类癌症中，其中KRAS的突变是RAS家族成员中最常见的[24]。RAS家族中大约在30%的人类癌症中发现了突变，这其中也包括肺癌[25]。本研究结果显示在不同TNM分期，ALK和KRAS阳性表达差异有统计学意义，肿瘤直径、TNM分期、ALK和KRAS表达情况是影响非小细胞癌患者预后的相关因素。与目前研究相比，本研究进一步将ALK和KRAS表达对非小细胞癌患者的预后评估进行分析，多因素Logistic回归分析显示，TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、肿瘤直径>3 cm、ALK和KRAS表达阳性为影响NSCLC患者预后的独立危险因素，该结果为进一步开发关于NSCLC预后的检测指标提供了实验数据。

综上所述，本研究结果证实了ALK和KRAS在非小细胞肺癌患者中的表达及其与临床预后的关系，为未来关于非小细胞肺癌的研究提供了一定的数据参考。但是本研究存在一定的局限性，比如纳入样本量较少，且为单中心研究，易对研究结果产生偏移，因此需要进一步扩大样本量、多中心研究来验证结果。