女贞子多糖提取工艺、结构及药理作用研究进展

廖 杰，桑贞琦，秦路平*，赵琦明*

(1.浙江华才检测技术有限公司，浙江 绍兴 311899；2.浙江中医药大学 药学院，浙江 杭州 310053)

木犀科女贞属植物约45种[1]。其中，女贞LigustrumlucidumAit.最早记载于《山海经》，云：“又东北二百里，曰太山，上多金玉桢木。”在《神农本草经》中，女贞被列为上品，并以女贞实入药，功效为“主补中，安五藏，养精神，除百疾，久服肥健，轻身不老”[2]。女贞实又称女贞子、冬青子等，是《中国药典》中记载的常用中药，性味甘、苦、凉，归肝、肾经，主要功效为滋补肝肾、明目乌发[3]。《济急仙方》中记载冬青子捣汁熬膏可用于治疗风热赤眼，此用法在《本草纲目》木部女贞中亦有记载。现代药理研究表明，女贞子具有保肝、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、免疫调节、抗炎和降低高胆固醇血症等多种药理活性[4]。

多糖作为中药的重要组成部分，在中药药效的发挥中起到了重要作用，中药多糖的结构及其药理作用已成为中医药领域的一个研究热点[5]。女贞子中含有丰富的多糖成分，这些成分具有良好的抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等活性作用[6-7]。对女贞子多糖(Ligustrum lucidum polysaccharide，LLP)研究已取得了一系列进展，但目前尚未发现关于LLP的文献综述报道。本文归纳了近年来国内外文献，对LLP的提取纯化技术、结构特征及药理作用等方面进行了全面总结，以期对LLP的研究有一定的指导意义。

文献已对不同产地、不同部位、不同炮制方法、不同采收期的LLP含量进行研究。其中，不同产地或者同一省份不同地区的LLP含量差异均较大，最低1.525%，广东深圳最高9.891%，变化幅度极大[8]。女贞各部位的多糖含量顺序从高到低为：种子、外果皮、中果皮、全果实、内果皮[9]。女贞子各类炮制品的多糖含量从生品、清蒸、盐蒸、醋蒸、酒炙品、黄酒蒸、白酒蒸依次降低，为7.82%～6.06%[10]。侯杰等[11]深入研究了酒制法对女贞子中多糖含量的影响，发现随着酒炖时间从4～24 h不断延长，女贞子中多糖含量逐渐减少，而女贞子中的5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量逐渐增多，可能在加热炖煮的条件下，女贞子多糖水解导致其含量的下降。从8月到12月，不同月份采收的女贞子中多糖含量呈先下降、再缓慢上升趋势，至12月达到最高含量0.73%[12]。综上，女贞子最佳采收期应该在冬至前后，取女贞子生品来提取其多糖的含量最高，不同产地的女贞子中多糖含量的差异可能是由于环境因素引起。

近年来，国内外已报道了多种提取纯化LLP的方法。多糖的提取纯化程序较为复杂，简言之，先将药材烘干，研磨成粉末，经过石油醚脱脂后(脱脂有时会在提取之后进行)，在不同提取方式下选定提取条件处理药材。得到提取液后，对提取液以Sevage法等方法去除蛋白、活性炭等脱去色素，再以一定体积分数的乙醇溶液沉淀，并依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀等方式除去水分，最后将滤渣冷冻干燥得粗多糖。粗多糖再经过阴离子交换色谱柱和凝胶色谱柱分离纯化为精制多糖，整个过程如图1所示。

图1 女贞子多糖的提取纯化工艺

1 女贞子多糖的提取工艺

传统的多糖提取方法主要包括浸提、回流提取和辅助提取方法(如超声提取法和微波提取法)。另有新兴的酶解提取法能更温和且稳定地解离细胞壁，提高药材内活性成分的溶出效率。多糖提取效率的影响因素包括提取料液比、提取温度、提取时间、次数和提取方法自带的参数如超声频率、酶浓度等。表1总结了已有文献中提取参数和纯化步骤对多糖产率的影响。

表1 女贞子多糖的提取纯化工艺

目前，提取所得的多糖含量测定方法有苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法、改良-差示酚硫法三种，其中苯酚-硫酸法简单、高效、灵敏、重复性好，主要用于甲基化的糖、戊糖、寡糖类以及多聚糖的测定，但苯酚具有毒性，且可能诱导某些多糖发生副反应。蒽酮-硫酸法毒性小、副反应少，能测定绝大部分碳水化合物，但稳定性较差，需要现配现用和避光操作[13]。改良-差示酚硫法是一种苯酚-硫酸法的改良方法，此方法减去了多糖以外干扰成分所产生的吸光度，再计算相对吸收系数，能更准确地检测多糖含量，目前已有研究用此方法检测LLP的提取率[14]。此外，ALBALASMEH等[15]利用糖类与浓硫酸反应生成的糠醛衍生物的紫外吸收，建立一种多糖测定的新方法，对广泛使用的苯酚-硫酸方法进行了重大改进，能消除着色步骤并避免与苯酚使用相关的健康和环境危害。

1.1 溶剂提取法

溶剂提取法主要选用水作为溶剂提取多糖，有回流提取和浸提两种方式。邱蓉丽等[16]采取回流提取，分别研究了水提工艺与醇沉工艺，通过浸膏得率和其中多糖含量的比值来评价工艺的优劣，最终确定最佳参数为料液比1∶16，提取2次，每次2 h，滤液浓缩比为1∶3，再以70%体积分数的乙醇沉淀，静置时间6 h，验证所得结果浸膏得率为10.47%，多糖含量52.8%。张明月等[17]以料液比1∶10，提取3次，每次3 h，回流提取粗多糖，通过计算女贞子样品中多糖质量比较工艺参数，最终提取率为1.24%。回流提取属于传统方式，安全简便且应用广泛，但水提回流温度较高，可能会导致部分多糖分解，使得多糖提取率较低。

浸提比回流提取温度低，能更好地保留药材中热敏感的成分，但是浸出效率较低。王阳阳等[18]采取热水浸提的方式对女贞子多糖进行提取，最佳提取工艺条件为料液比1∶20，提取温度75 ℃，提取时间3 h，次数1次，提取率为3.18%。

1.2 辅助提取法

现有的女贞子多糖相关文献中，辅助提取法有微波辅助和超声波辅助两种。微波和超声波能有效加速胞内有效物质的释放、扩散和溶解，增加多糖的提取效率。李彬等[19]利用微波辅助提取，以正交实验优化女贞子中多糖的提取工艺，并对各因素影响多糖提取率的强度进行比较，发现提取时间对多糖提取率的影响最大，其次是提取温度、料液比，最次是乙醇的体积分数。最佳工艺参数：微波处理50 s，料液比1∶20，浸提温度50 ℃，时间50 min，乙醇的体积分数25%，经纯化后提取率达到5.6%。徐平平等[20]采取超声波辅助提取，在超声功率600 W，液料比为60 mL/g，超声时间为10.44 min条件下，平行3次实验，所得平均提取率为3.15%。微波辅助和超声辅助提取法的提取时间均明显低于溶剂提取法，但此类辅助提取法还存在提取力度不均匀的现状，受仪器影响较大。

1.3 酶解提取法

酶法提取由于反应条件相对温和，不会破坏多糖的结构，具有效率高、选择性高等优点，近年来得到广泛关注。酶解提取的步骤一般为将药材烘干，粉碎，加入酶溶液，充分混匀后提取，沸水浴灭活，抽滤，定容即得。影响因素包括酶解时间、温度、酶量和pH值。酶解的方法分单一酶解法和复合酶解法。周旋等[21]利用单一纤维素酶提取女贞子多糖，酶解2 h、温度40 ℃、酶量1%和pH=5.2，优化条件后提取率高达6.58%，此提取率明显高于辅助提取法和溶剂提取法。另有研究使用复合酶(纤维素酶∶木瓜蛋白酶=1∶2)，酶量2%，料液比1∶50，pH值为4，温度为50 ℃，提取1 h，最终得到女贞子多糖提取率15.93%[22]，是目前所有提取方法中的提取率最高者。但是以上两种酶法均未对多糖除杂，其提取率仅供参考，而且酶法为保护酶活性对操作要求较高，存在贮存不易等缺陷。

1.4 超临界萃取法

超临界萃取(Supercritical fluid extraction，SFE)是利用溶剂(流体)在超临界状态与非超临界状态下对溶质溶解能力的巨大差异来实现对目标成分的提取和分离的方法，具有时间短、选择性好、适应性广、绿色环保等优点。有研究将女贞子粉末在萃取压力240 MPa、温度45 ℃、时间1 h的条件下进行超临界流体萃取，能除去女贞子粉末中含有的大量非极性成分，再经过回流提取(料液比1∶10，50 ℃水浴提取1.5 h，提取2次)，所得女贞子多糖杂质少、纯度高，其提取率为3.614%[23]。

2 女贞子多糖的分离纯化

粗多糖中含有蛋白质、色素、水等杂质，需要进一步除杂纯化。脱蛋白作为粗多糖纯化的重要步骤之一，会造成多糖的损耗，对多糖的最终产率有较大影响。目前多糖脱蛋白过程主要采用Sevage法和三氯乙酸法。Sevage法是通过在粗多糖溶液中加入氯仿-正丁醇(4∶1)混合溶液，将游离蛋白变性沉淀，经离心除去沉淀，但是部分多糖也会被沉淀，同时此法难以洗脱少量与多糖结合牢固或被多糖包裹的蛋白质[12]。Sevage法能避免多糖降解，但是效率低下，会消耗大量有机试剂，不适用于高蛋白含量的女贞子多糖。相比之下，三氯乙酸法除蛋白效率较高，但由三氯乙酸的酸性较强，容易导致多糖的降解。万琴等[24]比较了Sevage法、三氯乙酸法和三氯乙酸-Sevage法的脱蛋白效果，兼顾女贞子多糖损失率和蛋白质清除率后，选择三氯乙酸法，所得女贞子粗多糖的多糖含量38.23%、蛋白清除率82.81%。

粗多糖除杂后，经一系列吸附剂和洗脱液进一步收集、透析、浓缩和冻干，可分离成单一多糖，进而研究多糖的平均分子量、单糖组成和结构特征。女贞子多糖的分离多使用DEAE-52等阴离子交换柱和Sephadex G、Sepharose CL-2B、Superdex系列分子筛凝胶柱，经水或不同浓度氯化钠溶液洗脱，得到精制多糖。其原理在于多糖可在水溶液中发生一定程度的电离，离子交换树脂能吸引水中离子化的多糖，交换常数K值愈高，被吸附愈牢；洗脱时，通过增加溶液的离子强度，如改变pH、增加盐浓度，多糖就会被取代而解吸下来，按照洗脱剂的K值不同，分不同区带，得到电离程度不同的多糖。而在分子筛凝胶柱中，大于孔径的多糖分子被阻隔在外水层最早被洗脱，而进入孔径的多糖分子按分子量大小分离成不同的区带，从而得到分子量大小不同的多糖成分[25]。LIU等[26]用Sephadex G-200柱层析分离从金叶女贞LigustrumvicaryiL.中提取的女贞子粗多糖，得到纯化的LVFP。此外，女贞花中也含有大量多糖成分，YIN等[27]将女贞花粗多糖通过DEAE-52纤维素柱层析法初步纯化，分别用0.1、0.2、0.3 mol/L NaCl分离出三种多糖LL-1/2/3。再经过Sephadex G-100柱层析得到LLP-1a、LLP-1b、LLP-2、LLP-3。

3 女贞子多糖的组分分析

多糖是一种重要的生物高分子化合物，分为由同一单糖分子缩合而成的均一多糖和由不同单糖分子缩合而成的非均一多糖。由于多糖结构的复杂性，对多糖组分的精细结构分析仍然十分困难。目前对女贞子中不同类型多糖的研究主要涉及平均分子量、单糖组成和糖链构型。一般采用紫外可见光谱(Ultraviolet absorption detector，UV)、高效液相色谱(High performance liquid chromatography，HPLC)、气-质联用色谱(Gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS)、毛细管电泳(Capillary electrophoresis，CE)、气相色谱(GC)和纤维素板检测多糖的纯度和单糖组成。液相色谱法(Liquid chromatography，LC)、高效凝胶色谱(High-performance gel filtration chromatography，HPGFC)分析平均分子量。通过傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy，FTIR)、核磁共振(Nuclear magnetic resonance，NMR)、原力显微镜(Atomic force microscope，AFM)等技术进行分析检测多糖构型。表2总结了已报道的女贞子多糖的单糖组成和平均分子量。

表2 女贞子多糖的组分分析

3.1 平均分子量

多糖分子量检测在过去一般使用渗透压法、端基法、黏度法和光散射法[31]，但操作复杂，容易产生误差。目前的常用方法是HPGFC、LC和HPLC，需使用分子量已知的标准多糖作为对照进行实验。早期，方玉春[32]使用HPLC测定多糖分子量，将分离得到的LL-1进样后得到一个单一的对称峰，再以标准多糖系列绘制标准曲线，测得该多糖分子量为15 000 Da。战兴晓等[33]采用凝胶色谱法，以葡聚糖为标准多糖，得重均相对分子质量(Weight-average molecular weight，Mw)为10 673 Da及数均相对分子质量(Number-average molecular weight，Mn)为10 721 Da，实验结果计算所得Mw/Mn值约为1.0。Mw/Mn越接近1代表多糖纯度高、相对分子质量集中，由此可知该女贞子多糖为均一多糖。平均分子量的测定会受到原药材、提取分离方法、仪器等的影响，依托谱图及Mw/Mn计算有助于辨别多糖属于均一多糖还是非均一多糖。

3.2 结构特征

多糖具有比蛋白质更复杂的大分子结构，而单糖所具备的多样性、连接方式以及支链的复杂性都是分析路上的重点难题。目前，多糖的主要结构是鉴定的目标，研究主要分析多糖的平均分子量、单糖的类型、比例和连接顺序，以及糖苷键的构型。现有文献中LLP的单糖种类有甘露糖(Mannose，Man)、鼠李糖(Rhamnose monohydrate，Rha)、阿拉伯糖(Arabinose，Ara)、葡萄糖(Glucose，Glu)、岩藻糖(Fucose，Fuc)、半乳糖(Galactose，Gal)、木糖(Xylose，Xyl)、果糖(Fructose，Fru)七种，其中Glu、Ara、Rha为主要单糖。常用的多糖结构分析方法有高碘酸氧化、Smith降解法和甲基化反应[32]。方玉春[32]从女贞子中分离得到的白色粉末状女贞子多糖LL-1，经多种方式分析，包括甲基化反应GM-SM分析、过碘酸盐氧化UV法测定、Smith降解反应GC分析、13C-NMR测定，得LL-1的化学结构为α-D-(1→3)Manp和1、4、6三取代的α-D-Galp组成主链的多糖，侧链上的α-L-Araf位于末端位置，通过分枝点三取代的Gal同主链相联。CE是在高压直流电场作用下，在熔融石英毛细管中根据不同的电泳速度进行分离的一种分析方法。WANG等[34]将1 g LLPS用2 mol/L硫酸在沸水浴和氮气保护下回流10 h，水解为单糖的混合物，稀释至250 mL，再稀释200倍，得20 μg/mL LLPS进行CE分析，发现LLPS中含有Fuc、Glu、Ara和Rha，摩尔比为1.80∶4.58∶2.55∶1.91。徐平平等[35]将粗多糖经Sephadex G-150柱层析并用水洗脱，得到白色粉末状女贞子多糖，再AFM分析，结果显示，分离得到的LL-Ⅰ1、LL-Ⅰ2、LL-Ⅲ分别不同程度地聚集成股，且具有螺旋结构。这种现象可能与聚集体的分子间相互作用和糖链间的氢键缔合有关。

4 药理作用

现代研究表明，LLP具有各种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、保肝、抗衰老、降血糖等。表3选取了有代表性的文献，对多糖提取方式、动物模型、药理作用及作用机制进行了整理归纳。

表3 女贞子多糖的药理研究

4.1 抗氧化作用

脂质过氧化是氧自由基损伤组织的重要方式，氧自由基会使细胞膜脂质成为过氧化脂质，从而分泌出丙二醛(Malondialdehyde，MDA)与细胞成分结合产生脂褐质(Lipofuscin，LF)，而脂褐质会表现在人皮肤表面，是一种衰老的象征。在D-半乳糖衰老小鼠模型的研究中发现，女贞子多糖可以通过清除·OH、提高肝肾组织中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)及谷胱甘肽过氧化物(Glutathione peroxidase，GSH-Px)活力，从而发挥抗脂质过氧化作用[37]。

朱琪等[39]研究了仔猪肝脏相关基因，结果显示女贞子多糖可以提高仔猪肝脏中过氧化氢酶(Catalase，CAT)和CuZnSOD的转录水平，从而清除体内过量的氧自由基。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号通路中的Ras/Raf/MEK/ERK信号通路是目前较为认可的一条通路，它由细胞外信号调节激酶(Extracellular-signal regulated protein kinase，ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)四种重要的蛋白激酶组成，其中ERK调控细胞生长和分化能够起到保护细胞的作用，而P38和JNK在炎症和细胞凋亡等应激反应中发挥重要作用，所以抑制ERK信号通路之后，可以缓解氧化损伤对细胞的损害，如图2。研究发现，仔猪大肠杆菌+女贞子多糖组的肝脏mRNA转录水平ERK1与大肠杆菌组相比显著降低，而女贞子多糖组与对照组相比无明显差异，但P38和JNK基因表达相对较低。综上所述，女贞子多糖对感染大肠杆菌的断奶仔猪起到了保护作用，且对正常仔猪没有不良影响，其作用机制可能与下调MAPK相关信号转录水平有关。

图2 女贞子多糖抗氧化作用机制相关的MAPK信号通路

4.2 免疫调节作用

免疫系统是一套疾病防御系统，研究发现有多种疾病是由于免疫系统紊乱导致的[40]。LIU等[26]利用环磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX/CY)诱导的免疫抑制小鼠模型，发现金叶女贞子多糖可显著提高脾/胸腺指数(Spleen indexes/thymus indexes，SI/TI)，增强中性粒细胞的吞噬功能，激活B、T淋巴细胞，上调血清白细胞介素10(Interleukin-10，IL-10)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平,提高SOD和GSH-px水平，从而缓解CY诱导的肝损伤。近年，JING等[6]研究观察了女贞子多糖对氢化可的松免疫抑制小鼠模型免疫功能的影响，发现其明显增强了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。巨噬细胞在女贞子多糖对脾T、B细胞的增殖反应中也起一定的辅助作用[41]。李璘等[42]研究表明女贞子多糖能增强荷瘤小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，促进荷瘤小鼠脾B、T淋巴细胞的增殖，提高其自然杀伤细胞(Natural killer cell，NK)活性，从而增强免疫抑制状态小鼠的细胞免疫作用，但对正常小鼠的特异性细胞免疫无明显影响。

硒(Se)和维生素E都是抗氧剂，具有活化免疫系统、预防癌症的功效。目前采用叶面喷施Na2SeO3的方法培养出了一种富硒的女贞子，Se在女贞子中含量从原植物的0.03 μg/g提高到0.93 μg/g[43]。邹慧等[44]研究结果显示，Se含量为1.88 μg/g女贞子的多糖成分与普通女贞子对比，SI/TI更高，脾淋巴细胞增殖能力更强，IL-2/4、γ-干扰素(Interferon-γ，IFN-γ)生成更多，但对特异性卵清抗体的生成影响不大。劳雪芬等[45-46]通过体内小鼠实验和体外山羊外周血淋巴细胞实验发现富硒女贞子(1.88 μg/g)多糖能促使细胞分泌的IL-2/4、IFN-γ数量增多或活性增强，进而发挥免疫增强作用。

4.3 抗衰老作用

衰老是一个正常的生理过程，在衰老的过程中，机体会逐渐破坏自身的高分子、细胞、组织、器官等[47]。张振明等[48]利用D-半乳糖造模衰老小鼠，通过检测SI/TI、LF、MDA、SOD和GSH-px水平判断女贞子多糖的抗衰老作用，发现女贞子多糖能显著抑制SI/TI、SOD和GSH-px活性的下降,抑制心肝肾组织中MDA和脑组织中LF含量的升高，其机制可能与增强免疫功能、清除氧自由基和活性氧、提高机体抗氧化酶活力有关。这与上文抗氧化作用和免疫调节作用中含量变化一致，故而推测女贞子多糖的抗衰老作用可能是通过抗氧化和调节免疫系统来实现。

4.4 抗肿瘤作用

目前研究已经发现多种从植物中分离得到的多糖具有良好的抗肿瘤活性，而且无明显毒副作用[49]。李璘等[50-52]研究报道了女贞子多糖的抗肿瘤活性，通过检测瘤重、T淋巴细胞增殖情况、NK细胞活性，实验结果显示女贞子多糖能提高机体免疫、改善机体免疫能力，抑制小鼠肉瘤(S180)和肝癌(H22)生长，抑制黑色素瘤细胞B16BL6黏附能力，提高淋巴瘤细胞膜抗原性，从而发挥抗肿瘤作用。马秀梓等[7]对比了枸杞多糖、当归多糖和女贞子多糖的抗肿瘤活性，以用于人白血病K562细胞48 h后的抑瘤效果，其中女贞子多糖的作用最为显著。

4.5 保肝作用

女贞子作为补益肝肾的养阴药，其多糖的保肝作用得到了初步研究。肝细胞变性或坏死、细胞膜破裂或膜通透性升高都会导致谷丙转氨酶(GPT/ALT)、谷草转氨酶(GOT/AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)及碱性磷酸酶(AP)进入血液系统，使得血清中此类酶浓度升高。吕娟涛等[53]以CCl4致肝损伤小鼠为模型，发现女贞子多糖可对抗肝损伤小鼠血清ALT、AST、γ-GT、AP和肝指数(Hepatic Index，HI)的升高，具有明显的对抗肝损伤作用。在同种小鼠模型下，朱琪等[54]研究进一步发现，女贞子多糖不仅可以缓解肝损伤，而且对小鼠生长性能无显著影响。同时，朱琪团队在对女贞子多糖信号通道的研究中发现，女贞子多糖不会影响仔猪肝脏TNF-α的转录表达，而且能降低大肠杆菌攻毒后的转录表达，这表明女贞子多糖对肝组织的保护机理与其抑制急性炎症因子作用相关[39]。

4.6 抗炎作用

许多疾病的发病机制都是由炎症引起的，例如无精子症。在睾丸受到炎症等的侵害时，睾丸支持细胞(Sertoli cell)能通过改变细胞因子的分泌为睾丸提供保护。脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是一种主要的致炎因子，能诱导Sertoli细胞分泌炎症因子，造成炎症损伤。余亮亮等[55]发现女贞子多糖的含药血清可减少细胞的凋亡，对抗LPS造成的SOD、CAT 和 GSH-Px 活性均明显降低和MDA 浓度明显增加，对炎症损伤有保护作用，而且对Sertoli细胞分泌的炎症因子也具有调节作用。进一步的研究发现，女贞子多糖的含药血清可以明显减轻LPS对Sertoli细胞能量代谢关键酶，琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase，SDH)和乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase，LDH)的活性损伤，进而有效提高乳酸(Lactic acid，LD)和三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate，ATP)的含量，这可能是女贞子多糖提高细胞增殖、减少细胞凋亡的原因之一[56]。

4.7 其他药理作用

女贞子多糖除了上述活性作用外，还有补血、抗肥胖、降血糖的作用[57-59]。另外，女贞子多糖和菟丝子多糖具有协同抗衰老作用，其机制与调节免疫和抗氧化作用相关[60]。同时，女贞子多糖还可与西药联用增强药效，如吴振奎等[61]发现女贞子多糖与布地奈德联用可显著降低哮喘幼鼠的支气管高反应性，调节免疫细胞数量，减轻肺部炎症反应，抑制氧化应激，具有治疗哮喘的潜力。除女贞果实外，YIN等[27]研究了女贞花多糖对体外血浆凝血的参数：活化部分凝血活酶时间(Activated partial thromboplastin time，APTT)、血浆凝血酶原时间(Prothrombin time，PT)、凝血酶时间(Thrombin time，TT)和纤维蛋白原(Fibrinogen，FIB)，实验分离得到4个多糖，结果显示在体外LLp-1a和LLp-3具有良好的抗凝活性，而LLp-1b具有促凝效果。

5 讨论与展望

女贞子是一种历史悠久，用法多样，疗效卓著的补益类中药，从中提取得到的多糖类成分在畜禽养殖业和医药业中具有良好的应用前景。目前，LLP的研究主要集中于提取分离、纯化、结构分析和药理作用。综合LLP的提取工艺，其中复合酶法提取的效率最高，但也有缺陷，如操作复杂、储存不易等，而其纯化方法繁杂且多糖损失率较大。LLP的结构研究主要在初级结构，对空间构象研究较少。药理作用的研究中LLP具有多种生物活性，包括抗氧化性、抗肿瘤性、抗炎性、保肝作用、免疫调节、抗衰老、补血、降血糖、抗肥胖作用。然而，大多数研究只报告了LLP的细胞或动物体内药理活性，对单个多糖的完整结构研究不足，大部分都处于初步探讨阶段，缺乏对均一性多糖活性的研究，而且其多糖与生物活性之间的关系尚不清楚，仍有许多值得探讨的方面。

因此，为了更好地研究LLP，可采取的措施包括：①通过协同提取的方式平衡各方法的优缺点，提高提取纯化效果，得到量大且优的LLP；②利用网络模型模拟空间构象，更直观地描绘出LLP的立体结构，为研究其高级构象提供思路；③从基因调控、蛋白表达、代谢组学角度等角度探求LLP对疾病的作用机制，为深入研究LLP在动物及人体的生物学作用提供科学依据，有助于进行体内观察和临床研究。综上，本文系统地阐述了LLP提取工艺、结构及药理作用的研究进展，以期为LLP的深入开发和研究提供一些有益借鉴。