中华被毛孢作为饲料添加剂在南美白对虾养殖中的应用

袁慧敏 林嘉敏 邹佳芮 俞灵军 郑永标 福建师范大学生命科学学院 福州 350117

中华被毛孢（Hirsutella sinensis）是冬虫夏草的无性型菌丝体阶段[1]，适合液体培养，并越来越多被当做保健品使用[2]。据报道，中华被毛孢菌丝体具有很多生物活性，如抗肿瘤、抗疲劳、抗氧化、降血糖以及增强细胞免疫功能，在治疗肺肾虚等方面也有良好的疗效[3-6]。目前，通过液体发酵培养中国被毛孢菌丝体来代替天然冬虫夏草得到了广泛应用[7]，菌丝体作为动物饲料添加剂，改善生长性能及提高免疫力等的作用也逐渐被挖掘。邵紫培等[8]在饲料中添加0.1%和0.2%冬虫夏草菌丝体粉末，发现肉鸡外周血T淋巴细胞的数量增加，白细胞吞噬率得到提高，免疫功能得到增强。赵乐乐等[9]用人工培育的冬虫夏草菌丝体（含固体培养基）添加到芦花鸡饲料中，发现可以促进芦花鸡早期的生长发育，改善皮肤的黄度品质，促进芦花鸡的优质生产。

此前，对中华被毛孢深层液体发酵的条件进行了优化[10]。现采用中华被毛孢液体发酵优化试验所得菌丝体作为南美白对虾的饲料添加剂，考察其对南美白对虾生长性能、免疫能力及抗氧化能力的作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料 中华被毛孢（Hirsutella sinensis）菌丝体由本实验室制备。南美白对虾（Penaeus vannamei）购自福清宏峰泰水产养殖公司。南美白对虾0号、1号饵料购自福建大昌生物科技实业有限公司。

1.2 对虾养殖试验方法 在5 m×3 m×1.5 m的水池中对幼虾苗进行培育，饲养期间控制水温为24～29℃，保持水的盐度为6‰，提供24 h充氧。每天上午、下午各投饵1次，试验开始采用0号饵料进行投喂，投饵量为虾苗总重量的1/10，每日递增10%；20 d后，选择体质健康、规格整齐的南美白对虾，设中华被毛孢试验组与对照组，每组设3个平行，进行饲养试验。试验组将5%中华被毛孢菌丝体添加到饲料中，加一定量水混合均匀进行投喂，对照组在基础饲料中加入等量水混匀进行投喂。投饵量为虾苗总重量的1/10，每日递增10%，每天上午、下午各投饵1次。饲养期间保持水的盐度为4‰～7‰，水温控制在23～30℃，提供24 h充氧，饲养试验周期为30 d，结束后进行相关指标测定。

1.3 南美白对虾生长指标测定 对试验前后对虾的体重、体长进行准确测量，统计对虾存活数量，经脱壳去头处理后取对虾肌肉，按以下公式对南美白对虾的存活率、增重率、出肉率、增长率和饲料系数进行计算：存活率=终尾数/初尾数×100%；增重率=(终重-初量)/初量×100%；出肉率=肌肉重/总重×100%；增长率=(终体长-初体长)/初体长×100%；饲料利用率=(终量-初重)/喂食饵料总量×100%。

1.4 南美白对虾免疫指标测定 酚氧化酶、溶菌酶、碱性磷酸酶及酸性磷酸酶活力都是反映对虾免疫能力的重要指标，试验结束后对这些酶活性进行测定。首先从南美白对虾背部抽取血液，冷冻离心后取上层血清，置于-80℃保存，分别测定酚氧化酶和溶菌酶的活力；接着取出对虾肝胰腺，测定酸性磷酸酶、碱性磷酸酶的活力。

1.4.1 溶菌酶活力测定 首先配制0.1 mol/L磷酸钾盐缓冲液，调pH为6.4，用该缓冲液配制溶壁微球菌 （Micrococcus lysoleiklicus）的冻干菌粉悬液（OD570nm≈0.3），冰浴备用，取该悬液600 uL，加入10 uL血清，混匀，测量吸光值（计为A0），37℃水浴条件下反应30 min后，测量吸光值（计为Ae），测量溶菌酶活力（U）=（A0-Ae）/Ae。

1.4.2 酚氧化酶活力测定 配制浓度为0.1 mol/L磷酸钾盐缓冲液，调pH为6.0，再配制浓度为0.01 mol/L的L-dopa，分别取1 mL、30 uL在室温下混匀，酶标仪测量，在OD490nm读数1 h，2 min/次。

1.4.3 碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活力测定 采用检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）进行测定。

1.5 南美白对虾抗氧化指标测定 超氧化物歧化酶、过氧化物酶活力及肌肉中丙二醛含量等抗氧化指标采用检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）进行测定。

2 结果与分析

2.1 中华被毛孢对南美白对虾生长性能的影响试验所得南美白对虾存活率、增长率、增重率、出肉率结果见表1，中华被毛孢试验组的生长性能相对于对照组都有所提高，对虾增重率显著提高30%，饲料系数、存活率差异性显著（P＜0.05），存活率提高了52%，而饲料系数降低了66%，说明中华被毛孢菌丝体对南美白对虾的生长具有促进作用。

表1 南美白对虾的生长指标

2.2 中华被毛孢对南美白对虾免疫能力的影响溶菌酶能够有效杀菌，酚氧化酶帮助伤口愈合、抑制和杀死病原体，而酸性磷酸酶、碱性磷酸酶广泛存在于动物体内，是重要的解毒体系，是反映甲壳动物免疫水平的指标酶。根据表2结果分析，中华被毛孢试验组南美白对虾血液中的溶菌酶活力、酚氧化酶活力分别提高了62.7%、23.9%，碱性磷酸酶、酸性磷酸酶活性分别提高了11.4%、7.85%，相对于对照组差异显著（P＜0.05），表明中华被毛孢菌丝体使南美白对虾的免疫力有所提高。

表2 南美白对虾的免疫指标 U/mg

2.3 中华被毛孢对南美白对虾抗氧化能力的影响试验所得南美白对虾的各个抗氧化指标见表3，结果表明，中华被毛孢组的过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活力相对于对照组差异显著（P<0.05），过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力比对照组分别提高了324.2%、23.4%、35%，而丙二醛含量明显降低。过氧化物酶和超氧化物歧化酶能够有效分解机体代谢产生的活性氧自由基，丙二醛含量可以反映机体过氧化程度，说明中华被毛孢作为饲料添加剂能够增强南美白对虾的抗氧化作用。

表3 南美白对虾的抗氧化指标

3 讨 论

抗生素曾被广泛应用于畜牧和水产养殖产业上，用来治疗和预防各种养殖动物的疾病。但抗生素的广泛应用导致细菌耐药性的出现，如在水产养殖生物体和环境中能够检测到抗生素抗性基因[11]。2004年，根据“预防原则”，欧盟委员会决定禁止抗生素生长促进剂[12]。近年来，世界各国也逐渐意识到抗生素滥用的危害，许多发达国家开始采用无抗养殖方法。2020年，中国饲料行业停止对含有促生长添加剂（中草药除外）饲料的生产，中国开始进入“禁抗”养殖。这些禁令对动物养殖产生了巨大的影响，寻找能够替代抗生素且安全无害并促进牲畜高效养殖的饲料添加剂，成为新的研究热点。

食药用菌含有多糖、黄酮、萜类、生物碱、甾醇类、蛋白质、矿物质、维生素以及多酚化合物等多种营养及药用化学成分[13-14]，是饲料添加剂的主要来源，目前灵芝、银耳、猴头菇、金针菇以及虫草等品种在饲料添加剂上的应用都取得一定进展。文贵辉等[15]研究发现，育肥猪饲粮中添加0.2%灵芝细胞外多糖，可以显著改善育肥猪生长性能、血液指标和免疫功能。彭彦淳等[16]研究表明，以0.3%的比例将灵芝液体发酵物添加到饲料中，可提高抗氧化能力和免疫功能，促进肉鸡优质生产。薛瑞婷等[17]为了研究银耳多糖对断乳仔猪肠道健康的调节作用，以0.3%的比例添加到饲料中，结果表明银耳多糖可以提高仔猪肠道消化酶的活性，改善消化能力，促进肠道菌群平衡。文敏等[18]研究发现，以0.4%的比例将银耳孢子发酵物添加到生长肥育猪的饲料中，可以增强其各个生长阶段的免疫机能，肉质也得到明显提升。陈景杰[19]研究发现，猴头菇多糖对断乳仔猪的生长具有一定的促进作用，可以提高其抗氧化能力、肠道通透性及免疫能力。郭志欣[20]研究发现，金针菇菇脚中的多糖可以显著提高七彩鲑幼鱼的抗氧化能力和免疫力，调节肠道菌群结构和改善生长性能。王轶群等[21]研究发现，以30 g/头·d的量将虫草类真菌发酵物添加到泌乳中期荷斯坦乳牛的饲料中，经过70 d试验发现，可显著提高乳牛乳糖率、非脂乳固体物含量，改善牛乳品质。朱艳芝等[22]在海兰褐蛋鸡产蛋后期的饲料中添加0.01%和0.02%虫草多糖，发现可以改善肠道形态结构，降低料蛋比，当添加0.02%虫草多糖时，蛋鸡平均日产蛋率可显著提高。以上研究表明，食药用菌的多糖等成分可以有效改善动物的生长性能、提高免疫力及改善肠道健康，是较好的饲料添加剂来源。

本研究将中华被毛孢菌丝体以5%比例添加到南美白对虾饲料中，可显著改善生长性能，增强免疫能力和抗氧化能力，是对虾健康养殖饲料添加剂的一种选择，但对其作用机理和活性成分还有待进一步研究。