PTGER4、RUNX1和PTEN在视网膜母细胞瘤中的表达及与组织病理学的关系

张旭 刘曦 杨丹 欧舟 曾韬

视网膜母细胞瘤（Retinoblastoma，Rb）来源于胚胎型光感受器前体细胞，多见于婴幼儿时期，绝大多数患者发病在三岁以内，是儿童眼内恶性肿瘤较为常见的一种［1］。Rb 肿瘤恶化程度高，容易出现全身性转移，对患者的发育及健康造成了严重影响［2］。目前医学尽管在Rb 发病机制的分子和细胞靶点方面取得了一定成就，但是缺乏对其途径的深入了解。相关报道显示［3］，前列腺素E2 受体4（prostaglandin receptor 4，PTGER4）在多种癌细胞中呈现异常表达，还与非小细胞癌的侵袭与生长具有紧密关系；矮小相关转录因子（runt⁃related protein，RUNX1）在许多肿瘤中发挥致瘤或肿瘤抑制作用；第10 同源染色体丢失性磷酸酶⁃张力蛋白基因（Phosphatase and tensin homolog，PTEN）是一种新的肿瘤抑制基因，与肿瘤的发生、发展密切相关，产生的PTEN 蛋白具有脂质磷酸酶活性和蛋白硫酸酶活性。本文旨在研究PTGER4、RUNX1、PTEN 在Rb中的表达及与组织病理学的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年5月至2020年6月四川省宜宾市第二人民医院收入行手术治疗的88 例Rb 患儿的视网膜组织标本作为研究组，其中男性49 例，女性39 例，平均年龄为（2.13±0.84）岁。纳入标准：①均符合视网膜母细胞瘤的诊断标准［4］，且术后病理检查确诊；②临床病历资料完整无缺漏；③均为单眼发病；排除标准：①有血液系统疾病者；②有其他恶性肿瘤者；③有心、肝等脏器功能异常者；④拒绝检查或未完成相关检查的患者。

另选取62 例因外伤摘除眼球的正常视网膜组织作为对照组。62 例因外伤摘除眼球的患儿经检查证实无任何肿瘤性疾病，其中男性37 例，女性25 例，平均年龄为（2.09±0.81）岁。两组基本资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经院医学伦理委员会批准通过，患儿监护人已签署知情同意书。

1.2 方法

鼠抗人PTGER4 单克隆抗体、鼠抗人RUNX1单克隆抗体、鼠抗人PTEN 单克隆抗体、SP 试剂盒、DAB 显色试剂均购自上海研生实业有限公司。将PTGER4、RUNX1 及PTEN 标本经常规石蜡切片、脱水，根据S⁃P 免疫组化染色法对标本进行检测，整个实验操作过程严格按照说明进行。

1.3 判定标准

由病理科医师在光学显微镜下随机观察5 个视野，要求每个视野至少计数100 个完整的肿瘤细胞。PTGER4、RUNX1 及PTEN免疫组化阳性判定标准［5］：实验结果显示肿瘤细胞胞质或细胞核中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性，反之则为阴性。阳性细胞比例评分：≤5%为0 分，>5%～25%为1 分，>25%～50%为2 分，>50%～75%为3 分，>75%为4 分；染色强度评分：未染色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2分，棕褐色为3 分。染色指数=阳性细胞比例评分＋染色强度评分。染色指数>3 分为阳性；染色指数≤3分为阴性。阳性率=（阳性例数/总例数）×100%。

1.4 随访

患者出院后均进行为期1年的随访（随访截止时间：2021年6月），随访采取门诊或电话随访，直至随访期结束或者患者死亡。

1.5 统计学处理

采用SPSS 22.0 统计软件进行统计分析，以（）表示计量资料，采用t检验；以n（%）表示计数资料，采用χ2检验；采用Logistic 回归分析影响Rb 患者预后的独立危险因素；以P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组PTGER4、RUNX1 及PTEN 表达情况比较

研究组PTGER4、RUNX1 阳性表达率高于对照组，PTEN 阳性表达率低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1、图1。

图1 Rb 中PTGER4、RUNX1、PTEN 表达情况（SP，×400）Figure 1 Expression of ptger4，Runx1 and PTEN in Rb（SP，×400）

表1 两组PTGER4、RUNX1 及PTEN 表达情况比较［n（%）］Table 1 Comparison of the expression of PTGER4，RUNX1 and PTEN between the two groups［n（%）］

2.2 PTGER4、RUNX1、PTEN 表达与临床病理特征的关系分析

PTGER4、RUNX1 阳性及PTEN 阴性患者的视神经受损情况、肿瘤有无转移、是否化疗及病理分型与TGER4、RUNX1 阴性及PTEN 阳性表达患者比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 PTGER4、RUNX1 及PTEN 表达与临床病理特征的关系［n（%）］Table 2 The relationship between the expression of PTGER4，RUNX1 and PTEN and clinicopathological characteristics［n（%）］

2.3 影响Rb 患者预后的单因素分析

随访资料显示，88 例Rb 患者死亡15 例（17.05%），存活73 例（82.95%）。视神经受损、肿瘤转移、未进行过化疗、病理分型（未分化型）为影响Rb 患者预后的单因素（P<0.05）。见表3。

表3 影响Rb 患者预后的单因素分析［n（%）］Table 3 Analysis of single factors affecting the prognosis of patients with retinoblastoma［n（%）］

2.4 影响Rb 患者预后的独立危险因素分析

Logistic 回归模型分析显示，视神经受损、肿瘤转移、病理分型（未分化型）、PTGER4（阳性）、RUNX1（阳性）、PTEN（阴性）为影响Rb 患者预后的独立危险因素（P<0.05）。见表4。

表4 影响Rb 患者预后的独立危险因素分析Table 4 Analysis of independent risk factors affecting the prognosis of patients with retinoblastoma

2.5 三项指标对Rb 患者的诊断价值

PTGER4、RUNX1及PTEN三者联合曲线下面积为0.979，大于三者单独检测（P<0.05）。见表5、图2。

表5 IL⁃35、IL⁃1β 及IFN⁃γ 水平检测对慢性牙周炎的预测价值Table 5 IL⁃35，IL⁃1 β And IFN⁃γ Predictive value of level detection in chronic periodontitis

图2 预测价值曲线图Figure 2 Predictive value

3 讨论

Rb 是一种常见的原发性恶性肿瘤疾病，近年来，随着对该疾病研究的深入，临床上上对于该疾病的治疗方式逐渐多样化，提高了患者的生存率［6］。有研究发现，Rb 的发生发展由多种因素共同作用所导致，其中PTGER4、RUNX1 的激活与PTEN 的失活或缺失之间可能存在相互协同作，从而参与了Rb 的发生发展、转移及浸润等生物学行为［7］。

PTGER4 在血管生成中占据主导地位，多在肿瘤细胞中过度表达，已经在包括肺癌细胞在内的许多癌细胞中得到证实［8］。在许多实验系统中PTGER4 可促进非小细胞肺癌的生长和侵袭，导致患者预后不良，有学者提出可将PTGER4 作为潜在的抗癌治疗靶点［9］。本文研究结果中，PTGER4 在Rb 患者中同样呈现阳性表达，这与既往研究结果相符合［10］。同时在研究中得出PTGER4 阳性表达的患者与PTGER4 阴性表达患者的临床病理特征比较差异有统计意义，说明PTGER4 参与了Rb 的调控。

RUNX1 作为RUNX 转录因子蛋白家族的成员之一，具有调节造血细胞分化、凋亡及自我更新的作用，已经被证实在急性骨髓性白血症中具有重要影响［11］。有文献报道，RUNX1 在不同肿瘤细胞中发挥着不同作用，比如在人类乳腺肿瘤中呈现高表达，而在胃癌细胞中表达下调［12］。本文研究结果显示，RUNX1 在Rb 患者中的表达上调，与该疾病的临床病理特征具有一定关系，提示RUNX1 在Rb 的发生发展中具有致瘤作用。

PTEN基因是近年来发现的一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，具有抑制丝裂原活化的蛋白激酶通路的作用［13］。据国内外文献报道，包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌、口腔鳞状细胞癌等多种恶性肿瘤中均存在PTEN基因缺失，认为PTEN基因与恶性肿瘤发生、发展密切相关［14］。本文研究结果显示，PTEN 在Rb 患者中阳性表达率低，这与既往研究结果报道相一致［15］。

通过分析TGER4、RUNX1、PTEN 的表达与临床病理特征的关系，本研究发现，PTGER4、RUNX1阳性患者与PTGER4、RUNX1 阴性患者、及PTEN阴性患者与PTEN 阳性患者之间的视神经受损情况、肿瘤有无转移、是否化疗及病理分型比较差异具有统计学意义，考虑PTGER4、RUNX1、PTEN 的表达与患者的临床病理特征具有一定联系。Logistic 回归模型分析显示，视神经受损、细胞瘤转移、病理分型（未分化型）、PTGER4（阳性）、RUNX1（阳性）、PTEN（阴性）为影响Rb 患者预后的独立危险因素。提示临床对伴有独立危险因素的患者在手术前后采取针对性预防和治疗措施，是改善患者预后的重要举措。

进一步ROC 曲线分析结果显示，PTGER4、RUNX1、PTEN 三者联合曲线下面积为0.979，大于三者单独检测，提示三者联合检测对Rb 患者的具有一定诊断价值。

综上所述，PTGER4、RUNX1、PTEN 在Rb 患者机体中呈异常表达，通过检测三者可为患者的病情及预后评估提供可靠资料。