超声萤火虫成像显示的微钙化与浸润性乳腺癌分子分型的相关性研究

胡大力，鹿 丽，朱亚民，李秀昌

（1.山东第一医科大学第二附属医院超声科，山东 泰安 271000；2.山东省泰安市妇幼保健院超声科，山东 泰安 271000）

乳腺癌是我国女性发病率最高的恶性肿瘤，其临床特征因患者年龄、肿块病理分级、分子分型而异。微钙化多来源于肿瘤对于导管的浸润，故分析肿瘤微钙化的特征性因素对于乳腺癌分子分型具有重要价值。萤火虫成像（micro-pure imaging，MI）作为一种显示肿块微钙化的新途径，通过独特的滤波技术，可将直径0.5 mm 以下的微钙化凸显出来［1］。本研究探讨MI 检测的浸润性乳腺癌微钙化的形态、数量及分布等因素与分子分型的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 前瞻性分析2018 年2 月至2020 年10 月在山东第一医科大学第二附属医院接受手术治疗并经病理证实的浸润性乳腺癌患者62 例（共63 个肿块），术前均行二维超声及MI 检查。62 例均为女性，年龄（53.2±9.7）岁。检查前均未行相关治疗及有创操作。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 仪器与方法 应用配备有MI 成像系统的Toshiba Aplio 500 彩色多普勒超声诊断仪，线阵探头，频率7.5～13 MHz。患者取仰卧位，亦可取左、右侧卧位，双臂上举充分暴露乳房及腋窝。使用常规超声以乳头为中心行放射状多切面扫查。发现肿块后观察其一般特征，以肿块为中心行纵、横、斜多切面扫查，启动MI 成像系统观察肿块内有无微钙化。多次测量求平均值，记录常规超声下钙化点数目、微钙化数目、位置及形态分布，选取最佳图像储存。

微钙化的形态评价：①局限型，病灶内探及少量（＜10 个）微钙化；②弥漫性散在，病灶内检出微钙化数目较多（≥10 个）且分布零散、无序，呈满天星样或分布、排列呈一定规律性；③簇状，病灶内检出较多的微钙化相互聚集成团或簇［2］。微钙化的位置评价：边缘带（肿块边缘及周边5 mm 以内）与内部区。微钙化的分布评价：周边型（边缘带＞内部区）、中央型（边缘带＜内部区）及均衡型（边缘带及内部区均有或无分布）。

1.3 免疫组织化学分析 检测手术切除的标本的雌激素受体、孕激素受体、Ki-67 表达水平及人类表皮生长因子2（human epidermal growth factor receptor-2，Her-2）。其中，以Her-2 细胞膜中是否出现棕黄色或黄色颗粒为判断依据，若出现则为阳性细胞，将其分为4 个等级：0、1+、2+、3+。0 和1+判定为Her-2 阴性，3+判定为Her-2 阳性。2+者则需应用原位荧光杂交方法行Her-2 基因扩增状态检测，基因扩增者为阳性，未扩增者为阴性［3］。最后根据2013 StGallen共识，将不同的免疫组化组合分为Luminal A 型、Luminal B+/-型、三阴型及Her-2 过表达型［4］。

1.4 统计学分析 应用SPSS 19.0 软件进行数据分析，计量资料以表示，组间比较使用单因素方差分析，多组之间两两比较行LSD-t 检验。计数资料以%表示，组间比较行χ2检验或Fisher 确切概率法。相关性分析采用Spearman 或Pearson 相关分析法。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病理类型浸润性乳腺癌的分子分型（表1）63 个浸润性乳腺癌肿块中，Luminal A 型6 个、Luminal B-型28 个、Luminal B+型8 个、Her-2 过表达型9 个、三阴型12 个。病理类型中浸润性导管癌占比最多（38/63），分子分型占比最多的是Luminal B-型（18/63）。黏液癌仅见于Her-2 阳性患者，髓样癌、化生性乳腺癌仅见于三阴型。

表1 不同病理类型浸润性乳腺癌的分子分型 个（%）

2.2 不同分子分型浸润性乳腺癌的临床特征比较（表2）不同分子分型乳腺癌在发病年龄、生产次数、肿块大小、肿块方位及淋巴结转移方面差异均无统计学意义（均P＞0.05）。乳腺癌的分子分型与患者初潮年龄、是否绝经有关，差异有统计学意义（均P＜0.05）；Luminal A 型乳腺癌患者初潮年龄较其他类型小，差异有统计学意义（P＜0.05），且Luminal A型患者发病时大多未绝经。

表2 不同分子分型乳腺癌的临床特征比较

2.3 不同分子分型浸润性乳腺癌微钙化数目、分布、形态的比较（表3，4）不同分子分型乳腺癌微钙化的数目比较，差异有统计学意义（P＜0.05），其中Luminal B+型微钙化数目均值明显多于其他分组，三阴型微钙化数目均值明显少于其他组。

表3 不同分子分型乳腺癌微钙化数目的比较 个（%）

不同分子分型乳腺癌微钙化的分布差异无统计学意义（P＞0.05）。不同分型乳腺癌微钙化的形态差异有统计学意义（P＜0.05），其中Luminal B+型微钙化以弥漫性散在为主，Luminal B-型、三阴型则以局限型为主（图1，2）。

图1 女，64 岁，化生性乳腺癌，伴间叶分化，三阴型。超声示微钙化呈局限型、周边型分布 图2 女，58 岁，浸润性导管癌，局灶见原位癌，Luminal B+型。超声示微钙化呈弥漫性散在、中央型分布

2.4 相关性分析 二维超声显示钙化点数目、MI 显示微钙化数目均与Her-2 阳性呈正相关（r=0.383、0.567，均P＜0.05）；MI 显示微钙化的分布、形态与Her-2 均无相关性（均P＞0.05）。

3 讨论

不同分子分型乳腺癌的生物学演变、治疗方案、预后及疗效都有着极大的不同。Her-2 过表达型和Luminal A 型预后好于其他亚型，若能准确预测分子亚型，可帮助患者及时制订个体化治疗方案，延长生存时间［5］。受超声成像原理及相关技术的限制，常规超声对微钙化的显示不理想，而这一类钙化点的存在与否是临床医师最为关注的。钼靶X 线摄影易漏诊致密性腺体或紧贴胸壁的小病灶，也不能展现病变全貌。与常规超声相比，MI 能明确显示腺体与噪声之间的微钙化，显示更多的钙化灶［（0.7±1.1）个vs.（1.9±1.7）个］［6］，对于可疑聚集性钙化点显示率优于钼靶X 线摄影，且不易受伪影影响。

表4 不同分子分型乳腺癌微钙化分布与形态的比较 个（%）

乳腺癌荷尔蒙协调小组分析118 964 例女性乳腺癌患者，研究表明，月经初潮后乳腺癌风险每年增加1.05 倍，且独立个体增加的幅度很小［7］。随着初潮年龄的减小，乳腺癌的发病率逐渐升高。本研究表明，乳腺癌分子分型与初潮年龄有关，Luminal A 型初潮年龄小于其他分组（P＜0.05）。Crujeiras 等［8］研究表明：Luminal A 型乳腺癌大多未绝经，且乳腺癌的分子分型受体质量指数及是否绝经的影响。

姚娟等［9］的研究结果显示，浸润性导管癌+原位癌易出现在Her-2 阳性的分型中，原因可能是Her-2的阳性表达加速了肿瘤微小血管的生发与侵袭性［10］，进而演变为浸润性乳腺癌。微钙化作为早期乳腺癌的一个非常重要且具有个体化特征的微观病理学表现，成为鉴别早期乳腺癌的独立危险因素［11-12］。

本研究中微钙化数目差异与分子分型相关，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。Luminal B+型的微钙化数目均值最多，三阴型微钙化数目均值最少，与王璇等［13-14］的结论相符。Rashmi 等［15］认为，乳腺癌微钙化数目与Her-2 的表达程度密切相关，在富含Her-2 的肿瘤中钙化现象比其他亚型更常见。本研究微钙化的形态差异与乳腺癌的分子分型有相关性，与Her-2 表达程度无相关性；而微钙化的数目与Her-2 的表达呈正相关，与薛成伟［16］的结论一致。本研究中微钙化的分布与分子分型无相关性。

本研究的局限性在于样本量较小，制约了相关分析的能力；MI 存在假阳性结果，结合二维超声可剔除一部分显示为强回声点的纤维条索及浓缩胶质，但同时也降低了检查的特异性。

总之，MI 作为无创、无辐射反映乳腺癌生物学特性的技术，对浸润性乳腺癌患者个体化治疗方案的选择及预后评估具有一定参考价值。