食品中诱惑红测定方法验证

张艳红，董 浩

（石河子质量与计量检测所，新疆石河子 832000）

关键字：方法验证；诱惑红；检出限；准确度；精密度

诱惑红，国际染料索引称为食用红色17，它是由4-氨基-5-甲氧基-2-甲基苯磺酸经重氮化后与6-羟基-2-萘磺酸钠耦合而成的合成染料。诱惑红是我国在1990 年批准的一批食品着色剂。人工合成色素作为食品添加剂常被用于食品生产加工，它可以增加食品美观和提高人们的食欲，但使用过量会对人体产生有害作用，因此我国规定了诱惑红使用限量和检测方法[1-4]。

《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）规定了汽水、硬糖、糕点和冰淇淋中诱惑红的测定方法，其测定原理是诱惑红在酸性条件下被聚酰胺粉吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法进行分离后，与标准比较定性、定量[5]。

方法验证是指实验室通过核查，提供客观有效的证据证明自身满足检测方法规定要求的过程，即证实该实验室现有的设施设备、环境、人员等条件能满足该方法，适用于实验室新引入的标准方法[6]。方法验证过程中关键的参数取决于方法的特性和可能测到的样品基质的检测范围，至少应测定准确度和精密度。对于痕量化学分析实验室，实验室还应确保获得适当的检出限和定量限。通常情况下定量分析方法验证的参数包括但不限于选择性、线性范围、检出限、定量限、精密度（重复性和再现性）及准确度。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

诱惑红标准物质，批号C10125000，纯度80.0%（德国LGC Labortion）。

UV1750 紫外可见分光光度计（日本岛津公司）。

1.2 方法

1.2.1 标准工作曲线的测定

称取诱惑红标准物质0.012 5 g，用水溶解后定容至100 mL，浓度为100 μg/mL，分别吸取0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL 和1.0 mL于10 mL 比色管中，加水稀释至刻度，其浓度分别为0 μg/mL、2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、6.0 μg/mL、8.0 μg/mL 和10.0 μg/mL， 于500 nm 下 测 定 吸光值[5]。

1.2.2 空白值测定及方法检出限的计算

依据《环境监测分析方法标准制订技术导则》（HJ 168—2020）[7]检出限的一般确定方法如下。

按照样品分析的全部步骤，重复n（≥7）次空白试验，将各测定结果换算为样品中的浓度或含量，计算n次平行测定的标准偏差，按公式计算方法检出限：

式中：MDL为方法检出限，μg/mL；n为样品的平行测定次数；t为自由度为n-1、置信度为99%时的t分布值（单侧）；S为n次平行测定的标准偏差。其中，当自由度为n-1，置信度为99%时的t值可参考表1 取值。

表1 t 值表

1.2.3 精密度的测定

吸取浓度为100 μg/mL 的诱惑红标准溶液0.5 mL 于10 mL 比色管中，加水稀释至刻度，溶液的浓度为5.0 μg/mL，此浓度配制成10 个样品，于500 nm 下测定吸光值，按下式计算其平均值、标准偏差和变异系数（精密度）：

1.2.4 准确度的测定

按照《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）标准规定的方法对样品进行处理，在该样品中加入100 μg/mL 诱惑红标准溶液0.2 mL，按照样品处理方法进行处理，与原样品一同在500 nm 下测定其吸光值，根据标准工作曲线回归方程计算样品中的浓度，然后根据加入标准浓度，计算其回收率。

2 结果与分析

根据《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）、《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）对本实验的线性范围、检出限、精密度和准确度进行相关评价。

2.1 线性范围

根据《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）标准规定准确定量的方法，线性回归方程的相关系数不低于0.99，本实验按照《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）标准规定的测定条件进行测定，其线性回归方程为y=0.058 8x+0.004 9，相关系数为0.999 7，线性范围为0 ～10.0 μg/mL，符合标准规定的要求。标准工作曲线如图1 所示。

图1 标准工作曲线

2.2 检出限

根据《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）规定，食品中诱惑红的检出限为取样量为10 g 时，检出限为25 mg/kg，本实验诱惑红的检出限为0.013 μg/mL，符合标准方法要求。检出限结果见表2。

表2 空白值的测定结果及方法检出限的计算结果

2.3 精密度

根据《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）规定，被测组分含量1 μg/kg 时，实验室内变异系数为30%，10 μg/kg 时，实验室内变异系数为21%；根据《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）规定，在重复条件下获得的2 次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%[5]。本实验测得诱惑红的相对标准偏差（变异系数）为1.35%， 符合标准方法要求。精密度结果见表3。

表3 试样精密度测定结果

2.4 准确度

根据《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）规定，当浓度水平为1 ～100 mg/kg 时，回收率为90%～110%。根据方法条件，本实验测定的加标回收率为93.7%～101.6%，平均值为97.3%，其结果在GB/T 27417—2017 标准规定的范围内，说明本实验条件可行有效。准确度结果见表4。

表4 准确度测定结果

3 结论

按照《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）标准方法规定，对诱惑红标准工作曲线线性范围、空白值最低检出限、精密度、加标回收率的验证，表明该实验室现有的设施设备、环境、人员等条件能满足《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）标准规定的方法，因此本所实验室对《食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）标准规定范围的产品可按照标准规定方法开展检测。另外，对其他用分光光度法测定的项目也可按照本文的验证方法进行方法评价，以此确定该项目实验室能否开展。