雪白睡莲花总黄酮提取工艺优化及其对金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型的治疗效果

刘丹丹，罗 洁，朱怡萱，陈伊静，尼加提·麦力克，李 昊，况 玲，赛福丁·阿不拉，张 伟

(新疆农业大学 动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052)

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)是引起奶牛乳腺炎最主要、最常见的病原菌，其发病率占病原微生物感染总发病率的10% ～ 40%[1-2]。金黄色葡萄球菌所致的奶牛乳腺炎不仅会导致奶牛的淘汰和死亡率增加，还会造成奶牛的产奶量下降、影响乳制品质量，引发一系列食品卫生安全问题，危害消费者的身体健康，同时制约奶牛养殖业绿色发展[3]。目前，治疗金黄色葡萄球菌性奶牛乳腺炎首选的药物仍然是抗生素，但伴随抗生素的大量、不规范使用，细菌出现抗药性、畜产品中药物残留等问题日益显现[4]。因此，探索低毒、环保、高效的抗菌药物具有非常重要的意义。

雪白睡莲花(Nymphaeacandida，N.candida)是睡莲科睡莲属多年生水生植物，主要分布在我国新疆南部。ANTONISAMY等[5]报道睡莲属植物具有抗氧化、保肝、抗菌、降血糖和神经保护等作用。PARIMALA等[6]研究发现延药睡莲种子醇提物对铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性。MAJI等[7]研究发现红睡莲叶水提物对大肠杆菌有一定的抑菌效果，具有抑制体内细菌感染的潜力。黄酮是其重要活性成分之一，其结构复杂、药用价值丰富，具有抗菌、消炎、抑制血小板聚集、抗凝及抗血栓形成等作用[8]。本试验采用响应面法超声波辅助提取雪白睡莲花，通过体外抑菌试验和构建金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型，研究雪白睡莲花对金黄色葡萄球菌性奶牛乳腺炎抑菌抗炎效果，以期为奶牛乳腺炎新药开发和临床治疗奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 菌株与实验动物金黄色葡萄球菌9-14，由新疆畜牧科学院兽医研究所提供。昆明小鼠(雌性，怀孕2～2.5 周，55～65 g)，60只，SPF级，由新疆医科大学实验动物中心提供，许可证号：SYXK(新)2018-0003。

1.2 药品与试剂雪白睡莲花购自新疆维吾尔自治区民族医院。芦丁(HPLC98%)购自上海源叶生物有限公司。BHI培养基、高盐甘露醇琼脂培养基购自青岛海博生物技术有限公司。小鼠TNF-α、IL-6细胞因子ELISA检测试剂盒均购自北京诚林有限公司。其他试剂均为分析纯。

1.3 雪白睡莲花总黄酮提取将雪白睡莲花烘干、粉碎，过40目筛，准确称取5 g样品，在预设条件下(乙醇浓度、超声功率、提取时间、料液比、提取温度)萃取。萃取液经4 000 r/min低速离心5 min后抽滤，减压浓缩烘干得雪白睡莲花总黄酮。

1.4 雪白睡莲花总黄酮得率的测定

1.4.1雪白睡莲花总黄酮标准曲线制作 首先精密称取10 mg芦丁标准品置于25 mL容量瓶中，用体积分数80%乙醇溶解，定容至刻度线，即得芦丁标准品储备液，备用。NaNO2- Al(NO3)3显色法：分别吸取出0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL芦丁标准品储备液至试管中，加入5%亚硝酸钠0.3 mL，混匀静置6 min，加入10%硝酸铝溶液0.3 mL，再次混匀静置6 min，最后加入质量分数4%氢氧化钠溶液4 mL，加水定容至10 mL摇匀，静置15 min，于510 nm 波长下测定不同浓度标准品储备液的D值，绘制标准曲线。

1.4.2雪白睡莲花总黄酮得率的测定 精密称取雪白睡莲花总黄酮10 mg(按照1.3方法制备)，置于25 mL容量瓶中，用80%乙醇定容，作为雪白睡莲花总黄酮待测液。精密量取雪白睡莲花总黄酮待测液1 mL，按照1.4.1方法测定其D值，重复3次，将测得的D值代入标准曲线方程计算雪白睡莲花总黄酮的得率。计算公式：雪白睡莲花总黄酮得率(%)=C×D÷W×100%。其中C，D，W分别代表待测样品总黄酮的溶液浓度，稀释因素及样品量。

1.5 单因素试验

1.5.1乙醇浓度对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 称取5 g雪白睡莲花粉末，将料液比、超声功率、提取时间和提取温度分别固定为1∶30 kg/L、60%、20 min、60℃，考察乙醇浓度梯度分别为60%，70%，80%，90%，100%时对雪白睡莲花总黄酮得率的影响，每个梯度设置3个平行试验。

1.5.2超声功率对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 称取5 g雪白睡莲花粉末，将料液比、提取时间、乙醇浓度和提取温度分别固定为1∶30 kg/L、20 min、70%、60℃，考察超声功率梯度分别为50%，60%，70%，80%，90%时对雪白睡莲花总黄酮得率的影响，每个梯度设置3个平行试验。

1.5.3提取时间对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 称取5 g雪白睡莲花粉末，将料液比、超声功率、乙醇浓度和提取温度分别固定为1∶30 kg/L、60%、70%、60℃，考察提取时间梯度分别为10，15，20，25，30 min时对雪白睡莲花总黄酮得率的影响，每个梯度设置3个平行试验。

1.5.4料液比对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 称取5 g雪白睡莲花粉末，将超声功率、提取时间、乙醇浓度和提取温度分别固定为60%、20 min、70%、60℃，考察料液比梯度分别为1∶10 kg/L，1∶20 kg/L，1∶30 kg/L，1∶40 kg/L和1∶50 kg/L时对雪白睡莲花总黄酮得率的影响，每个梯度设置3个平行试验。

1.5.5提取温度对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 称取5 g雪白睡莲花粉末，将料液比、超声功率、提取时间和乙醇浓度分别固定为1∶30 kg/L、60%、20 min、70%，考察提取温度梯度分别为40，50，60，70，80℃时对雪白睡莲花总黄酮得率的影响，每个梯度设置3个平行试验。

1.6 响应曲面法优化试验将单因素试验结果使用SPSS软件分析，得到对雪白睡莲花总黄酮的得率影响最显著的3个因素，并设定其为自变量，响应值作为因变量，进行3因素3水平试验设计，得到雪白睡莲花总黄酮的最优提取工艺。设计因素水平见表 1。

表1 响应曲面分析因素水平表

1.7 雪白睡莲花总黄酮体外抑菌活性研究

1.7.1菌液的制备 将纯化保存的金黄色葡萄球菌接种于BHI培养基中，37℃摇床培养18 ～ 24 h至对数期。采用平板计数法将细菌悬液调至1×104CFU/mL，4℃保存备用。

1.7.2抑菌圈的测定 按照牛津杯法[9]，取4℃保存菌液0.1 mL，均匀涂布于琼脂培养基上，将3个牛津杯等距放置于铺满菌液的培养基中，杯中加入雪白睡莲花总黄酮、生理盐水、庆大霉素各100 μL，每种药物和菌株做3次重复，以生理盐水作为空白对照组，以庆大霉素作为阳性对照组。37℃恒温培养18～24 h，用游标卡尺测量抑菌圈直径。抑菌效果判定标准：抑菌效果判定标准：R≥15 mm为高敏，10 mm≤R<15 mm为中敏，8 mm≤R<10 mm为低敏，R<8 mm为不敏感，-表示无抑菌圈。

1.7.3最低抑菌浓度(MIC)的测定 采用倍比稀释法进行MIC的测定[10]。在无菌96孔板中每孔加入灭菌肉汤100 μL，第1孔中加入灭菌受试药液100 μL(药液质量浓度0.1 kg/L)，混匀并取出100 μL 加入第2孔，依次到第9孔后弃去100 μL。第10孔不加药，第11孔中加受试药不加细菌，第12孔为空白对照。前10孔中分别加入10 μL菌液混匀，于37℃恒温培养，观察结果。

1.7.4最低杀菌浓度(MBC)的测定 选用已经测得MIC的各组，将组内所有未见浑浊的各孔中各取出50 μL，加入琼脂培养基，用灭菌玻璃涂布棒均匀涂布于培养基中，做3个平行重复，37℃恒温培养18～24 h。以平板上生长的菌落数小于5个菌落的最低药物浓度作为MBC[11]。

1.8 雪白睡莲花总黄酮体内抑菌抗炎活性研究

1.8.1金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎建立 将分娩3～10 d的小鼠腹腔注射麻药舒泰0.05 mL/只，麻醉后将小鼠四肢伸展仰卧保定，用75%的酒精对第4对乳腺周围进行消毒，左手持小镊子将乳头固定，右手持微量注射器，从小鼠第4对乳腺基部进针注射细菌悬液(按照1.7.1方法制备)，50 μL/乳腺[12]。小鼠乳腺炎成模的判断标准：注射细菌24 h后，观察各试验组小鼠饮食量变化、乳腺是否肿胀变硬、对外界刺激的反应、被毛颜色及光泽度变化等，如果小鼠出现饮水和进食量减少、乳腺开始肿胀甚至溃烂、被毛泛黄粗糙杂乱、对外界的刺激反应迟钝，则判为模型构建成功，上述症状不明显则判为未成模[13]。

1.8.2试验分组和给药方案 将60只分娩3～10 d小鼠随机分为4组，分别为空白对照组、模型组、阳性对照组、雪白睡莲花总黄酮组，每组15只。除空白对照组不做处理外，其余各组进行金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型的构建(具体方法参照1.8.1)。模型组、阳性对照组、雪白睡莲花总黄酮组分别灌胃生理盐水、环丙沙星、雪白睡莲花总黄酮，每天 2次，0.3 mL/次，连续给药7 d，空白对照组不做处理。

1.8.3临床症状观察 在给药3，5，7 d，观察各组小鼠的精神状态、饮食和饮水情况。

1.8.4取样与样品处理 在给药3，5，7 d，分别从每个组中随机抓取5只小鼠进行脱颈处死，消毒后将小鼠腹部的皮肤剖开，对第4对乳腺组织的病理变化进行观察。然后迅速摘出其中的一侧乳腺组织，于福尔马林液中固定，时间需超过24 h，之后进行切片染色，观察病理组织学变化。另一侧称质量后，将其放入提前预冷好的研磨器中，加入10倍PBS缓冲液研磨，取研磨好的匀浆液进行倍比稀释，从中取50 μL涂布于甘露醇高盐琼脂培养基，置于恒温培养箱培养48 h，测定乳腺组织中的细菌数量。将剩余的匀浆液4℃离心10 min，移取上清液进行TNF-α、IL-6的含量检测，检测的步骤见说明书。

2 结果

2.1 单因素试验

2.1.1乙醇浓度对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 由图1可知，雪白睡莲花总黄酮得率在乙醇浓度为80%时达到顶峰，之后出现明显的下降趋势。根据相溶原理，乙醇浓度升高的同时，极性升高，雪白睡莲花中的总黄酮随之逐渐溶解出来；乙醇浓度的升高，沸点反而会不断的降低，同样的温度下乙醇浓度越高挥发的越快，可能会出现样品与乙醇无法充分接触，从而使得率呈下降趋势。经分析后得出该因素对雪白睡莲花总黄酮得率影响差异显著，且乙醇浓度为80%时雪白睡莲花总黄酮得率最高，因此，选择乙醇浓度为后续响应面试验的变量之一，同时设置乙醇浓度梯度为70%，80%，90%。

图1 不同乙醇浓度对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

2.1.2超声功率对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 由图2可知，雪白睡莲花总黄酮得率在超声功率为60%时达到顶峰，随后出现明显的下降趋势。可能是超声波机械振动能对植物细胞壁造成破坏，使雪白睡莲花总黄酮不断的溶解出来，而机械振动过强时又会使其结构遭到破坏，从而使雪白睡莲花中总黄酮得率下降。经分析后得出该因素对雪白睡莲花总黄酮得率影响差异显著，且超声功率为60%时雪白睡莲花总黄酮得率最高，因此，选择超声功率为后续响应面试验的变量之一，同时设置超声功率梯度为50%，60%，70%。

图2 不同超声功率对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

2.1.3提取时间对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 由图3可知，雪白睡莲花总黄酮得率在提取时间为20 min时达到顶峰，之后出现明显的下降趋势。可能是随着提取时间的延长，使部分总黄酮发生水解而降低了其提取质量，同时随时间的延长其他杂质也不断的溶解出来，从而使雪白睡莲花总黄酮的得率下降。经分析后得出该因素对雪白睡莲花总黄酮得率影响差异显著，且时间为20 min时雪白睡莲花总黄酮得率最高，因此，选择提取时间为后续响应面试验的变量之一，同时设置提取时间梯度为15，20，25 min。

图3 不同提取时间对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

2.1.4料液比对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 由图4可知，雪白睡莲花总黄酮得率在料液比为1∶30 kg/L 时达到顶峰，之后出现缓慢下降趋势，但总体上没有明显的变化。可能是料液比较小时，由于溶剂与样品接触不充分所致，而料液比较大时，其他非黄酮类化合物杂质逐渐溶解出来，从而使得率呈下降趋势，并且提取时溶剂过多会造成后续过滤和浓缩等步骤难度。经分析后得出该因素对雪白睡莲花总黄酮得率影响差异不显著，因此，雪白睡莲花总黄酮的最佳料液比为1∶30 kg/L，并且固定为后续响应面试验中使用。

图4 不同料液比对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

2.1.5提取温度对雪白睡莲花总黄酮得率的影响 由图5可知，雪白睡莲花总黄酮得率随着提取温度增加而增加，在提取温度为60℃时得率达到顶峰，提取温度超过60℃后，雪白睡莲花总黄酮得率出现下降趋势。可能是温度过高破坏有效成分，从而得率下降。经分析得出该因素对雪白睡莲花总黄酮得率影响不显著，因此，雪白睡莲花总黄酮的最佳提取温度为60℃，并且固定为后续响应面试验中使用。

图5 不同提取温度对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

2.2 雪白睡莲花总黄酮响应面优化分析

2.2.1数据处理及模型拟合 由表2可知，以乙醇浓度(A)、超声功率(B)和提取时间(C)为自变量，以雪白睡莲花总黄酮得率为响应值，采用Design-Expert 8.0.6软件设计3因素3水平试验，得到拟合回归方程为：雪白睡莲花总黄酮得率(Y)=11.95+0.18A+0.23B-0.25C+0.14AB+0.37AC+0.61BC-0.75A2-0.63B2-0.96C2。

表2 响应面法设计与试验结果

表3 响应面二次模型的方差分析

2.2.2响应曲面分析 利用Design-Expert 8.0.6进行3D图形绘制，做出乙醇浓度(A)、超声功率(B)、提取时间(C)对雪白睡莲花总黄酮得率影响的响应面分析图及等高线图。由图6可知，随着超声功率和乙醇浓度的增大，雪白睡莲花总黄酮的得率先表现为升高，达到顶峰后又开始慢慢下降，在超声

图6 超声功率与乙醇浓度交互作用对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

功率为60%、乙醇浓度为80%时，雪白睡莲花总黄酮的得率最高；从等高线图得出，超声功率和乙醇浓度等高线图是一个近圆形，代表这两个自变量间的交互作用对雪白睡莲花总黄酮的得率的影响较弱。由图7可知，随着提取时间和乙醇浓度的增大，雪白睡莲花总黄酮的得率先表现为升高，达到顶峰后又开始慢慢下降，在乙醇浓度为80%、提取时间为21 min 时，雪白睡莲花总黄酮的得率最高；从等高线图得出，提取时间和乙醇浓度的等高线图是一个较明显的椭圆形，代表这两个自变量间的交互作用对雪白睡莲花总黄酮的得率的影响较大。由图8可知，随着提取时间和乙醇浓度的增大，雪白睡莲花总黄酮的得率先表现为升高，达到顶峰后又开始慢慢下降，在乙醇浓度为80%、提取时间为21 min时，雪白睡莲花总黄酮的得率最高；从等高线图得出，提取时间和乙醇浓度的等高线图是一个较明显的椭圆形，代表这两个自变量间的交互作用对雪白睡莲花总黄酮的得率的影响较大。

图7 提取时间与乙醇浓度交互作用对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

图8 提取时间与超声功率交互作用对雪白睡莲花总黄酮得率的影响

2.2.3雪白睡莲花总黄酮最佳提取工艺条件的验证 根据二项回归模型可知，雪白睡莲花总黄酮的最佳乙醇浓度、提取时间和超声功率分别为81.25%、19.74 min、61.7%，预测雪白睡莲花总黄酮得率为11.99%。基于以上优化条件，同时综合实际操作情况，将该工艺做了调整：乙醇浓度、提取时间、超声功率分别为81%、20 min、60%。按照该工艺进行验证试验并重复3次，结果发现雪白睡莲花总黄酮实际得率与预测值接近，平均值为12.00%，重复率好且偏差小。

2.3 雪白睡莲花总黄酮体外抑菌活性研究由表4，5可知，雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌为高敏，抑菌圈直径为(24.07±0.72) mm；雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为3.125，6.250 g/L，表明雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球在体外有明显的抑制作用。

表4 雪白睡莲花总黄酮抑菌圈结果

表5 雪白睡莲花总黄酮的MIC和MBC结果 g/L

2.4 雪白睡莲花总黄酮体内抑菌抗炎活性研究

2.4.1小鼠临床症状观察 在给药过程中，空白对照组小鼠采食、饮水正常，精神良好；模型组小鼠精神萎靡不振，运动、采食和饮水减少，乳腺肿胀溃烂；雪白睡莲花总黄酮组和阳性对照组小鼠精神状态、饮水和采食逐渐恢复，乳腺肿胀程度较模型组变化较小，溃烂程度较轻。

2.4.2乳腺组织内金黄色葡萄球菌数量变化 如表6可见，分别在给药3，5，7 d，与空白对照组对比，模型组小鼠乳腺组织中金黄色葡萄球菌数量呈现出极显著升高(P<0.01)；与模型组对比，阳性对照组、雪白睡莲花总黄酮组小鼠的乳腺组织中金黄色葡萄球菌数量呈现出显著下降趋势(P<0.05)；在3，5 d，与阳性对照组对比，雪白睡莲花总黄酮组小鼠的乳腺组织中金黄色葡萄球菌数量差异不显著(P>0.05)。

表6 乳腺组织中细菌计数结果

2.4.3乳腺组织病理组织学变化 空白对照组：在给药3，5，7 d，乳腺腺泡结构完整，乳腺组织中无红细胞和炎症细胞(图9A、B、C)；模型组：在给药3，5，7 d，乳腺腺泡结构不完整，崩解坏死，乳腺组织中出现大量红细胞和炎症细胞，乳腺结构坍塌(图9D、E、F)；阳性对照组：在给药3 d，乳腺组织结构相对完整，乳腺组织出现大量红细胞和炎症细胞(图9G)，在给药5，7 d，乳腺组织结构相对完整接近空白对照组，乳腺组织中红细胞和炎症细胞明显减少(图9H、I)；雪白睡莲花总黄酮组：在给药3 d，乳腺组织结构不完整，乳腺组织中有大量的炎症细胞，乳腺结构坍塌，腺泡崩解(图9J)；在给药5 d，乳腺组织结构破损不完整，组织中有红细胞和炎症细胞仍较多(图9K)；在给药7 d，乳腺组织结构比较完整，乳腺组织中红细胞和炎症细胞较少(图9L)。

2.4.4乳腺组织TNF-α、IL-6含量的测定 如表7，在治疗过程中，雪白睡莲花总黄酮组和阳性对照组小鼠的乳腺组织中TNF-α、IL-6含量均呈现出下降趋势。与空白对照组对比，模型组小鼠的乳腺组织中TNF-α、IL-6的含量表现出极显著的升高(P<0.01)；与模型组对比，阳性对照组、雪白睡莲花总黄酮组小鼠的乳腺组织中TNF-α、IL-6含量呈现出显著下降趋势(P<0.05)；与阳性对照组对比，雪白睡莲花总黄酮组小鼠的乳腺组织中TNF-α含量差异不显著(P>0.05)。

3 讨论

响应面法是在一系列已有数据结果基础上综合试验设计、构建生物变量曲面模型的方法，具有稳定、有效、操作简便及预测准确等优点[14]。本试验用单因素试验分析了乙醇浓度、超声功率、提取时间、料液比、提取温度5个单因素，确定出乙醇浓度、超声功率、提取时间是对雪白睡莲花总黄酮得率影响最显著的3个因素。在此基础上，采用Design-Expert 8.0.6软件进行3因素3水平的BBD试验设计，优化雪白睡莲花总黄酮提取工艺，经优化后得出雪白睡莲花总黄酮最佳提取条件为：乙醇浓度81%，提取时间20 min，超声功率60%，料液比1∶30 kg/L，提取温度60℃。在此条件下，雪白睡莲花总黄酮实际得率达到12.00%，与模型预测值接近。表明该模型预测性能较好，可以为工业提取提供参考。

奶牛乳腺炎是一种发病原因比较复杂的乳腺疾病，主要由细菌、真菌、病毒、支原体等病原体感染导致，金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的主要致病菌[15-16]。据报道，金黄色葡萄球菌性奶牛乳腺炎不仅会导致奶牛淘汰和死亡的几率增加，还会导致患病奶牛的产奶量及其所产奶汁中的营养物质含量降低，有害物质含量增加，对食品安全造成危害，损害食用者的身体健康，同时制约着奶牛养殖业的绿色发展[17-18]，为此寻找有效防治金黄色葡萄球菌性奶牛乳腺炎及其致病机制的药物或方法，相关动物模型是其开展研究必不可少的重要工具。然而使用奶牛、奶山羊作为动物病理模型进行研究，存在成本过高、实验操作困难等弊端，而小鼠以其成本低、操作简单、个体差异小、方便标准化管理等优势，使用小鼠来构建动物的病理模型已被国内外学者广泛认可[19]。因此本试验选用小鼠为试验动物，建立金黄色葡萄球菌性乳腺炎动物模型，开展雪白睡莲花总黄酮体内抑菌抗炎研究。

在乳腺炎发生过程中，机体的免疫应答中重要的环节是调高机体中的炎症细胞因子[20]。其中，TNF-α和IL-6均是此过程中主要的炎症细胞因子。TNF-α是发生炎症时最早出现的细胞因子，其不仅可以增强巨噬细胞的敏感性，还能加剧炎症介质症状，使炎症细胞快速的向炎症发生部位移动，导致炎症反应更加严重；IL-6不仅可以增强杀伤细胞的活力，还可以促进免疫细胞T细胞和B细胞的产生，能加快炎症细胞进入感染部位的速度[3,21-22]。徐进等[23]研究姜黄素对金黄色葡萄球菌性乳腺炎小鼠血清中的细胞因子含量的影响，结果发现姜黄素可显著抑制小鼠血清中TNF-α、IL-8和IL-6的含量，并可改善模型小鼠的炎症情况。王莹[24]构建金黄色葡萄球菌性乳腺炎小鼠乳腺炎模型，研究发现蒲公英提取物可显著降低模型小鼠血清和组织中的细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β含量，明显抑制炎症细胞向乳腺组织中移动，且可改善乳腺细胞变性坏死的程度。因此，选取乳腺组织炎症因子TNF-α、IL-6，并结合乳腺病理变化，综合验证雪白睡莲花总黄酮的抗炎能力。

本试验在最佳提取工艺条件下提取雪白睡莲花总黄酮，采用体外抑菌试验和构建金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎模型，分析雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌的抑菌与抗炎双重作用。雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为(24.07±0.72) mm；雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为3.125，6.250 g/L，表明雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球在体外有明显的抑制作用；在给药周期内(7 d)，与模型组比较，雪白睡莲花总黄酮组小鼠精神状态、饮食和饮水逐渐恢复；同时观察乳腺组织病理变化，可见明显的炎症细胞和红细胞减少；乳腺组织中金黄色葡萄球菌的数量、TNF-α及IL-6的含量极显著下降(P<0.01)。结果表明，雪白睡莲花总黄酮在治疗金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎时，能够降低炎症因子TNF-α、IL-6的含量，减轻其对乳腺组织的损伤，具有显著的抑菌抗炎作用。

综上，雪白睡莲花总黄酮对金黄色葡萄球菌性小鼠乳腺炎具有较好的抑菌抗炎效果，本试验为新疆地方药材雪白睡莲花总黄酮的进一步研究以及临床治疗奶牛乳腺炎疾病新天然药物的开发提供了依据。