续断一体化工艺优化

吴书亮，王建科*，迮薇薇，李 妍，顾 田

(1.贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025；2.毕节市中医院，贵州 毕节 551700)

续断是传统常用中药，为川续断科植物川续断DipsacusasperWall.ex Henry的干燥根，在秋季采挖，除去芦头及须根，清洗后用微火烘至半干，堆积“发汗”至内部变绿后再烘干[1]，含有三萜皂苷、木通皂苷、马钱子苷、多糖、生物碱等成分[2-6]，具有抗炎、镇痛、抗衰老、抗骨质疏松及修复肝损伤等药理活性[7-11]。在该药材传统加工工艺中，鲜品需先经产地加工得到商品药材后再进行软化、切制、干燥等工序处理形成饮片，其间用水、干燥工序有重复，可能会导致有效成分流失，增加药材加工时间及成本。因此，本实验在2020年版《中国药典》的基础上，将续断产地加工方法与炮制方法进行整合，形成一体化加工工艺，并对其进行优化，以期为该药材相关应用的研究奠定基础。

1 材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪(UltiMate 3000型，美国赛默飞公司)；紫外-可见分光光度仪(TU-1810型，北京普析通用仪器有限责任公司)；电子天平[AUW220D型，岛津仪器(苏州)有限公司]；粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。

1.2 试剂与药物 川续断皂苷Ⅵ(批号GZDD-0006)对照品购于贵州迪大生物科技有限责任公司。续断采自威宁县二塘镇梅花村续断种植基地，经贵州中医药大学生药教研室魏升华教授鉴定为川续断科植物川续断DipsacusasperWall.ex Henry的新鲜根。甲醇、乙腈均为色谱纯；甲醇、乙醇、磷酸均为分析纯；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 饮片制备

2.1.1 优化的传统切制工艺 参考文献[12]报道，取新鲜药材，剪掉须根及芦头，清洗干净，过滤水分，置于60 ℃干燥箱中减重50%，堆积“发汗”以使药材内部变绿，在60 ℃下烘干。加入4倍量水软化6 h，取出，稍润，横切3 mm厚片，在70 ℃下烘干，即得。

2.1.2 一体化工艺(趁鲜切制) 取新鲜药材，除去杂质，洗净，在一定温度下减重至一定程度，堆置“发汗”一定时间，取出，切片，干燥，即得。

2.2 川续断皂苷Ⅵ、总皂苷、浸出物含量测定 川续断皂苷Ⅵ、总皂苷含量测定根据李妍等[12]建立的方法进行，水溶性浸出物、醇溶性浸出物含量测定参照2020年版《中国药典》方法进行[1]。

2.3 一体化工艺优化

2.3.1 单因素试验 通过查阅相关文献资料及前期预实验，发现影响续断趁鲜切制“发汗”后饮片质量的主要因素有药材含水量、“发汗”温度、“发汗”时间、烘干温度等，同时还与“发汗”过程中出现的“霉变”现象有关。因此，本实验以川续断皂苷Ⅵ、总皂苷、浸出物含量为评价指标，对减重程度(A)、“发汗”温度(B)、“发汗”时间(C)、烘干温度(D)进行考察，结果见表1～4。

2.3.2 正交试验 在单因素试验基础上，采用L9(34)表设计正交试验方案，见表5～6。

表1 不同减重程度对各成分含量的影响

表2 不同“发汗”温度对各成分含量的影响

表3 不同“发汗”时间对各成分含量的影响

表4 不同烘干温度对各成分含量的影响

表5 因素水平

表6 试验计划

取新鲜药材，按表6工艺进行加工、粉碎、过筛，测定川续断皂苷Ⅵ、总皂苷、浸出物含量。根据上述指标在药材中的重要性，设定权重分别为川续断皂苷Ⅵ含量35%、总皂苷含量25%、水溶性浸出物含量20%、醇溶性浸出物含量20%，综合评分=川续断皂苷Ⅵ含量隶属度×35%+总皂苷含量隶属度×25%+水溶性浸出物含量隶属度×20%+醇溶性浸出物含量隶属度×20%，结果见表7，方差分析见表8。

表7 试验设计与结果

表8 方差分析

由表7可知，各因素影响程度依次为B>A>D>C，表明“发汗”温度最大，“发汗”时间最小，最优工艺为A3B2C1D1。由表8可知，减重程度、“发汗”温度、烘干温度有显著影响(P<0.05)，而“发汗天数”无显著影响(P>0.05)，并且烘干温度为80 ℃时综合评分最高。因此，最优工艺为A3B2C1D3，即新鲜药材洗净，在60 ℃下减重60%，于(25±2)℃堆置“发汗”3 d，取出，横切2 mm片，在80 ℃下烘干，川续断皂苷Ⅵ、续断总皂苷、水浸出物、醇浸出物含量分别为7.71%、16.27%、53.23%、52.49%。

2.3.3 验证试验 取新鲜药材3批，除去根头和须根，水洗，沥干表面水分，按“2.1.2”项下优化工艺制备 一体化工艺饮片，同时按“2.1.1”项下优化续断传统切制工艺制备3批饮片，按“2.2”项下方法测定川续断皂苷Ⅵ、总皂苷、浸出物含量，结果见表9。由此可知，一体化工艺稳定、合理、可行，并且所得结果高于传统工艺。

表9 验证试验结果(n=3)

3 讨论

本实验所用的续断均采自同一种植基地，保证了药材质量，并且鲜药材较易切制，对机械设备要求不高，在种植基地内即可进行[13]。通过多指标综合来优化续断一体化工艺，符合中药“一药多效”的用药特点，也可体现中医药思维的整体观念[14]。结果显示，最优工艺为新鲜药材洗净，在60 ℃下减重60%，于(25±2)℃堆置“发汗”3 d，取出，横切2 mm片，在80 ℃下烘干，川续断皂苷Ⅵ、续断总皂苷、水浸出物、醇浸出物含量分别为7.71%、16.27%、53.23%、52.49%，经验证试验表明，该工艺稳定合理。

与续断传统切制工艺比较，一体化工艺具有生产周期短、贮存环节少、成品性状佳、成本低、指标成分含量高等优势，同时药材产地加工与炮制的一体化有利于明确其产地及来源，从源头上保证质量[15]。今后，课题组将比较上述2种工艺所得续断饮片的药效学，以期进一步探讨该药材一体化工艺的可行性，并为其生产开发奠定基础。