无尾果活性部位化学成分的研究

高燕萍，钟国跃

(江西中医药大学中药资源与民族药研究中心，江西 南昌 330000)

无尾果ColurialongifoliaMaxim.，蔷薇科无尾果属植物，仅产于我国甘肃、青海、云南、西藏等地，生于海拔2 700～4 100 m的区域，常用于关节炎、关节疼痛等的治疗[1]。魏春华等[2]研究也发现，无尾果具有显著的抗炎、镇痛、解热作用。在前期研究中发现无尾果具有良好的抗类风湿性关节炎活性[3]，进一步研究表明无尾果80%乙醇提取物正丁醇萃取部位为其活性部位。前期，本课题组对其化学成分进行初步研究，从该藏药全草中分离鉴定了三萜、黄酮和苯丙素等类化合物[4-8]。为进一步阐明其抗类风湿性关节炎活性的药效物质基础，本实验继续对其活性部位的化学成分进行研究，从中分离得到11个化合物，所有化合物均为首次从该植物中分离得到，化合物11为首次以天然产物形式分离得到。

1 材料

RY-2型熔点仪(天津分析仪器厂)；Vector 22红外光谱仪、DRX-600 MHz型核磁共振仪(德国Bruker公司)；UV-2550紫外光谱仪、LC-2010AHT液相色谱仪器(日本岛津公司)；MSD-Trap-XCT质谱仪(美国安捷伦公司)；C605中压制备液相色谱仪(瑞士Büchi公司)；硅胶色谱硅胶、柱层析硅胶(烟台芝罘黄务硅胶开发试验厂)；Sephadex LH-20 (Pharmacia公司)；反相硅胶C18(50 μm，日本富士公司)。提取用乙醇为工业试剂；其余化学试剂均为分析纯；液相色谱用为色谱纯。

无尾果药材购自成都荷花池药材市场，经江西中医药大学钟囯跃教授鉴定为蔷薇科植物无尾果ColurialongifoliaMaxim.的干燥全草。

2 提取与分离

无尾果药材约8 kg，用80%乙醇冷浸提取3次，每次3 d，合并醇提液，减压浓缩得浸膏约608 g。将浸膏加水混悬，然后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水部位。正丁醇部位约276 g经硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(100∶0～1∶1)梯度洗脱，各流分经薄层色谱检识、合并，得到13个组分Fr.1 ～Fr.13。Fr.1(4.1 g)经ODS反相柱层析分离，甲醇-水(30∶70～100∶0)梯度洗脱，得到组分Fr.1-1 ～ Fr.1-13，Fr.1-1(256 mg)依次经Sephadex LH-20柱色谱和制备薄层色谱分离纯化得到化合物1(61.5 mg)、2(16.1 mg)。Fr.1-2(226 mg)依次经Sephadex LH-20柱色谱和制备薄层色谱分离纯化得到化合物3(5 mg)、4(7 mg)。Fr.1-4(198 mg)依次经Sephadex LH-20柱色谱和制备薄层色谱分离纯化得到化合物得到化合物5(8 mg)、6(42 mg)、7(29 mg)。Fr.1-6(226 mg)经过Sephadex LH-20柱色谱分离，再用半制备HPLC(甲醇-水50∶50)进行纯化得到8(29 mg)、9(10 mg)、10(3 mg)、11(3 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色粉末。ESI-MSm/z:149.1[M + Na]+，分子式C6H6O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.62(1H，s，H-5)，7.29(1H，m，H-3)，6.58(1H，m，H-4)，4.72 (2H,s,H-2′)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：150.5(C-2)，118.1(C-3)，112.8(C-4)，147.3(C-5)，187.9(C-1′)，65.3(C-2′)。以上数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定为2-(1-oxo-2-hydroxyethyl) furan。

化合物2：无色油状物。ESI-MSm/z:149.3[M+Na]+，分子式C6H6O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.55(1H，s)，7.20(1H，d，J=4.0 Hz,H-3)，6.49(1H，d，J=4.0 Hz,H-4)，4.69 (2H,s)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：152.5(C-2)，123.2(C-3)，110.2(C-4)，160.9(C-5)，177.9(-CHO)，57.8(-CH2OH)。以上数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定为5-hydroxymethyl-2-furancarboxaldehyde。

化合物3：无色油状物。ESI-MSm/z:151.2[M-H]-，分子式C8H8O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.81(1H，s，-CHO)，3.95(3H,s,-OCH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：130.1(C-1)，109.0(C-2)，147.4(C-3)，151.9(C-4)，114.6(C-5)，127.8(C-6)，191.1(-CHO)，56.4(-OCH3)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde。

化合物4：无色油状物。ESI-MSm/z:165.1[M-H]-，分子式C9H10O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：3.93(3H,s,-OCH3)，2.54(3H,s,-CH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：150.6(C-1)，146.8(C-2)，114.0(C-3)，130.4(C-4)，124.3(C-5)，109.9(C-6)，197.1(-CO-)，26.4(-CH3)，56.3(-OCH3)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为4-hydroxy-3-methoxy acetophenone。

化合物5：无色油状物。ESI-MSm/z:195.3[M-H]-，分子式C10H12O4。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：3.93(6H,s,-OCH3)，2.54(3H,s,-CH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：129.0(C-1)，105.9(C-2,6)，146.9(C-3,5)，139.9(C-4)，196.8(-CO-)，26.5(-CH3)，56.7(-OCH3×2)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定为4-hydroxy-3,5-dimethoxy acetophenone。

化合物6：无色油状物。ESI-MSm/z:177.0[M-H]-，分子式C10H10O3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.64(s,H-9)，3.93(3H,s,-OCH3)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：126.6(C-1)，109.7(C-2)，149.6(C-3)，147.5(C-4)，115.2(C-5)，124.3(C-6)，153.3(C-7)，126.7(C-8)，193.8(C-9)，56.2(-OCH3)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为松柏醛。

化合物7：淡黄色油状物。ESI-MSm/z:445.3[M-H]-，分子式C28H46O4。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.69(m,H-2,5)，7.51(m,H-3,4)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：132.7(C-1,6)，129.0(C-2,5)，131.1(C-3,4)，168.0(C-1′,1″)，68.4(C-3′,3″)，39.0(C-4′,4″)，24.0(C-5′,5″)，29.9,23.2(C-6′,6″,7′,7″,8′,8″)，29.2(C-9′,9″)，14.3(C-10′,10″)，30.6(C-11′,11″)，11.2(C-12′,12″)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定为bis(2-ethyloctyl) phthalate。

化合物8：淡黄色油状物。ESI-MSm/z:245.2[M-H]-，分子式C12H22O5。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.69(m,H-2,5)，7.51(m,H-3,4)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：173.6(C-1)，67.4(C-2)，38.9(C-3)，170.6(C-4)，65.9,65.7(C-1′,1″)，30.6,30.5(C-2′,2″)，19.1(C-3′,3″)，14.2,13.7(C-4′,4″)。以上数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定为L-(-)-di-/i-butyl malate。

化合物9：白色粉末。ESI-MSm/z:208.4[M+H]+，分子式C11H13NO3。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：9.50(s,H-10)，1.08(d,J=8.0 Hz,H-12)，1.04(d,J=8.0 Hz,H-13)；13C-NMR(CDCl3,100 MHz)δ：166.3(C-2)，63.4(C-3)，131.5(C-5)，125.2(C-6)，106.6(C-7)，131.6(C-8)，64.2(C-9)，179.4(C-10)，33.8(C-11)，19.4(C-12)，18.4(C-13)。以上数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定为(S)-4-isopropyl-3-oxo-3,4-dihydro-1H-pyrrolo[2,1-c][1,4]oxazine-6-carbaldehyde。

图1 化合物1结构式Fig.1 Structure of compound 1

表1 化合物1的13C-NMR数据(100 MHz,CDCl3)Tab.1 13C-NMR data(100 MHz,CDCl3) of compound 1

4 讨论

“热衮巴”作为常用藏药，藏医用以治疗肝炎、高血压、月经不调及关节炎等症，无尾果为其市场流通量最大、资源也最为丰富的品种之一，但是，有关无尾果的相关研究却较少[18]。为该药材的合理开发利用提供科学依据，本课题组继续对其活性部位化学成分进行研究，从中分离鉴定了11个化合物，所有化合物均为首次从该药材中分离得到，其中，呋喃化合物和生物碱为首次从该属植物中发现。