SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测在早期肺癌的诊断研究

谢斌 周志兵 程江涛 黄慧 谢俊玲 彭峰

肺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，因发病隐蔽且缺乏有效的筛查手段，确诊时超过70%已为晚期，错过最佳治疗时间［1］。早期肺癌和许多其他肺部良性病变均可表现出肺部结节，给肺癌的诊断鉴别带来很大阻力［2］。当前常用的细胞学检测敏感性较低且检测结果存在较大人为因素，因此探究更好的检测方式成为肺癌诊疗中亟待解决的问题［3］。DNA 甲基化是常见的表观遗传机制，参与细胞癌变及发展，现已被逐渐应用于早期癌症的诊断和筛查［4］。SHOX2 和RASSF1A 是在肺癌相关的甲基化特异基因，前者为常见的转录调控因子，后者为抑癌基因［5］。本研究检测患者BALF中的SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化情况，以评估在早期肺癌及良恶性肺小结节诊断中的临床价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料选择2020 年8 月-2021 年3 月我院收肺部病变患者107 例为研究对象，其中经病理活检确认早期肺癌患者72 例（肺癌组），肺部良性病变患者35 例（对照组）。病例纳入标准：（1）肺癌组患者根据《中国原发性肺癌诊疗规范2015》［6］确诊为早期肺癌，对照组患者根据《中国肺部结节分类、诊断和治疗指南2016 版》［7］确诊为肺部良性病变；（2）两组患者CT 检查均显示肺部小结节，且症状类似；（3）生命体征稳定。排除标准：（1）行肺部手术或肺癌相关治疗；（2）肝肾功能不全、严重心脑血管疾病；（3）精神障碍、认知异常；（4）合并其他癌症。全部患者家属均了解本研究，自愿入组并签署知情同意书。肺癌组男性50 例，女性22 例，年龄45-68 岁，平均（58.1±6.3）岁，有吸烟史49 例；对照组男性23 例，女性12 例，年龄38-70 岁，平均（56.4±7.2）岁，有吸烟史23 例。两组患者在性别、年龄、吸烟历史方面无显著差异（P>0.05）。肺癌组中肺腺癌32 例，肺鳞癌17 例，小细胞癌23 例；对照组中肺结核12 例，支气管炎2 例、肺炎16 例、慢阻肺5 例。

1.2 检测方法BALF 样品处理：纤维支气管镜检查患者肺部，使用40 ml 生理盐水冲洗肺部病灶，负压回收。取10 ml 的BALF，10 000 r/min 离心5 min，弃上清。细胞学检查：取沉淀以离心方式冲洗2 次后，沉淀以无水乙醇固定，制作玻片，后行Papanicolaous 染色，进行细胞学检查PCR 检测：取沉淀使用DNA 提取标准试剂盒进行DNA 提取。提取后的DNA 以亚硫酸盐修饰后直接进行PCR 检测。

1.3 统计学方法本次研究使用SPSS 20.0 统计学软件对试验据进行数分析，计量资料用（x ± s），组间对比采用独立样本t检验；计数资料以率表示，两组对比采用卡方检验，P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 肺癌组和对照组SHOX2 基因甲基化阳性率和细胞学检查阳性率比较见表1。

表1 两组患者SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化阳性率和细胞学检查阳性率比较

2.2 并联SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化与肺癌病理分型的关系见表2。

表2 SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化与肺癌病理分型的关系

3 讨 论

随着人们的生活习惯和环境因素的改变，肺癌发病率呈现逐年增长的趋势。肺癌早期没有明显的临床症状且缺乏有效的早期筛查手段，大部分患者确诊时已处于晚期，错过最佳的治疗时期，这也是肺癌死亡率高的重要因素之一。因此，探索无创或者微创的早期肺癌诊断方式具有广阔的应用前景。早期肺癌常表现出肺部结节，但该临床表现特异性较低，在诸如肺炎、肺结核等肺部良性病变也可表现出肺部结节症状，给诊断和鉴别带来困难。当前细胞学检查是临床常用的检查方式，但该方式灵敏度低，受个人操作影响较大，临床诊断效果不理想。当前研究表明，SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化高反应和肺癌早期的发生发展密切相关，对肺癌的早期诊断有较高价值，可作肺癌生物标志物。本研究根据检测患者BALF 中的SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化情况，以探究早期肺癌及良恶性肺小结节诊断中临床价值，取得较好效果。

研究结果显示：肺癌组BALF 中SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化阳性率显著高于对照组，表明肺癌患者SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化水平升高。可能的原因是：SHOX2 基因作为一种转录调控因子，甲基化改变后，染色体稳定性减弱，细胞增殖失控，肿瘤形成；RASSF1A 基因是一种肿瘤抑制基因，启动子区域的高甲基化会导致在肺癌中表观遗传失活，进而肿瘤增殖。故这两种基因甲基化阳性率在肺癌组中显著高于肺部良性病变组。

研究结果显示：SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化任意阳性率显著高于细胞学检查，提示并联SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化检测敏感性高，可作为细胞学检查的补充。可能的原因是：细胞学检查必须要求异型细胞完整，若灌洗液中异型细胞含量低或者细胞脱落后因各种原因被破坏，细胞学检测则易出现漏诊情况；基因甲基化检测则不需要保证细胞完整，游离基因和完整细胞基因均可应用PCR 技术扩增，进而检测出来，受其他因素干扰小。

研究结果显示：SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化检测表现出与肺癌病理分型有相关性，对小细胞肺癌、肺鳞癌、肺腺癌敏感性依次降低。可能的原因是小细胞肺癌和肺鳞癌恶性程度高，侵袭性强，存在高水平SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化，因此检测难度低。

综上所述，联用SHOX2 和RASSF1A 基因甲基化作为早期肺癌的诊断方法，敏感度和特异性均较高，可作为传统细胞学检测的补充，值得临床推广应用。