直肠癌患者外周血及肿瘤组织XKRX基因表达及临床意义

潘华，陈玉星，牛萍

（南阳市第一人民医院，河南 南阳473000）

结直肠癌具有发病率高和高死亡率的特点,是常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年升高，患者预后性较差，临床治疗上没有显著的进展[1]。 因此，迫切需要对直肠癌的发病机制进行研究， 以期寻找到方便有效的诊断和干预指标， 这有助于结直肠癌患者治愈率和死亡率的提高[2]。 在之前的工作中，我们从大分子数据库中筛选出了在结肠癌细胞中高表达的XKRX 基因， 为进行下一步的研究工作做准备。 XKRX 在胎盘和肾上腺中均有表达，属于XK 基因家族[3]。 Xk 位于在红细胞上，是在XK/Kell血型系统中的膜转运蛋白， 与Kell 蛋白通过二硫键连接[4]。Kell 是一种与内皮素-3 转化酶活性相关的ⅱ型膜多糖蛋白，可以表达多种不同的抗原。 目前，国内外对XKRX 与肿瘤的研究很少。 本次研究选取2018 年1 月至2019 年3 月在我院治疗的直肠癌患者110 例， 探讨直肠癌患者外周血及肿瘤组织XKRX 基因表达及临床意义。 现有报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018 年1 月至2019 年3 月在我院治疗的直肠癌患者110 例 （直肠癌组），纳入标准：（1）均经病理学确诊；（2）在我院行手术切除；（3）年龄＞18 岁；（4）患者及家属知情同意。排除标准：（1）术前行放化疗等抗肿瘤治疗；（2）合并有其他系统恶性肿瘤。 同时选取健康志愿者60 例作为对照组， 直肠癌组和对照组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 直肠癌组和对照组一般资料比较

1.2 实验方法 RT-PCR 检测： 将少量组织样本切碎放入1.5 mL ep 管， 加入TRIZol 试剂提取总RNA，逆转录合成cDNA，使用Mx3000P 定量PCR仪进行检测。使用Primer 5.0 软件设计XKRX 引物XKRX -F：GGCACTGAACTGAATCCCCT; XKRX -R：CAGGGTGTAGCCGATCTGTC， 管家基因GAPD HGAPDH -F：CCATCAATGACCCCTTCATTGACC;GAPDH-R：GAAGGCCATGC-CAGTGAGCTTCC 作为对照。 重复3 次。

1.3 统计学处理 统计分析采用SPSS 22.0 软件，计量资料采用（±s)表示，比较使用t 检验，计数资料比较使用χ2检验， 相关性采用Pearson 相关分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 直肠癌组和对照组外周血XKRK mRNA 相对表达量比较 直肠癌组外周血XKRK mRNA 相对表量明显高于对照组，差异比较有统计学意义（P＜0.05），见表2、图1。

表2 直肠癌组和对照组外周血XKRK mRNA 相对表达量比较

图1 直肠癌组和对照组外周血XKRK mRNA 相对表达量分布图

2.2 直肠癌和癌旁组织XKRK mRNA 相对表达量比较 直肠癌组织XKRK mRNA 相对表量明显高于癌旁组织，差异比较有统计学意义（P＜0.05），见表3、图2。

表3 直肠癌组织和癌旁组织XKRK mRNA 相对表达量比较

图2 直肠癌和癌旁组织XKRK mRNA 相对表达量分布图

2.3 外周血XKRK mRNA 相对表达量与临床病理特征关系 Dukes 分期Ⅲ～Ⅳ、肿瘤直径＞5 cm 患者外周血XKRK mRNA 相对表达量明显高于Dukes分期Ⅰ～Ⅱ、肿瘤直径≤5 cm 患者（P＜0.05）。 见表4。

表4 外周血XKRK mRNA 相对表达量与临床病理特征关系

2.4 肿瘤组织XKRK mRNA 相对表达量与临床病理特征关系 Dukes 分期Ⅲ～Ⅳ、肿瘤直径＞5 cm 患者肿瘤组织XKRK mRNA 相对表达量明显高于Dukes 分期Ⅰ～Ⅱ、肿瘤直径≤5 cm 患者（P＜0.05）。见表5。

表5 肿瘤组织XKRK mRNA 相对表达量与临床病理特征关系

2.5 相关性分析 将外周血和肿瘤组织XKRK mRNA 相对表达量进行相关分析，结果显示：外周血和肿瘤组织XKRK mRNA 相对表达量呈正相关（r=0.633，P＜0.05）。

3 讨论

直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率急剧上升。 研究证实，肿瘤的发生和发展与多种因素有关，是由多步骤、多基因突变引起的疾病[5]。 以往的研究表明，基因在结直肠癌的发生、发展和预后中起着重要作用[6]。 探索癌症发生发展的机制，筛选诊断和治疗的分子靶点，对直肠癌患者的辅助诊断和指导用药具有重要的临床意义。

直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,它的发生和发展也有明显的几个阶段[7]。 首先是腺癌和原位癌通常由正常上皮非典型增生形成， 最后浸润和远处转移。 随着分子生物学的发展，直肠癌的研究已经达到分子水平[8-10]。 一些学者发现结肠直肠癌是由各种遗传变异引起的。 目前，大肠癌有四种公认的分子途径: 抗原呈递细胞-β-连环蛋白-Tcf-Myc 途径；HNPCC 途径； 溃疡性结肠炎-非典型细胞增殖-癌症途径；基因过度甲基化导致雌激素失活[11]。 对结直肠癌的发生发展过程的研究，寻找简便有效的观察和干预指标， 对于结直肠癌患者治愈率和死亡率的提高具有重要的科学意义。.因此，在之前的工作中， 我们从数据库中筛选出在结直肠癌中高表达的XKRX 基因， 并开展了下一步的研究工作[12]。 XKRX 是XK 家族的一员，Xk 家族中成员xkr4，xkr8 和xkr9 主要在诱导细胞凋亡的过程中发挥重要的作用， 其作用机制是暴露出细胞中的磷脂丝氨酸， 随后磷脂丝氨酸被巨噬细胞吞噬[13-14]。 据报道， XK 基因缺乏的男性患有迟发性神经细胞增多症，称为McLeod 综合征，临床表现为中枢神经系统，神经肌肉和血液学功能异常，目前关于XKRX 基因表达与细胞凋亡和恶性疾病发生之前的关系还没有得到证实[15]。

本次研究结果显示， 直肠癌组和对照组外周血XKRK mRNA 相对表达量比较， 直肠癌组外周血XKRK mRNA 相对表量明显高于对照组， 差异比较有统计学意义。 说明，XKRX 可能发挥原癌基因的作用，影响结直肠癌的恶性进展。 直肠癌和癌旁组织XKRK mRNA 相对表达量比较， 直肠癌组织XKRK mRNA 相对表量明显高于癌旁组织。 说明XKRX 在结直肠癌患者癌组织中表达上调，这为进一步研究XKRX 在结直肠癌中的作用和机制奠定了基础。 外周血XKRK mRNA 相对表达量与临床病理特征关系，Dukes 分期Ⅲ～Ⅳ、肿瘤直径＞5 cm 患者外周血和肿瘤组织XKRK mRNA 相对表达量均明显高于Dukes 分期Ⅰ～Ⅱ、 肿瘤直径≤5 cm 患者[16]。 结果提示XKRK mRNA 的表达促进了结直肠癌的发生发展，有助于直肠癌的恶性转化。在一定程度上，XKRK mRNA 可能影响结直肠癌的发生和发展。 将外周血和肿瘤组织XKRK mRNA相对表达量进行相关分析，结果显示：外周血和肿瘤组织XKRK mRNA 相对表达量呈正相关。 提示XKRK 的表达与患者外周血和肿瘤组织的发生密切相关，是一种重要的致癌基因，可作为评估直肠癌患者预后的重要指标。

结直肠癌组织中XKRX 基因的表达水平升高，不同病理分化程度的表达存在差异。 XKRX 基因可能参与结直肠癌的发展， 并可能影响癌细胞的迁移能力，这可能成为治疗结直肠癌的新靶点。因此，XKRX 基因表达的检测对结直肠癌的诊断，治疗和预后具有一定的临床意义。

综上所述， 直肠癌患者外周血及肿瘤组织XKRX 基因表达上调，与Dukes 分期、肿瘤直径有关，值得进一步研究。