正交试验法优选二陈汤经方颗粒水提工艺*

张 倩，崔建军

（1.甘肃药业集团科技创新研究院有限公司，甘肃 兰州 730000；2.兰州佛慈制药股份有限公司，甘肃 兰州 730046）

二陈汤被公认为是中医方剂学中祛痰剂之代表方，古籍中同名方剂约有十一首，其中《太平惠民和剂局方》中记载的二陈汤较为常用。二陈汤的立法源于《黄帝内经》《金匾要略》，南北朝至隋唐时期，对痰饮病的认识有了较大发展，不少方剂中出现了半夏、橘皮、茯苓、甘草或生姜也开始作为相对的固定配伍，形成了《局方》二陈汤的原始雏形。

《局方》中二陈汤主药为半橘苓草，与生姜和乌梅同服，以致半夏之毒，增强其化痰止咳之功。而后考虑到乌梅酸涩收敛，与湿痰不宜、与半夏抵触而予以舍弃；也因其属于“药引子”而忽略，临床也多不用。《中医方剂大辞典》中载方名“二陈”的加减方238 条，明确注明乌梅的仅10 条，只占4.8%[1]。《中国药典》2015 版一部收载的传统中成药二陈丸，由陈皮、半夏、茯苓、甘草4 味中药组成，在制法中加入生姜压榨取汁，但并未提及乌梅。因此，可见后世对二陈方中的生姜与乌梅并不强调。而现今方中半夏已由半夏的炮制品姜半夏或法半夏替代，毒性已减。另外，由于二陈是治痰基础方，后世医家常以二陈汤为基础加减变化，形成诸多衍化方，不仅针对湿痰、还可治疗热痰、寒痰、燥痰、风痰。为方便今后随症加减用药，现仅对四味二陈汤的工艺进行研究。

本研究以二陈古籍经方为基础，以传统中药理论为指导，选取水为提取溶剂，保证经典名方原有汤剂的药效；以现代制剂工艺为抓手，将原汤剂或丸剂改变为颗粒剂，以提高中药的生物利用度，增加稳定性，同时，有利于工业生产，且服用方便。中药颗粒适应现今的临床需求，更适应快节奏的生活方式和生产特点，对实现中药产业化、标准化、国际化有着深远的意义。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

DGG-9123A 恒温鼓风干燥箱（上海森信仪器公司）；AL-204 电子天平（万分之一，METTLERTOLEDO）；HH-6 型恒温水浴锅（常州国华电器公司）；UPH-I-10T纯化水系统（成都超纯科技公司）；MH-1000 电热套（北京科伟永兴仪器公司）；SHIMADZU Prominence型高效液相仪；SPD-M20A 型二极管阵列检测器；LC Solution 工作站（日本岛津公司）。

1.2 试药

橙皮苷对照品（中国食品药品检定研究院，含量以93.7%计，批号：110721-201311）；甲醇（色谱纯），水（超纯水），其余试剂（均为分析纯）；研究所使用的法半夏、陈皮、茯苓、甘草原料药材均领自兰州佛慈制药股份有限公司原料库，已由公司质量部检验人员按照中国药典相关要求检验合格，并分别进行了挑拣、清洗、干燥。

2 试验方法

2.1 提取方式的确定

通过查阅文献，对二陈汤中各味药材有效成分进行统计，具体统计见表1，可以得知这些有效成分大多溶于水，同时参考二陈汤的传统制备方式，选择水作为提取溶剂，并通过加热回流方式，进行二陈汤的提取。

表1 二陈汤中药材有效成分

2.2 水提工艺的研究

2.2.1 药材吸水率的测定

按照处方量，分别精密称取四味药材加以混合，然后加入10 倍量的水去浸泡，在此过程中，每隔一段时间（30 min 左右）记录一次药材的浸泡情况，当发现药材完全浸透后将多余的水沥去，计算吸水率（%），平均吸水率为174.7%（表2）。

表2 药材吸水率试验结果

2.2.2 水提条件的优选

根据以往的经验和查阅大量相关文献可知，提取次数、加水量及提取时间在中药水提工艺中起重要作用，为主要因素，而浸泡时间常为次要因素。中药材有效成分提取工艺的优选所采取的最常用方法是正交实验法。所以，分别采用以上3 个重要因素各取3 个水平进行正交试验。正交试验的水平及因素，见表3。

表3 水提工艺水平及因素

每次投料量为处方1.15 倍，即：半夏（制）17.24 g，陈皮17.24 g，茯苓10.34 g，甘草5.17 g，总重量为50 g。

投料后，先加入6 倍水将药材混合后浸泡1 h，然后按照吸水率以及正交试验提取溶剂量补足总水量，接着按照正交表L9（34）相应水平和因素进行提取。以转移率和出膏率（干膏）作为评价指标，对提取效果进行全面的评估。合并提取液，将提取液浓缩至100 mL 以内，精密称定总提取液质量M总，装入容量瓶中备用。

精密量取50 g 提取液，浓缩制成干膏，并计算出膏率。并按照中国药典2015 版陈皮项下橙皮苷含量测定方法，测定橙皮苷含量，计算橙皮苷转移率。

2.3 出膏率（干膏）的测定

精密称取浓缩后总提取液质量M总，并精密称取其中50 g（m湿膏）置于蒸发皿（已恒重，m皿）中，将蒸发皿置于水浴锅蒸干后，放入烘箱中105 ℃干燥3 h，迅速取出蒸发皿并放入干燥器内冷却到室温，迅速称定（m干膏+皿），并按下式计算出膏率（%）（干膏）。

2.4 橙皮苷含量及转移率的测定

（1）色谱条件与系统适用性试验：选取十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱，甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）为流动相，283 nm 为检测波长；且理论塔板数按橙皮苷计算不得低于2 000。

（2）制备对照品溶液：精密称定适量橙皮苷对照品，制成1 mL 含1 mg 甲醇的溶液，即得。

（3）制备供试品溶液：精密移取二陈汤提取液0.5 g（m提取液）于具塞三角瓶中，精密吸取甲醇50 mL，称定重量，超声30 min 使其溶解，放冷，再称定重量，用甲醇补足减重，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

（4）提取液中橙皮苷含量测定法：将供试品溶液与对照品溶液各5 μL 分别注入色谱仪。

（5）制备陈皮药材供试品：精称本品约1 g，倒入索氏提取器中，加80 mL 石油醚（60～90 ℃），加热回流2～3 h，弃去石油醚，药渣挥干，加80 mL 甲醇再加热回流至提取液无色，放冷，过滤，滤液倒入100 mL 称量瓶，用少量甲醇分多次洗涤容器，洗液滤入同一称量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得[2]。

（6）陈批药材中橙皮苷含量测定法：将供试品溶液与对照品溶液各5 μL 分别注入色谱仪。

（7）测定橙皮苷转移率（%）计算公式如下：

2.5 试验结果与讨论

2.5.1 试验结果

正交实验的结果，以橙皮苷转移率和干膏出膏率两个指标进行计算和分析，试验结果见表4。

表4 L9（34）二陈汤正交试验结果（二陈汤正交试验）

此外，通过对该项结果进行方差分析，计算平方和、自由度、均方以及F 值，以此来对试验中的水平及因素对试验记过的影响显著性进行评估。

其中陈皮药材中橙皮苷含量为6.32%，陈皮的质量为17.24 g。

陈皮苷含量测定如图1、图2 所示。

图1 陈皮苷对照品

图2 二陈汤颗粒

查F 检验的临界值FP 表F0.05（2，2）=19.0，F0.01（2，2）=99.0，所以，因素C 为显著（表5）。

表5 二陈汤方差分析表

2.5.2 结果讨论及结论

从以上评估结果可以得知，提取次数对于二陈汤有影响，而加水量和提取时间两种因素对二陈汤无影响，因此，将二陈汤的水提工艺参数定为提取3次、加8 倍水、每次1 小时。

为了验证所制定提取工艺的合理性，进行了3批验证试验及3 批中试放大生产。各项试验结果均表明：二陈颗粒该生产工艺稳定可行，操作较为方便，能够满足大生产的实际操作要求。